湖南医药学院生物医学研究中心
- 作品数:9 被引量:4H指数:1
- 相关机构:西南大学药学院北京协和医学院整形外科医院南华大学基础医学院药物药理研究所更多>>
- 发文基金:湖南省教育厅科研基金湖南省科技计划项目湖南省大学生研究性学习与创新性实验计划项目更多>>
- 相关领域:医药卫生生物学更多>>
- GAS41基因RNA干扰慢病毒载体的构建被引量:1
- 2018年
- 目的 :构建GAS41-shRNA慢病毒载体。方法 :合成GAS41干扰序列,构建GV118-GAS41-RNAi慢病毒干扰载体,连同包装质粒p Helper1.0和包膜质粒p Helper2.0共同转染293T细胞,收集储存病毒颗粒并进行滴度测定。结果 :构建的GAS41干扰慢病毒载体GV118-GAS41-RNAi经PCR和测序鉴定,结果与设计序列相符,收获病毒颗粒,测定滴度为5×108TU/m L。结论 :成功构建了GAS41-shRNA慢病毒载体,为后续进一步研究GAS41基因在视神经胶质瘤(optic nerve glioma,ONG)中的作用奠定了基础。
- 丰昀黄凤鑫王娟杨倩周芸羽彭文婷王光伟
- 关键词:慢病毒载体干扰RNA
- 硝酸甘油耐受大鼠主动脉差异microRNA筛选与生物信息学分析被引量:1
- 2018年
- 目的:筛选硝酸甘油耐受大鼠主动脉差异表达的microRNA (miRNA),并分析预测差异miRNA调控的靶基因及功能。方法:SD大鼠皮下注射给予硝酸甘油连续3 d造成硝酸甘油耐受模型,胸主动脉提取RNA后,应用miRNA测序技术筛选差异miRNA,并用qRT-PCR进行验证。利用生物信息学方法预测差异表达miRNA调控的靶基因,分析靶基因富集的基因功能(gene ontology,GO)和信号通路(pathway)。结果:与对照组比较,硝酸甘油耐受组共有28个miRNA表达发生显著变化,其中16个为已知miRNA,其中12个上调,4个下调(P <0. 05)。qRT-PCR检测了miR-487b-3p和miR-503-5p,变化趋势与测序结果一致。生物信息学分析显示,差异miRNA的靶基因主要富集于蛋白结合和代谢途径。结论:硝酸甘油耐受大鼠主动脉miRNA表达明显变化,这些差异miRNA通过调控靶基因参与硝酸甘油耐受发生。
- 曾振华刘建新曹春芽吴卫华
- 关键词:硝酸甘油耐受MICRORNA生物信息学
- 胞质M-CSF诱导HeLa细胞侵袭和迁移
- 2017年
- 为探讨巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)对人宫颈癌细胞(He La细胞)侵袭和迁移的影响及机制,采用胞质定位空载体p CMV/cyto/myc与重组载体p CMV/cyto/myc-M-CSF稳定转染He La细胞株,建立稳定高表达胞质M-CSF的细胞系(He La-M细胞).经Transwell实验观察胞质M-CSF对He La细胞侵袭和迁移能力的影响,逆转录-聚合酶链式反应及蛋白质印迹检测细胞Rho三磷酸鸟苷酶(Rho GTPases)及基质金属酶的表达,明胶酶谱法检测基质金属蛋白酶2的活性.结果显示,与转染空载体的He La细胞(He La-C细胞)和对照组He La细胞比较,胞质M-CSF的高表达可明显增强He La细胞在体外的侵袭和迁移能力,其机制与Rho GTPases的活化,以及MMP2表达上调及其活性增高密切相关.
- 张蒙夏张蒙夏吴海燕吴海燕唐圣松
- 关键词:巨噬细胞集落刺激因子宫颈癌基质金属蛋白酶2迁移
- 眼-耳-脊柱序列征的遗传学研究现状
- 2018年
- 眼-耳-脊柱序列征(oculo-auriculo-vertebral spectrum,OAVS)是临床常见的出生缺陷,主要累及眼、耳、上下颌及脊柱等.目前,OAVS的遗传基础已被公认,但致病基因尚未明确.从染色体分析、基因组拷贝数检测、致病基因鉴定和小鼠模型对OAVS的可能病因进行综述,并对OAVS的研究策略进行了分析和展望.
- 黄雪霜潘博王乐
- 关键词:基因
- TNFAIP1基因过表达载体的构建及其慢病毒包装被引量:2
- 2018年
- 目的构建肿瘤坏死因子α诱导蛋白1(TNFAIP1)基因过表达慢病毒载体并检测其体外表达水平。方法通过PCR扩增TNFAIP1的序列,双酶切线性化pEZ-Lv105载体后与TNFAIP1片段连接,转化至大肠杆菌stb13中进行筛选,并进行TNFAIP1-Lv105阳性克隆的测序和鉴定。将TNFAIP1-Lv105与HIV包装质粒混合物共转染于293T细胞,收集上清并浓缩,获得慢病毒浓缩液。结果测序结果与设计序列一致,测定病毒浓缩液滴度为2×10~8TU/ml。结论成功构建过表达TNFAIP1的慢病毒载体,为研究TNFAIP1在视神经胶质瘤中的作用提供了分子工具。
- 丰昀彭文婷黄凤鑫周芸羽蒋乐龙张敏王光伟
- 关键词:肿瘤坏死因子Α基因表达
- 单纯型轴后多趾一家系的基因突变筛查
- 2015年
- 目的探讨一个中国汉族单纯型轴后多趾家系患者是否存在GLI3和ZNF141基因突变。方法收集家系中2例患者的临床资料,并采集2例患者及4例家系正常成员的外周血,提取基因组DNA,采用PCR扩增GLI3和ZNF141基因的全部外显子及外显子与内含子交界区域,用直接双向测序、BLAST比对进行突变分析。结果此家系中2例患者临床诊断为单纯型轴后多指(趾)A型;在GLI3和ZNF141基因中发现了6个变异序列,所有序列变异均存在于患者及其正常亲属中,与疾病表型无共分离现象。结论 GLI3和ZNF141基因外显子突变与该家系单纯型轴后多趾的发病无关。
- 张仁明肖玉波贺凯申小青向帅黄雪霜
- 线粒体功能损伤及靶向线粒体的抗氧化和抗癌药物研发进展被引量:1
- 2014年
- 线粒体是一个十分重要但是目前被忽视的潜在治疗靶标,由于其基因组复制和组成方式较为独特,使线粒体容易受到生物毒性物质损害。线粒体功能损伤主要包括氧化性损伤,钙稳态失衡和ATP合成破坏。本文总结了引发线粒体功能失常的各种机制,线粒体功能紊乱与疾病的关系,论述了以线粒体为靶标的药物作用原理和效果;对靶向线粒体的抗癌、抗氧化药物存在的问题、应用前景等方面作了讨论。
- 贺凯杨勇李树平李学刚
- 关键词:线粒体靶向治疗活性氧抗氧化剂药物
- TNFAIP1-shRNA慢病毒表达载体的构建与鉴定被引量:1
- 2018年
- 【目的】构建肿瘤坏死因子-α诱导蛋白-1(TNFAIP1)基因短发卡RNA(shRNA)慢病毒载体。【方法】根据人TNFAIPl基因序列设计合成4条shRNA,构建shRNA表达质粒,将重组质粒转染至293T细胞,应用RT—PCR检测各组TNFAIPl基因mRNA的表达水平,筛选出最有效的干扰靶序列,构建HSH018143-LVRHlp-RNAi慢病毒载体,并进行测序鉴定。将确定了的TNFAIPl-shRNA-0S523409转染至293T细胞,72h后,观察绿色荧光表达情况,并测定病毒滴度。【结果】TNFAIPl-shRNA慢病毒表达载体高效转导入293T细胞并稳定表达,测定其病毒滴度为5×108 TU/mL。【结论】本研究成功构建了TNFAIPl基因shRNA慢病毒表达载体,为研究TNFAIPl在糖尿病视网膜病变中的作用奠定了实验基础。
- 丰昀彭文婷张嘉玥张雅倩张敏王光伟
- GDF11过表达稳转U251细胞株的构建
- 2022年
- 目的 :构建过表达生长分化因子11(GDF11)的神经胶质瘤U251稳转细胞株。方法 :合成GDF11全长序列,构建HBLV-h-GDF11-3×flag-LUC-PURO慢病毒载体。将其与质粒pAX2和pMD2G共同转染293T细胞,收集上清并浓缩,获得慢病毒浓缩液。利用该慢病毒感染U251细胞,经嘌呤霉素筛选获得稳定过表达GDF11的细胞株,通过RT-PCR鉴定稳转细胞株中GDF11 mRNA的表达水平。结果 :测序结果与设计序列一致,慢病毒浓缩液滴度为3.0×10^(8) TU/mL,RT-PCR结果显示在该稳转细胞株中GDF11表达水平上调154倍。结论 :成功构建了稳定过表达GDF11的U251细胞株,为进一步研究GDF11在神经胶质瘤中的作用奠定了基础。
- 蔡珊珊刘倩高丹阳杨艺邓富家王光伟
- 关键词:神经胶质瘤慢病毒