西安交通大学医学院生殖医学研究中心
- 作品数：29 被引量：103H指数：6
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- 青春期前或青春期苯甲酸雌二醇暴露对大鼠睾丸发育、功能和基因表达谱的影响
- 目的：本实验较系统研究了青春期前或青春期不同剂量苯甲酸雌二醇(EB)暴露对 SD 大鼠睾丸和附睾发育、功能及性成熟后睾丸基因表达谱的影响,初步明确这两个阶段外源性雌激素暴露对睾丸和附睾发育及功能的近期和较远期影响,探索外...
- 李和程王子明屈栗明陈琦邱曙东甘为民程伟种铁石涛王新
- 文献传递
- 可分泌表达人降钙素基因相关肽重组腺相关病毒对糖尿病大鼠阴茎勃起的作用被引量：8
- 2005年
- 目的:探讨重组腺相关病毒(rAAV)介导人降钙素基因相关肽(hCGRP)基因转移在糖尿病大鼠阴茎海绵体平滑肌分泌表达及其对阴茎勃起的作用。方法:建立链佐脲菌素(STZ)糖尿病大鼠模型,随机分为3组,分别将VssHGCMV-hCGRP、VssCMV-GFP和rAAV空病毒液注射于阴茎海绵体。在注射后5 d,采用SMUP-PC型生物信号处理系统检测阴茎背神经电刺激诱发的阴茎勃起反应及海绵体内压(ICP)变化。切取海绵体组织,通过免疫组化技术和激光共聚焦显微镜分别检测hCGRP和绿色荧光蛋白(GFP)表达,以放射免疫法检测组织中环磷酸腺苷(cAMP)和环磷酸鸟苷(cGMP)变化。结果:在VssCMV-GFP转染后5 d,显示阴茎海绵体内几乎所有组织均有广泛的GFP表达,而rAAV空病毒转染的海绵体则无GFP表达。VssHGCMV-hCGRP转染STZ诱导的糖尿病大鼠后5d,电刺激阴茎背神经可诱发明显的阴茎勃起,监测ICP明显增高[(60.5±4.5)mm Hg,1 mm Hg=0.133kPa],而对rAAV空病毒转染的对照组STZ糖尿病大鼠以同样的参数电刺激阴茎背神经则无勃起反应,ICP无明显增加[(22.3±1.3)mm Hg],两组差异有显著性(P<0.01)。免疫组化观察显示在VssHGCMV-hCGRP转染的STZ糖尿病大鼠阴茎海绵体组织中hCGRP表达增强,同时当电刺激阴茎背神经诱发勃起反应时,海绵体内cAMP和cGMP水平均升高,分别为(48.4±6.5)nmol/L和(21.2±13.6)nmol/L,较rAAV空病毒组[(16.7±2.5)nmol/L和(0.42±0.12)nmol/L]明显增高(P<0.01)。结论:经阴茎海绵体内注射重组腺相关病毒VssHGCMV-hCGRP在糖尿病大鼠阴茎海绵体内获得了hCGRP转基因高效表达,其可增加阴茎背神经电刺激诱发的阴茎ICP和勃起反应。
- 邢俊平崔险峰孙建华邱曙东刘健
- 关键词：勃起功能障碍糖尿病基因治疗
- GFP重组腺相关病毒报告病毒的构建及其在NIH3T3细胞中的表达被引量：1
- 2005年
- 目的构建以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因的重组腺相关病毒载体和报告病毒,并观察其在真核细胞的表达。方法采用DNA重组技术将GFP基因片段亚克隆到pss HGCMV载体的EcoRⅠ和BamHⅠ位点,构建表达GFP重组腺相关病毒载体pss HGCMV-GFP。以此载体转染143细胞进行GFP重组腺相关病毒包装,产生重组报告病毒颗粒并作纯化。用地高辛标记的CMV polyA片段作为探针,采用斑点杂交方法检测重组病毒的物理滴度。采用氯化钙法体外转染培养的NI H3T3细胞,在活细胞状态下用荧光显微镜直接观察其在细胞中的表达。结果成功构建了GFP重组腺相关病毒载体和报告病毒—VssCMV-GFP,所获病毒的滴度为3.16×1012病毒颗粒/mL。重组腺相关病毒VssCMV-GFP感染NI H3T3细胞后48h开始出现绿色荧光,并逐渐增强,至120h荧光更加集中且很强。结论VssCMV-GFP对真核细胞具有感染能力,并且GFP可以在活细胞内有效表达,提示该重组腺相关病毒可应用于介导基因转移真核细胞进行基因治疗。
- 邢俊平杨宇王全颖杨广笑邱曙东
- 关键词：绿色荧光蛋白报告基因
- Tex13基因非放射性原位杂交探针的制备
- 2011年
- 目的研究制备地高辛(DIG)标记的Tex13(testis expressed gene 13)基因非放射性原位杂交探针,用于检测小鼠性腺Tex13基因的表达。方法采用RT-PCR方法扩增Tex13靶序列,将其插入带SP6和T7 RNA聚合酶启动子的pGEM-T Easy质粒,转入大肠杆菌DH10B,经蓝白斑筛选获得重组质粒,用T7和SP6引物对重组质粒进行PCR扩增,以此PCR产物为模板,以DIG RNA Labeling Mix为底物,经SP6 RNA聚合酶和T7 RNA聚合酶体外转录,分别制备DIG标记的反义链和正义链RNA探针。结果应用正常小鼠睾丸组织非放射性原位杂交实验,证实制备的探针具有较高的特异性和敏感性。结论 DIG标记Tex13基因杂交探针的成功制备,为进一步研究Tex13基因在小鼠性腺中的表达定位和发育规律以及它在减数分裂过程中的作用提供了实验基础。
- 霍涌玮邱曙东周庆李莹聂蓉FRIEL PMITCHELL DSMALL CGRISWOLD MD
- 关键词：生殖细胞减数分裂RNA探针
- 双氢睾酮和氟他胺对前列腺癌LNCaP细胞内钙离子的影响被引量：2
- 2017年
- 目的:观察双氢睾酮(DHT)和氟他胺(FLU)作用于雄激素依赖性前列腺癌细胞LNCa P内Ca^(2+)的变化,探讨DHT和FLU引起LNCa P细胞内Ca^(2+)变化的作用机制。方法:获得雄激素依赖性(LNCa P)细胞株,进行细胞培养,获得稳定生长及传代的细胞株。不同浓度的雄激素受体激动剂DHT及雄激素受体拮抗剂FLU作用于培养的LNCa P细胞株,不同时间点取干预措施下的LNCa P细胞,通过荧光染料负载,经流式细胞术检测并比较不同时间点、不同浓度药物作用下LNCa P细胞Ca^(2+)的变化和差异。结果:DHT作用于LNCa P细胞后,在每个剂量组中Ca^(2+)荧光强度差异有统计学意义(P<0.05),不同时间点变化差异有统计学意义(P<0.05)。FLU干预LNCa P后,各个剂量组的Ca^(2+)荧光强度随着时间的变化差异有统计学意义(P<0.05)。结论:DHT降低LNCa P细胞内Ca^(2+)含量不明显,说明对LNCa P细胞内的信号转导及凋亡影响不大;而FLU可明显提高LNCa P细胞内Ca^(2+)的浓度,导致钙超载,促进细胞的凋亡。
- 谢蛟魁宋印娥陈海文张胜茹田宏
- 关键词：双氢睾酮氟他胺钙离子
- 复发性流产与精液常规参数、精子畸形率和DNA完整性的相关性被引量：40
- 2010年
- 目的探讨复发性流产与丈夫精液常规参数、精子畸形率以及DNA完整性的相关性。方法①按纳入标准将研究对象分成复发性流产患者丈夫组(流产组,n=49)、孕前常规检查组(孕检组,n=60)和正常生育男性组(生育组,n=39),对精液进行常规分析,采用改良巴氏染色法,按照严格Kruger标准检测研究对象精子畸形率。②对上述流产组和生育组部分标本通过上游法进行优选,并采用精子染色质结构分析对优选前后的标本分别检测精子DNA完整性。结果①3组间两两比较,流产组总畸形率和头部畸形率与孕检组及生育组比较差异均有统计学意义(P<0.01),流产组精子密度、活动率、前向运动率与孕检组及生育组比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);孕检组精子密度、头部畸形率和总畸形率与生育组比较,差异有统计学意义(P<0.05),精子活动率和前向运动率与生育组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。②流产组精子DNA完整性指标(cellsoutsidethemainpopulation,COMP)在上游法优选前[(16.57±6.32)%]与生育组[(12.56±5.00)%]相比,差异有统计学意义(P<0.05);优选后流产组COMP为(13.46±3.51)%,与生育组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。③COMP与精子密度、活动率、前向运动率、a级百分率、b级百分率、c级百分率、总畸形率和头部畸形率呈中度相关性(r值分别为-0.421、-0.652、-0.569、-0.457、-0.511、-0.453、0.474、0.513,P<0.01)。结论复发性流产与丈夫精子质量存在相关性。
- 张洲师娟子邢俊平霍涌玮邱曙东
- 关键词：复发性流产精子畸形率DNA完整性
- 男性不育机制部分研究热点的探讨被引量：5
- 2007年
- 半个世纪以来,男性不育患者的比例有升高趋势,但其病因和发病机制仍未完全阐明。本文结合我们的部分研究成果,概括介绍男性不育机制的部分研究热点,着重介绍精索静脉曲张、甲醛及男性不育相关基因与男性不育的可能关系。
- 邱曙东周党侠
- 关键词：男性不育精索静脉曲张甲醛
- 电刺激阴茎背神经和海绵体内注射药物诱导的大鼠海绵体内压反应
- 目的:评价阴茎海绵体内压(ICP)间存在电刺激阴茎背神经(DN)和海绵体内注射罂粟碱诱导大鼠阴茎勃起反应中的应用,建立一种客观的方法。方法:选取性成熟雄性大鼠8只,20%氨基甲酸乙酯(100 mg/kg)腹腔注射麻醉下,...
- 邢俊平崔险峰孙建华李强刘健邱曙东
- 文献传递
- 可分泌表达人降钙素基因相关肽重组腺相关病毒体外转染培养的血管内皮细胞及其表达
- 2006年
- 目的观察可分泌表达人降钙素基因相关肽(humancalcitoningene-relatedpeptide,hCGRP)重组腺相关病毒(rAAV)体外转染培养的血管内皮细胞(endothelialcellsofvessel,ECV)及其作用,探讨其应用于血管性勃起功能障碍基因治疗的可行性。方法分别以可分泌表达hCGRP的重组腺相关病毒VssHGCMV-hCGRP、表达报告基因GFP中的重组腺相关病毒VssCMV-GFP和空病毒pssHGCMV体外转染培养的ECV细胞,采用斑点印迹试验检测培养基中的hCGRP,以放射免疫法检测转染细胞中的cAMP和cGMP水平,观察GFP和hCGRP的表达及其对ECV细胞的影响。结果腺相关病毒载体能有效地将外源基因hCGRP导入血管内皮细胞并稳定表达,VssHGCMV-hCGRP病毒组细胞中cAMP水平(45.74±3.45)nmol/L较pssHGCMV空病毒组(14.84±0.65)nmol/L和对照组(12.74±0.65)nmol/L明显高(P<0.01),并可在实验组24h细胞培养液中检测到免疫反应性hCGRP。结论可分泌表达生物活性肽重组腺相关病毒基因转移系统可有效进行多肽类在血管内皮细胞过表达,并可选择性刺激该细胞中cAMP水平升高,提示hCGRP可作为血管性勃起功能障碍基因治疗的有效候选基因。
- 邢俊平孙建华崔险峰邱曙东
- 关键词：重组腺相关病毒降钙素基因相关肽转染血管内皮细胞
- 孕酮对正常生育和不明原因不育男性精子细胞内游离Ca^(2+)浓度的影响被引量：3
- 2009年
- 目的:比较正常生育男性和不明原因不育男性患者精子细胞内游离Ca2+浓度([Ca2+]i)对孕酮(P)的反应性。方法:选择10例不明原因不育男性患者和9例正常生育男性,用上游法分离活力良好的精子并于体外获能2 h,将获能后精子与8.85μmol/L钙荧光探针Fluo-3/AM避光孵育40 min负载,将负载后的精子悬液与等量20%明胶混匀以制动精子,然后在激光扫描共聚焦显微镜下动态观察单个精子头部的[Ca2+]i基础水平以及10μmol/L P刺激对[Ca2+]i的影响。结果:不育组获能2 h后精子的[Ca2+]i基础水平显著低于生育组(P<0.01)。生育组精子经10μmol/L P刺激后,产生快速而短暂的[Ca2+]i升高,[Ca2+]i峰值水平显著高于其基础水平(P<0.05);而不育组精子经P刺激后,[Ca2+]i仅有微弱增加,其峰值水平与基础水平相比无统计学差异(P>0.05)。生育组由P激发的精子[Ca2+]i峰值水平以及[Ca2+]i升高幅度(峰值水平与基础水平之差)均显著高于不育组(P<0.01)。结论:不明原因不育男性患者精子[Ca2+]i对P的反应性降低,提示这些患者精子膜上负责Ca2+内流的非基因型孕激素受体可能存在功能障碍。
- 霍涌玮王丽蓉田宏许拥军赵晓鸽邱曙东
- 关键词：精子男性不育孕酮顶体反应
