西北农林科技大学动物科技学院农业部家畜生殖内分泌及胚胎工程重点开放实验室
- 作品数：79 被引量：475H指数：13
- 相关作者：利光辉翁伟平原巨强郭挺伟王贇更多>>
- 相关机构：中国科学院动物研究所湛江海洋大学农学院宁夏大学农学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技攻关计划“九五”国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生环境科学与工程更多>>
- 某些因素对牛和小鼠类胚胎干细胞分离与培养的影响被引量：15
- 2002年
- 以荷斯坦牛胚胎和小鼠胚胎为材料 ,研究了犊牛血清、饲养层、培养液、添加物和消化液对牛胚胎干细胞和小鼠胚胎干细胞克隆效率的影响。结果表明 ,在 2 4h内使小鼠胚胎贴壁率达 86 %以上的犊牛血清可用于小鼠和牛胚胎干细胞的分离 ;在 ES细胞分离与克隆中 ,以 15 %～ 2 0 %犊牛血清为宜 ,在 DMEM(L)培养基中添加 0 .1μmol/LNa2 Se O3 +0 .1mmol/Lβ-巯基乙醇 +10 μg/L IGF+10 0 0 IU/m L L IF,能显著提高牛 ES细胞分离与克隆效率 ;在TCM199、DMEM(高糖 )和 DMEM(低糖 ) 3种培养基中 ,低糖 DMEM更适宜于牛 ES细胞的分离 ;优秀胚胎形成的团状 ICM更适宜于分离与克隆 ES细胞 ,在 37℃用低浓度消化液处理 ICM或 ES细胞集落 ,再以机械将其离散为细胞小块 ,ES细胞克隆效率最高。
- 安立龙杨奇窦忠英高志敏雷安民杨春荣邱怀
- 关键词：小鼠胚胎干细胞内细胞团克隆
- 成体干细胞研究进展被引量：2
- 2002年
- 近年来由于成体干细胞研究技术的突破 ,成体干细胞的多向分化潜能日益为人们所关注。尤其“横向分化”的发现 ,不仅更新了对成体干细胞的传统认识 ,而且为其临床疾病治疗奠定了基础。介绍了成体干细胞的特点及分化潜能 ,并对其临床应用作了概括性讨论。
- 杨学义华进联马勇江窦忠英
- 关键词：成体干细胞胚胎干细胞横向分化
- 山羊输卵管上皮细胞的分离与培养被引量：3
- 2010年
- 【目的】分离并培养山羊输卵管上皮细胞,研究其生长特性。【方法】采用胰酶、胶原酶及机械刮取方法分离输卵管上皮细胞并分析培养效果;选择免疫细胞化学染色对细胞进行鉴定;向培养液中添加下丘脑粗提物、胰岛素、EGF和血清,探讨其对输卵管上皮细胞体外培养的影响。【结果】胰酶对山羊输卵管上皮细胞的分离效果较差,胶原酶次之,机械刮取方法较好。机械刮取法分离的细胞以细胞团居多,接种后8~12 h开始贴壁生长,生长2~3d细胞呈现明显的铺路石形态。免疫细胞化学染色显示,细胞角蛋白阳性率在95%以上。上皮细胞培养体系中含少量血清及人EGF、胰岛素,能有效促进原代和传代输卵管上皮细胞的生长,以体积分数5%血清＋EGF的培养效果较好。【结论】采用机械刮取法分离培养的输卵管上皮细胞,在体外可连续传到第8代,传代细胞活性强、纯度高,可为输卵管上皮细胞相关功能的研究提供材料。
- 李港杨艳王爱华靳亚平李倩
- 关键词：山羊输卵管上皮细胞胶原酶
- 自原始生殖细胞分离克隆小鼠ES细胞研究初报被引量：12
- 2001年
- 自交配后 9.5～ 13.5 d小鼠胎儿生殖嵴 /腺或其类似物及周围组织 ,采用与其同源胎儿成纤维细胞共培养的方式分离克隆到具小鼠 ES细胞诸多特征的胚胎生殖细胞 ( EG细胞 )系。即具有连续传代的能力 ( 1例来自交配后 11.5 d胎儿类 ES细胞传至 10代 ) ,部分细胞集落呈典型鸟巢状结构 ,AP染色呈阳性 ,体外分化或延迟传代、堆叠培养具有分化形成类胚体、上皮细胞、成纤维细胞或神经细胞等的能力。同样培养交配后 7.5～ 8.5 d和14.5～ 15 .5 d的小鼠胎儿 ,原代观察到类 ES细胞集落 ,继代培养未观察到类 ES细胞集落 ,16 .5～ 18.5 d小鼠胎儿原代培养未观察到
- 华进联窦忠英李松雷安民杨春荣
- 关键词：原始生殖细胞胚胎生殖细胞ES细胞哺乳动物
- 饲养层细胞的接种密度对分离培养胚胎干细胞的影响被引量：4
- 2009年
- 建立有效的昆明白小鼠胎儿成纤维细胞(Mouse embryonic fibroblast,MEF)饲养层培养体系,用于分离和培养小鼠胚胎干细胞(Embryonic stem cell,ES细胞)的研究。(1)取怀孕14.5 d昆明白小鼠胎儿分离成纤维细胞,利用体外培养体系分离传代,选取生长旺盛并且已纯化的P3代的MEF,经丝裂霉素处理后,用细胞计数板计算活细胞数,分别按1×104、1×106、1×108/mL密度接种,制备饲养层,观察不同密度饲养层的生长状况。(2)取怀孕4 d的昆明白小鼠囊胚,接种在不同密度饲养层上。观察不同密度饲养层上囊胚、ICM及ES细胞的克隆生长情况。结果显示:囊胚在密度为1×106/mL的饲养层上,贴壁率和ICM孵出率分别为(97.0±3.606)%和(96.3±2.887)%,显著高于其他2组;密度为1×106/mL饲养层上的ES细胞克隆形成率高于密度为1×104/mL(差异极显著,P<0.01)和1×108/mL饲养层上的ES细胞克隆形成率(差异显著,P<0.05);而1×104/mL饲养层和1×108/mL饲养层上的ES细胞克隆形成率差异不显著(P>0.05)。结果表明:以1×106/mL密度接种的MEF作为饲养层,最适合用于分离培养昆明白小鼠ES细胞,有利于囊胚的发育,ICM的增殖,促进ES细胞的增殖,并起到抑制其分化的作用。
- 赵晶董雅娟柏学进靳亚平张廷龙封纪武
- 关键词：昆明白小鼠胎儿成纤维细胞饲养层胚胎干细胞
- 牛骨髓间充质干细胞的分离、培养及生物学特性的研究
- [目的]建立牛骨髓间充质干细胞(marrow mesenchymal stem cells,MSCs)分离培养体系,研究MSCs的生物学特性,并对其进行鉴定.[方法]通过贴壁筛选法分离纯化牛MSCs,倒置相差显微镜下观察...
- 封纪武董雅娟赵兴曹雷于进亮岳福杰柏学进赵晶刘顺德
- 关键词：骨髓间充质干细胞细胞培养神经细胞生物学特性
- 文献传递
- 山羊子宫内膜腺上皮细胞的分离培养和鉴定被引量：14
- 2006年
- 为了探讨山羊子宫内膜腺上皮细胞的分离、生长条件以及纯度鉴定，通过2g／L的Ⅰ型胶原酶置于水浴消化4h，200目的滤网过滤后进行低速离心，收集沉淀物，沉降洗涤3～5次，将细胞移至24孔培养板置37℃细胞培养箱中进行培养。12h后开始贴壁生长，腺团开始向外部扩散，生长2～3d，细胞扩散并出现明显的铺路石状，4～5d腺团基本扩散开来并呈一定走向继续生长。经免疫组织化学方法进行细胞染色，细胞表达角蛋白的阳性率达90％以上。
- 丰艳妮吴庆侠吴瑞楚元奎靳亚平
- 关键词：子宫内膜腺上皮细胞免疫组织化学山羊
- 不同因素对牛卵母细胞胞质内精子注射效果的影响被引量：1
- 2007年
- 采用胞质内精子注射法(ICSI)构建牛显微受精胚胎,探讨卵母细胞成熟培养时间、精子状态及精子操作液中聚乙烯吡咯烷酮(PVP)浓度对牛卵母细胞胞质内显微受精(ICSI)卵体外发育的影响。结果显示:成熟培养20 h、24 h和28 h的卵母细胞用于ICSI时,ICSI卵的形态完整率分别为94.6%(175/185)、97.2%(173/178)和96.4%(189/196)(P>0.05);成熟培养24 h和28 h的卵母细胞,其ICSI卵的卵裂率(73.4%和70.9%)和囊胚发育率(31.8%和29.6%)显著高于成熟培养20 h的卵母细胞(61.1%和20.6%)(P<0.05)。对成熟培养24 h的卵母细胞注射获能精子时,ICSI卵的卵裂率和囊胚发育率(72.7%和31.4%)高于未获能精子组(69.4%和29.3%)和不运动精子组(71.5%和30.4%),但无统计学差异(P>0.05)。采用含5%,10%和15%PVP的精子操作液处理获能精子后对成熟培养24 h的卵母细胞进行ICSI操作,PVP浓度为5%和10%时,ICSI卵的卵裂率(73.2%和66.9%)和囊胚发育率(32.7%和29.7%)差异不显著(P>0.05),但二者均显著高于15%PVP浓度组的卵裂率和囊胚发育率(51.0%和16.3%)(P<0.01)。结论认为,选用获能精子,并使用含5%PVP的精子操作液进行处理,对成熟培养24 h的牛卵母细胞进行ICSI操作,有利于ICSI卵的体外发育。
- 原巨强陈静波刘赛海里且木赵晓娥马保华
- 关键词：显微受精卵母细胞体外成熟聚乙烯吡咯烷酮
- CD58与山羊早孕因子之间关系的研究被引量：5
- 2003年
- 应用猪淋巴细胞Ea花环抑制试验 ,建立了山羊EPF测定的方法 ,检测了山羊妊娠早期血清中EPF的活性并对EPF与CD5 8的活性关系进行了研究。结果证明 :猪淋巴细胞Ea花环抑制试验可应用于山羊EPF活性的测定 ;妊娠早期 ( 1～ 2ld)山羊血清中存在EPF活性 ,第 1,8d有活性峰值 (RIT值分别为 18 8± 1 1,2 1 2± 1 8) ,其余时间EPF活性相对稳定 ,呈现一定规律性变化 ;CD5 8( 1∶10 0 )孵育淋巴细胞后 ,RIT值显著高于HBSS液对照组(P <0 0 5 ) ,CD5 8( 1∶2 ,1∶10 )孵育淋巴细胞后 ,RIT值极显著高于HBSS液对照 (P <0 0 1) ,认为CD5 8活性可以用Ea花环抑制试验进行测定并具有与EPF协同抗淋巴细胞血清使RIT值升高作用相似的功能 ;妊娠山羊血清经CD5 8,CD2 ,HBSS液等处理后孵育淋巴细胞 ,经CD5 8处理组RIT值极显著高于HBSS液处理组 (P <0 0 1) ,经CD2处理组RIT值极显著低于HBSS液处理组 (P <0 0 1)而与HBSS液对照组差异不显著 (P >0 0 5 ) ,表明CD5 8与EPF可共同协同抗淋巴细胞血清抑制Ea花环形成 ,CD2对EPF有一定程度的封闭作用。进一步认为CD5 8与EPF具有一定程度的抗原交叉性。
- 马勇江靳亚平王爱华曹斌云李引乾沈文正
- 关键词：CD58山羊
- 奶牛不排卵状况的研究综述被引量：6
- 2003年
- 卵泡生长可分为三个阶段:卵泡出现;卵泡的选择优势化与闭锁分离;卵泡排卵。不排卵的情况可分为:①生长卵泡不能生长至“分离期”。原因可能是极度的营养缺乏。②卵泡可生长到“分离期”,但没有达到排卵体积。这方面研究得较多,认为这类牛比正常牛有更强的E_2对GnRH/LH的负反馈,在营养不良或吮乳时可引起这类不排卵状况。③卵泡生长的最终体积大于排卵卵泡,这类牛的特征是下丘脑对E_2的正反馈作用不敏感;高产奶牛常见。对于第一种情况,关键在于预防,提高育成期的饲管水平。后两种常见的不排卵状况是由于下丘脑对E_2反应的敏感性改变;常用增加血液循环中P4的浓度改变GnRH/LH释放的脉冲以协助卵泡最后阶段的生长,或重新建立下丘脑对E_2的正反馈来治疗。
- 杨炜峰窦忠英高志敏
- 关键词：奶牛卵泡生长发育持久黄体
