兰州大学基础医学院结核病研究中心
- 作品数：26 被引量：62H指数：4
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- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家科技重大专项甘肃省科技攻关计划更多>>
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- 结核分枝杆菌Mtb8.4-Hspx和Hspx-Mtb8.4重组基因克隆及表达被引量：1
- 2010年
- 目的构建结核分枝杆菌去标签重组蛋白Mtb8.4-Hspx(MH)和Hspx-Mtb8.4(HM)原核表达载体,并在大肠埃希菌株BL21(DE3)中表达。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,PCR扩增Mtb8.4、Hspx基因,产物经纯化后与载体PET30a连接、转化及测序鉴定,构建原核重组表达质粒PET30a-Mtb8.4和PET30a-Hspx。抽提重组质粒,产物经纯化后与目的基因Hspx、Mtb8.4连接,转化及测序鉴定,构建重组目的基因质粒PET30a-Mtb8.4-Hspx(PET30a-MH)和PET30a-Hspx-Mtb8.4(PET30a-HM)载体,转化大肠埃希菌BL21,以IPTG诱导,SDS-PAGE电泳检测表达产物。结果 SDS-PAGE蛋白电泳验证去标签MH和HM融合蛋白分子质量单位为28 ku,与预期值相符。结论本研究成功表达去标签结核杆菌重组蛋白MH和HM,为结核亚单位疫苗免疫原性和临床前研究奠定了基础。
- 吴玉敏谭继英王革刘万波胡丽娜祝秉东
- 关键词：MTB8.4HSPX克隆
- 变性高效液相色谱法检测结核分枝杆菌利福平耐药基因突变的初步探索被引量：3
- 2010年
- 目的探讨变性高效液相色谱（DHPLC）技术在MTB的利福平耐药菌株rpoB基因突变检测中的应用价值。方法PCR扩增MTB的rpoB基因利福平耐药决定区，扩增产物与野生型DNA链形成异源双链，在65．4℃柱温下进行DHPLC分析。对DHPLC不同峰型菌株的rpoB基因片段进行测序，评价DHPLC技术的敏感度和特异度。结果共分析46株MTB菌株，其中42株对利福平耐药，4株对利福平敏感。经DHPLC分析，产生15种不同图谱。测序结果表明，各图谱菌株突变特征不同。除D108和D24菌株的DHPLC峰形相同而突变特征不同外，其他菌株均为DHPLC峰型与基因多态性相一致，即DHPLC峰型相同则基因多态性相同，DHPLC峰型不同则基因多态性不同。结论DHPLC具有简便快捷、高通量和自动化的特点，敏感度和特异度高，可用于快速检测耐药MTB的基因突变。
- 李苗司红艳郭璐李培强祝秉东杨克虎张颖景涛
- 关键词：分枝杆菌结核色谱法高压液相
- 二甲基三十六烷基铵-卡介苗多糖核酸在结核亚单位疫苗中的佐剂效应被引量：2
- 2009年
- 目的探讨二甲基三十六烷基铵（DDA）、卡介苗多糖核酸（BCG—PSN）作为结核病融合蛋白疫苗佐剂的免疫效应。方法采用热酚法制备BCG—PSN，与DDA联合作为融合蛋白AMM（Ag85B—MPT64 190-196-Mtb8．4）佐剂免疫小鼠，设卡介苗、生理盐水、弗氏不完全佐剂（IFA）及单独应用DDA或BCG—PSN一种佐剂的各组作为对照。应用ELISA和酶联免疫斑点法检测免疫小鼠的体液与细胞免疫反应。结果分离培养疫苗免疫小鼠的脾脏淋巴细胞，用特异性抗原Ag85B刺激后，AMM＋DDA＋BCG—PSN疫苗组、AMM＋DDA组和卡介苗组小鼠每1×10^6个脾淋巴细胞分泌γ-干扰素的细胞数分别为222±79、259±85和230±64，均明显高于AMM＋PBS组（40±4）、AMM＋IFA组（10±3）、AMM＋BCG．PSN组（132±18）和生理盐水组（8±4），差异有统计学意义（t值为2．923—7．118，均P〈0．05）；与单用DDA组比较，添加DDA和BCG—PSN两种佐剂的疫苗组小鼠血清抗体滴度Ig2／IgG，较高（0．125和0．025），但γ-干扰素分泌水平没有增高。结论AMM＋DDA＋BCG—PSN结核病亚单位疫苗能够引起较强的Th1细胞免疫为主的免疫反应，DDA＋BCG—PSN（尤其是DDA）具有增强结核病亚单位疫苗Th1细胞免疫应答的佐剂效应。
- 宋楠楠王秉翔史大中傅林锋雒彧于红娟韩少波焦磊郄亚卿王洪海张颖祝秉东
- 关键词：结核疫苗亚单位卡介苗
- 结核病免疫机制及疫苗研究进展被引量：9
- 2011年
- 结核病是一种棘手的重大传染病。虽然存在一些有一定疗效的治疗药物,亦有预防性疫苗———卡介苗(BCG);但结核病仍在世界范围流行,且发病率和病死率居高不下。结核病的免疫病理机制及疫苗研究近年来取得了一定的进展。结核分枝杆菌通过Toll样受体(TLR)等模式识别受体,激活巨噬细胞的天然免疫反应,清除细菌和调节获得性免疫反应。包括主要组织相容性复合物(MHC)限制的CD4+和CD8+T细胞,以及CD1限制的T细胞和γδT细胞参与抗结核获得性免疫反应,其中记忆性T细胞与调节性T细胞具有重要的免疫调节作用。但是,人们对结核病发生机制的认识仍然不足,限制了对结核病治疗药物和新型疫苗的研发。由于BCG对成人缺乏有效的保护力,故研制新型的结核疫苗是预防结核病的当务之急。当前处于实验阶段的候选疫苗包括重组BCG、减毒结核分枝杆菌和可用于加强BCG的亚单位疫苗,后者又包括痘苗病毒载体疫苗、核酸疫苗、新型佐剂辅助的蛋白疫苗。目前可行的疫苗免疫策略主要是使用BCG或其他疫苗初次免疫,然后选择亚单位疫苗加强免疫。然而,疫苗的免疫策略、免疫剂量、免疫途径、强化免疫次数和免疫时机都有待研究。反映疫苗保护力的免疫指标不明确、很难确定哪类疫苗进入临床试验、缺乏临床试验场地、疫苗效果评价需要很长时间及耗资巨大,增加了结核疫苗研究的难度和风险。
- 达泽蛟祝秉东张颖
- 关键词：结核病免疫学疫苗
- 甘肃省甘南、定西两地耐异烟肼、利福平结核分枝杆菌散在分布重复单位基因分型被引量：3
- 2010年
- 结核病是当今全球范围内对人类最具威胁的传染性疾病之一。针对其致病菌——结核分枝杆菌的分子流行病学，目前已建立多种基因分型技术，如IS6110-限制性片段长度多态性分析（RFLP），
- 司红艳李苗甘培尚田丽丽姜维民杨枢敏景涛张文宏张颖祝秉东
- 关键词：基因分型技术耐异烟肼限制性片段长度多态性分析利福平分子流行病学传染性疾病
- 结核分枝杆菌耐利福平诊断试验的系统评价
- 2008年
- 目的采用Meta分析的方法评价LiPA和phage-based assays法检测结核分枝杆菌耐利福平诊断试验的准确性。方法通过检索PubMed、EMbase、CBMWeb、CSJD、CJFD数据库和其他方式广泛收集文献。根据QUADAS质量评价标准评价纳入文献的质量,用Meta-Disc软件对其敏感度、特异度、阳性似然比、阴性似然比等进行合并分析,并进行异质性检验,对无异质性的研究绘制SROC曲线。结果最终纳入42篇文献。(1)LiPA法检测结核分支杆菌耐利福平时,7个研究以BACTEC460法为参考,合并敏感度0.98,合并特异度0.98,SROC(AUC)=0.9924;6个研究以proportion法为参考,合并敏感度0.97,合并特异度1.00,SROC(AUC)=0.9961;3个研究以BACTEC460、Proportion法作为参考,合并敏感度0.92,合并特异度0.98,SROC(AUC)=0.9842(;2)噬菌体扩增法(商用)检测结核分枝杆菌耐利福平的7个研究,以BACTEC460、Proportion法为参考,合并敏感度0.95,合并特异度0.95,SROC(AUC)=0.9842,(3)噬菌体扩增法(内部的)检测结核分支杆菌耐利福平的7个研究,以BACTEC460、比例法、绝对浓度法和电阻率法为参考,其合并敏感度0.98,合并特异度0.98,SROC(AUC)=0.9949;(4)荧光素酶噬菌体报告技术检测结核分枝杆菌耐利福平的7个研究,以BACTEC460、比例法、绝对浓度法为参考,其合并敏感度0.98,合并特异度0.98,SROC(AUC)=0.9788。结论现有研究证实(:1)采用分离培养时,噬菌体检测法在检测结核分枝杆菌耐利福平方面具有较高的敏感度和特异度,在提高耐多药结核病诊断准确性方面具有潜力。(2)LiPA在检测结核分枝杆菌耐利福平方面也具有较高的敏感度和特异度,但直接应用临床标本检测时敏感度似乎稍有下降。上述结果尚需更多设计严谨、科学的临床试验进一步证实。
- 仇杰张君雨张佩珍张颖马彬杨克虎
- 关键词：结核分枝杆菌利福平结核分支杆菌
- 人PKM_2基因克隆、表达及纯化的研究
- 2013年
- 目的:构建人PKM2(M2-type pyruvate kinase)的原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达,镍离子柱亲和层析法纯化融合蛋白。方法:用PCR方法从宫颈癌Hela细胞全基因组中扩增出目的基因PKM2,通过克隆载体pET30a(+)构建质粒载体pET30a(+)-PKM2。经双酶切和DNA测序证实正确后,用Ni-NTA亲和层析柱进行纯化。结果:双酶切鉴定所切下的片段大小与理论值相符,测序结果和报道一致。经SDS-PAGE分析,纯化后的蛋白约在58KDa位,条带单一,无杂带出现。结论:成功表达纯化了PKM2融合蛋白,为肿瘤疫苗研制和肿瘤标志物快速诊断的研究奠定基础。
- 王秋香刘会玲祝秉东李海红王千千王海琳
- 关键词：克隆纯化
- 结核疫苗研究的历史与现状被引量：17
- 2007年
- 由于结核病缺乏有效的疫苗保护，发病率持续增高，成为人类传染病中继艾滋病之后的第二大杀手。减毒牛型结核分枝杆菌——卡介苗是目前许多国家批准应用于人体的惟一结核病疫苗。然而，卡介苗对成人肺结核的保护效率很低，研制新型结核病疫苗迫在眉睫。多种类型的新型疫苗，包括重组卡介苗疫苗、营养缺陷型结核分枝杆菌疫苗、蛋白质多肽疫苗、DNA疫苗、以病毒为载体的结核分枝杆菌亚单位疫苗等被广泛研究。至2005年，已有120种以上的疫苗进行了动物实验研究，至少有5个疫苗已进入Ⅰ期临床试验。
- 祝秉东王洪海
- 关键词：结核疫苗结核病疫苗重组卡介苗成人肺结核
- 甘肃省甘南、定西两州市耐异烟肼和利福平结核分枝杆菌MIRU基因分型研究
- 结核病是当今全球范围内对人类最具威胁的传染性疾病之一。追踪传染源和查证传播途径是长期困扰传统结核病流行病学的一个问题,也是分子流行病学首要解决的问题。随着分枝杆菌基因分型技术的进步,人们逐渐发现其在结核病分子流行病领域的...
- 司红艳甘培尚杨枢敏李苗景涛张颖祝秉东张文宏
- 文献传递
- 1例L型支气管戈登菌肺部感染的报道被引量：1
- 2010年
- 放线菌目戈登菌属支气管戈登菌存在于环境中,在机体免疫力下降时可感染致病。从1例肺部感染4年的78岁患者痰标本中分离出1株菌株,经聚合酶链反应(PCR)扩增16SrRNADNA,序列比对分析证实为支气管戈登菌。该菌株在含蔗糖的Middlebrook7H9(7H9-L)半固体培养基上呈煎蛋样嵌入性生长,在含氯化钠的92-3TB(92-3TB-L)液体培养基也生长,而在罗氏培养基、BACTECMGIT-960、不含氯化钠的92-3TB(92-3TB-B)液体培养基及不含蔗糖的Middlebrook7H9(7H9-B)半固体培养基不生长。涂片抗酸染色显微镜下可见大小不等的抗酸染色阴性球状或短杆状菌。传代培养2代后可见橘红色菌落,涂片抗酸染色可见少量抗酸染色弱阳性杆状菌,革兰染色及扫描电子显微镜观察菌体为杆状。结果表明,从患者痰液中分离的菌株为L型支气管戈登菌,提示肺部感染迁延不愈的免疫力低下患者需考虑感染L型支气管戈登菌的可能。
- 陈玉芊同重湘姜元水永珍田丽丽张颖祝秉东
