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GAS41基因RNA干扰慢病毒载体的构建被引量：1: 2018年; 目的 :构建GAS41-shRNA慢病毒载体。方法 :合成GAS41干扰序列,构建GV118-GAS41-RNAi慢病毒干扰载体,连同包装质粒p Helper1.0和包膜质粒p Helper2.0共同转染293T细胞,收集储存病毒颗粒并进行滴度测定。结果 :构建的GAS41干扰慢病毒载体GV118-GAS41-RNAi经PCR和测序鉴定,结果与设计序列相符,收获病毒颗粒,测定滴度为5×108TU/m L。结论 :成功构建了GAS41-shRNA慢病毒载体,为后续进一步研究GAS41基因在视神经胶质瘤(optic nerve glioma,ONG)中的作用奠定了基础。; 丰昀黄凤鑫王娟杨倩周芸羽彭文婷王光伟; 关键词：慢病毒载体干扰RNA

硝酸甘油耐受大鼠主动脉差异microRNA筛选与生物信息学分析被引量：1: 2018年; 目的:筛选硝酸甘油耐受大鼠主动脉差异表达的microRNA (miRNA),并分析预测差异miRNA调控的靶基因及功能。方法:SD大鼠皮下注射给予硝酸甘油连续3 d造成硝酸甘油耐受模型,胸主动脉提取RNA后,应用miRNA测序技术筛选差异miRNA,并用qRT-PCR进行验证。利用生物信息学方法预测差异表达miRNA调控的靶基因,分析靶基因富集的基因功能(gene ontology,GO)和信号通路(pathway)。结果:与对照组比较,硝酸甘油耐受组共有28个miRNA表达发生显著变化,其中16个为已知miRNA,其中12个上调,4个下调(P <0. 05)。qRT-PCR检测了miR-487b-3p和miR-503-5p,变化趋势与测序结果一致。生物信息学分析显示,差异miRNA的靶基因主要富集于蛋白结合和代谢途径。结论:硝酸甘油耐受大鼠主动脉miRNA表达明显变化,这些差异miRNA通过调控靶基因参与硝酸甘油耐受发生。; 曾振华刘建新曹春芽吴卫华; 关键词：硝酸甘油耐受 MICRORNA 生物信息学

胞质M-CSF诱导HeLa细胞侵袭和迁移: 2017年; 为探讨巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)对人宫颈癌细胞(He La细胞)侵袭和迁移的影响及机制,采用胞质定位空载体p CMV/cyto/myc与重组载体p CMV/cyto/myc-M-CSF稳定转染He La细胞株,建立稳定高表达胞质M-CSF的细胞系(He La-M细胞).经Transwell实验观察胞质M-CSF对He La细胞侵袭和迁移能力的影响,逆转录-聚合酶链式反应及蛋白质印迹检测细胞Rho三磷酸鸟苷酶(Rho GTPases)及基质金属酶的表达,明胶酶谱法检测基质金属蛋白酶2的活性.结果显示,与转染空载体的He La细胞(He La-C细胞)和对照组He La细胞比较,胞质M-CSF的高表达可明显增强He La细胞在体外的侵袭和迁移能力,其机制与Rho GTPases的活化,以及MMP2表达上调及其活性增高密切相关.; 张蒙夏张蒙夏吴海燕吴海燕唐圣松; 关键词：巨噬细胞集落刺激因子宫颈癌基质金属蛋白酶2 迁移

眼-耳-脊柱序列征的遗传学研究现状: 2018年; 眼-耳-脊柱序列征（oculo-auriculo-vertebral spectrum,OAVS）是临床常见的出生缺陷,主要累及眼、耳、上下颌及脊柱等.目前,OAVS的遗传基础已被公认,但致病基因尚未明确.从染色体分析、基因组拷贝数检测、致病基因鉴定和小鼠模型对OAVS的可能病因进行综述,并对OAVS的研究策略进行了分析和展望.; 黄雪霜潘博王乐; 关键词：基因

TNFAIP1基因过表达载体的构建及其慢病毒包装被引量：2: 2018年; 目的构建肿瘤坏死因子α诱导蛋白1(TNFAIP1)基因过表达慢病毒载体并检测其体外表达水平。方法通过PCR扩增TNFAIP1的序列,双酶切线性化pEZ-Lv105载体后与TNFAIP1片段连接,转化至大肠杆菌stb13中进行筛选,并进行TNFAIP1-Lv105阳性克隆的测序和鉴定。将TNFAIP1-Lv105与HIV包装质粒混合物共转染于293T细胞,收集上清并浓缩,获得慢病毒浓缩液。结果测序结果与设计序列一致,测定病毒浓缩液滴度为2×10~8TU/ml。结论成功构建过表达TNFAIP1的慢病毒载体,为研究TNFAIP1在视神经胶质瘤中的作用提供了分子工具。; 丰昀彭文婷黄凤鑫周芸羽蒋乐龙张敏王光伟; 关键词：肿瘤坏死因子Α 基因表达

单纯型轴后多趾一家系的基因突变筛查: 2015年; 目的探讨一个中国汉族单纯型轴后多趾家系患者是否存在GLI3和ZNF141基因突变。方法收集家系中2例患者的临床资料,并采集2例患者及4例家系正常成员的外周血,提取基因组DNA,采用PCR扩增GLI3和ZNF141基因的全部外显子及外显子与内含子交界区域,用直接双向测序、BLAST比对进行突变分析。结果此家系中2例患者临床诊断为单纯型轴后多指(趾)A型;在GLI3和ZNF141基因中发现了6个变异序列,所有序列变异均存在于患者及其正常亲属中,与疾病表型无共分离现象。结论 GLI3和ZNF141基因外显子突变与该家系单纯型轴后多趾的发病无关。; 张仁明肖玉波贺凯申小青向帅黄雪霜

线粒体功能损伤及靶向线粒体的抗氧化和抗癌药物研发进展被引量：1: 2014年; 线粒体是一个十分重要但是目前被忽视的潜在治疗靶标,由于其基因组复制和组成方式较为独特,使线粒体容易受到生物毒性物质损害。线粒体功能损伤主要包括氧化性损伤,钙稳态失衡和ATP合成破坏。本文总结了引发线粒体功能失常的各种机制,线粒体功能紊乱与疾病的关系,论述了以线粒体为靶标的药物作用原理和效果;对靶向线粒体的抗癌、抗氧化药物存在的问题、应用前景等方面作了讨论。; 贺凯杨勇李树平李学刚; 关键词：线粒体靶向治疗活性氧抗氧化剂药物

TNFAIP1-shRNA慢病毒表达载体的构建与鉴定被引量：1: 2018年; 【目的】构建肿瘤坏死因子-α诱导蛋白-1（TNFAIP1）基因短发卡RNA（shRNA）慢病毒载体。【方法】根据人TNFAIPl基因序列设计合成4条shRNA，构建shRNA表达质粒，将重组质粒转染至293T细胞，应用RT—PCR检测各组TNFAIPl基因mRNA的表达水平，筛选出最有效的干扰靶序列，构建HSH018143-LVRHlp-RNAi慢病毒载体，并进行测序鉴定。将确定了的TNFAIPl-shRNA-0S523409转染至293T细胞，72h后，观察绿色荧光表达情况，并测定病毒滴度。【结果】TNFAIPl-shRNA慢病毒表达载体高效转导入293T细胞并稳定表达，测定其病毒滴度为5×108 TU／mL。【结论】本研究成功构建了TNFAIPl基因shRNA慢病毒表达载体，为研究TNFAIPl在糖尿病视网膜病变中的作用奠定了实验基础。; 丰昀彭文婷张嘉玥张雅倩张敏王光伟

GDF11过表达稳转U251细胞株的构建: 2022年; 目的 :构建过表达生长分化因子11(GDF11)的神经胶质瘤U251稳转细胞株。方法 :合成GDF11全长序列,构建HBLV-h-GDF11-3×flag-LUC-PURO慢病毒载体。将其与质粒pAX2和pMD2G共同转染293T细胞,收集上清并浓缩,获得慢病毒浓缩液。利用该慢病毒感染U251细胞,经嘌呤霉素筛选获得稳定过表达GDF11的细胞株,通过RT-PCR鉴定稳转细胞株中GDF11 mRNA的表达水平。结果 :测序结果与设计序列一致,慢病毒浓缩液滴度为3.0×10^(8) TU/mL,RT-PCR结果显示在该稳转细胞株中GDF11表达水平上调154倍。结论 :成功构建了稳定过表达GDF11的U251细胞株,为进一步研究GDF11在神经胶质瘤中的作用奠定了基础。; 蔡珊珊刘倩高丹阳杨艺邓富家王光伟; 关键词：神经胶质瘤慢病毒

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湖南医药学院生物医学研究中心