三峡大学医学院分子生物学研究所
- 作品数：307 被引量：616H指数：10
- 相关作者：姚佳红任玉珊李丹莉王见之王磊黎更多>>
- 相关机构：中国科学院长春应用化学研究所中国医学科学院北京协和医学院基础医学院基础医学研究所中国医学科学院北京协和医学院基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省自然科学基金湖北省教育厅自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程农业科学更多>>
- Bcl-2在阿司匹林诱导宫颈癌Hela细胞凋亡中的作用
- 目的:阿司匹林(acetysalicylicacid,ASA),又名乙酰水杨酸,是非甾体类抗炎药(NSAIDs)的代表药物,主要通过抑制环氧化酶(COXs)的活性进而降低前列腺素(PGs)的产生发挥作用。文献报道阿司匹林...
- 杨建林韩钰周永芹张伟
- 关键词：阿司匹林HELA细胞BCL-2凋亡机制
- 文献传递
- 抗肝纤冲剂对肝纤维化小鼠肝组织TGFβ信号转导通路的影响被引量：2
- 2012年
- 目的探讨抗肝纤冲剂对免疫损伤肝纤维化小鼠的治疗作用机制。方法将75只雌性Balb/c小鼠分为5组:正常对照组、肝纤维化模型组,秋水仙碱治疗组,抗肝纤冲剂低剂量组、抗肝纤冲剂高剂量组。除正常对照组外,其余各组均制备肝纤维化小鼠模型。造模的同时分别用药物对小鼠进行干预治疗7周。7周末处死小鼠,免疫荧光检测肝组织中的TGF-β、Smad2/3和Smad6/7蛋白的表达,采用Western blotting方法检测肝组织中的TGF-β和Ⅰ型胶原蛋白的表达情况。结果正常小鼠肝组织中的TGF-β、Smad2/3和Ⅰ型胶原蛋白的表达量少,Smad6/7表达量多;模型组小鼠的肝组织中TGF-β、Smad2/3和Ⅰ型胶原蛋白的表达量明显增加,而Smad6/7表达量减少;抗肝纤冲剂干预治疗后,肝组织中TGF-β、Smad2/3和Ⅰ型胶原蛋白的表达量有减少的趋势,而Smad6/7表抗肝纤冲剂通过抑制TGF-β的分泌,降低Smad2/3的磷酸化水平,起到抑制Ⅰ型胶原的蛋白分泌的作用。达量又趋增加。结论抗肝纤冲剂通过抑制TGF-β的分泌,降低Smad2/3的磷酸化水平,起到抑制Ⅰ型胶原的蛋白分泌的作用。
- 肖和杰柳长柏张艳琼吴江锋石次国陈钢杜杨红石慧
- 关键词：肝纤维化SMAD
- microRNA在非酒精性脂肪性肝病中的作用被引量：3
- 2014年
- microRNA(miRNA)是一类长度约为22个核苷酸的内源性非编码小分子RNA,通过影响靶mRNA的稳定性或抑制其翻译,从而对基因进行转录后水平的调控。研究发现,一些miRNA在非酒精性脂肪性肝病患者中出现差异性表达,这些差异性表达有多种功能,包括调节脂质和糖代谢,参与折叠蛋白反应、内质网应激、氧化应激、细胞分化、炎性反应及细胞凋亡。此文就miRNA在非酒精性脂肪性肝病病程中的潜在重要作用进行概述。
- 杨婕刘朝奇
- 关键词：MICRORNA非酒精性脂肪性肝病表达谱
- 人乳头瘤病毒16型E2融合钙网蛋白抗肿瘤的实验研究
- 研究背景:HPV感染是一种常见的临床疾病,它与宫颈癌的发生发展关系密切。E2是HPV早期蛋白之一,涉及到病毒生命周期的各个阶段,是乳头瘤形成的必需蛋白。该蛋白与病毒的DNA复制、细胞凋亡、有丝分裂及其他早期蛋白的转录关系...
- 杨建林柳长柏李丹莉
- 文献传递
- 大肠杆菌BL21(DE3)中定向进化突变体库构建的方法比较
- 2013年
- 定向进化的突变体库建立是定向进化是否成功的关键因素,只有建立足够大的库容才有可能筛选到合适的突变体。然而用来做定向进化的宿主菌的转化效率并不总是那么高,难以达到建库要求。而且在以常规分子克隆方法做连接转化时,耗时长,效率低等问题也影响了突变体库的建立,高效的克隆转化方法是定向进化所需求的。本文以大肠杆菌BL21(DE3)为转化宿主菌,挑选了一种新的高效的克隆转化方法,与现在实验室常规克隆转化方法进行了比较,证明了PCR多聚质粒的克隆转化方法在定向进化突变体库构建中的优势。为定向进化突变体库的构建提供了新的高效可靠的技术方法。
- 陈菲云张大伟刘森
- 关键词：定向进化
- 小鼠CRT-SPD1融合基因原核表达载体的构建和表达
- 2013年
- 目的:设计原核表达小鼠钙网蛋白(Calreticulin,CRT)与程序性死亡分子1(Programmed Death-1,PD1)的融合蛋白,用于肿瘤靶向治疗。方法:应用RT-PCR技术扩增小鼠CRT的N、P区基因及PD1胞外区cDNA序列,用一个Linker将两者连接起来,克隆至表达载体pET28a(+)上。将重组表达质粒pET28a(+)-CRT-SPD1转化入大肠杆菌BL21(DE3)内,IPTG诱导表达;用Ni柱亲和层析纯化蛋白,并进行SDS-PAGE、Western blot鉴定。结果:所得产物经SDS-PAGE检测后,在45 kDa处显示特异条带,最后经Western Blotting鉴定,所纯化蛋白能被CRT抗体和PD1抗体抗体识别。结论:获得较纯的融合蛋白,所构建的载体可为进一步研究两者的功能和免疫学特性及肿瘤的免疫治疗奠定了基础。
- 吴薇汪龚泽邹晓华王艳林刘朝奇
- 关键词：钙网蛋白程序性死亡分子蛋白纯化
- 钙网蛋白与凋亡细胞的清除
- 2007年
- 钙网蛋白（calreticulin，CRT）是一种分子量为46．5Kd的可溶性Ca^2＋结合蛋白，属于KDEL（内质网滞留信号肽）蛋白家族，包含球状的N末端、富含Proline的中间区和富含酸性氨基酸的C末端三个结构域。上世纪70年代初，Ostwald和Mac Lennan首次从兔骨骼肌的肌浆网中分离获得CRT蛋白，随后Fliegel等于1989年克隆获得CRT的cDNA。人类CRT基因位于第19号染色体（p13．2-p13．3），由9个外显子和8个内含子构成。
- 王艳林曹春雨
- 关键词：钙网蛋白凋亡细胞9号染色体CRTCDNA可溶性
- annexinA2基因片段的克隆、表达、纯化及多克隆抗体的制备被引量：4
- 2012年
- 目的:构建人源annexinA2基因片段的原核表达载体,表达并纯化蛋白,制备多克隆抗体。方法:从GenBank(BC093056.1)中获得人源annexinA2基因的cDNA序列并根据不含信号肽的编码序列设计引物,用PCR的方法扩增编码an-nexinA2基因部分序列,将其克隆到原核表达载体pET28a(+)中表达annexinA2的蛋白。表达的蛋白产物利用切胶回收的方法纯化,用His抗体进行Western blot鉴定。用纯化的目的蛋白作为抗原免疫日本大耳白兔,获得annexinA2的抗血清,通过ELISA测定兔多克隆抗体的滴度。在CaSki细胞内采用细胞免疫荧光(CIF)和流式细胞术(FCM)检测内源annexinA2蛋白的表达,用于鉴定制备的多克隆抗体特异性。结果:通过双酶切及测序证实原核表达质粒pET28a(+)-annexinA2构建成功,可在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中诱导高表达,得到相对分子质量约28 000的annexinA2蛋白。纯化的蛋白免疫日本大白兔后,产生特异的高滴度的抗体(ELISA滴度达1∶640 000)。CIF和FCM结果显示抗血清与肿瘤细胞表达的annexinA2有高度特异的结合活性。结论:构建了annexinA2的原核表达质粒并获得高纯度的蛋白,免疫动物后,获得了特异、高效价的多克隆抗体,为人源annexinA2蛋白的生物学功能及肿瘤治疗的研究提供了实验基础。
- 聂纪芹汪龚泽刘朝奇
- 关键词：原核表达蛋白纯化多克隆抗体
- 人IL-6/sIL-6R结合分子模型的建立及在药物筛选中的应用
- 2009年
- 目的:建立人IL-6/sIL-6R结合的分子模型,用于筛选IL-6/sIL-6R的抑制剂。方法:将人IL-6基因克隆至原核表达载体pET28a(+)中表达IL-6蛋白,Western blot及人IL-6检测试剂盒分析鉴定表达蛋白。同法将人sIL-6R在pET15b载体中表达,纯化并用Western blot检测目的蛋白。依据ELISA原理建立IL-6/sIL-6R结合的分子模型,并通过改变IL-6、sIL-6R及IL-6antibody的浓度来优化该模型,用于IL-6/sIL-6R拮抗药物的筛选。结果:人IL-6可在载体PET28a(+)中高效表达,且经Western blot鉴定正确,人IL-6检测试剂盒检测显示具有较高的免疫活性。sIL-6R在PET15b中表达,Western blot鉴定正确。通过对IL-6/sIL-6R结合的分子模型的优化,得到其最佳条件为:IL-6R1μg/well,IL-6500ng/well,IL-6antibody1μg/well。应用该模型筛选发现有些化合物可显著抑制IL-6与其受体的结合。结论:成功构建IL-6/sIL-6R结合的分子模型,为高通量筛选IL-6拮抗剂提供平台。
- 史继静刘朝奇邹坤杨祖伟高明星杨凡
- 关键词：IL-6SIL-6R蛋白表达ELISA药物筛选
- 人乳头瘤病毒16型L1-E7c嵌合基因的构建表达及免疫学效应的研究被引量：1
- 2008年
- 目的构建人乳头瘤病毒16型(HPV16) L1-E7c嵌合基因并表达融合蛋白,以期获得防治HPV16感染及相关肿瘤的疫苗。方法以HPV16型的中国人野毒株为模板,利用PCR克隆技术制备HPV16 L1-E7c嵌合基因,并转入原核表达载体pET28a(+),获得pET28a(+)-L1-E7c表达质粒。以Western blot方法鉴定融合蛋白与HPV16L1和E7抗体的特异性结合。应用蛋白纯化仪纯化HPV16 L1-E7c融合蛋白,经过复性后,电镜观察病毒样颗粒(cVLP)的形态结构。纯化的蛋白免疫动物,测定疫苗抗肿瘤的细胞免疫及抗体产生情况。结果经过序列分析和酶切鉴定表明成功构建了HPV16 L1-E7c嵌合基因,并在大肠杆菌中可高效表达L1-E7c融合蛋白。此融合蛋白具有HPV16 L1和E7的抗原性,纯化的蛋白复性后可形成嵌合病毒样颗粒(cVLP),纯化的蛋白免疫动物后,产生特异性细胞和体液免疫反应,具有抗肿瘤活性。结论构建的嵌合基因HPV16 L1-E7c可有效表达HPV16 L1-E7c重组蛋白并形成cVLP。此蛋白在动物实验中具有疫苗的免疫保护作用,为HPV16疫苗的研究奠定了实验基础。
- 刘朝奇许雪梅徐建青李昆司静懿刘世德
- 关键词：人乳头瘤病毒16型L1E7免疫原性
