南方医科大学基础医学院教育部和广东省共建重大疾病转录组与蛋白组学重点实验室
- 作品数：5 被引量：16H指数：3
- 发文基金：广东省重大科技专项国家重点基础研究发展计划中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 两种样品制备方法对血清蛋白质双向凝胶电泳分离效果的影响被引量：4
- 2007年
- 目的评价两种样品制备方法对血清蛋白质双向凝胶电泳(2-DE)分离效果的影响,建立高分辨率、高重复性的血清2-DE图谱,为鉴定疾病相关血清蛋白质奠定基础。方法分别用热SDS法和直接溶解法处理大肠癌血清样品,采用固相pH梯度双向凝胶电泳技术分离总蛋白质,图像软件分析后,对其中3个差异蛋白质点行基质辅助激光解吸电离/飞行时间质谱鉴定。结果应用热SDS法处理血清总蛋白质进行双向电泳,可获得分辨率高、重复性好的人血清双向电泳图谱。对直接溶解和热SDS法处理的蛋白样品进行3次重复性检测,凝胶的平均蛋白质点数为675±46和702±49,平均匹配点数为573±42和623±52,匹配率为85.3%和89.6%,分析3块不同胶间蛋白质点在IEF方向的位置偏差为(0.85±0.30)mm和(0.81±0.28)mm,在SDS-PAGE方向上的偏差为(1.02±0.18)mm和(0.97±0.12)mm。热SDS处理的2-DE胶蛋白质点质谱可获得高质量质谱图,并可以检测到相对低丰度的血清蛋白质。结论热SDS法是一种更有效的血清蛋白质样品制备方法,我们利用热SDS法处理血清样品建立了分辨率较高且重复性好的人血清蛋白质双向凝胶电泳图谱。
- 赵亮丁彦青梁莉李欣李雪华吴丽莎
- 关键词：双向凝胶电泳蛋白质组
- X线照射对宫颈癌HeLa细胞醛缩酶A表达和定位的影响被引量：1
- 2010年
- 目的:观察宫颈癌HeLa细胞转染醛缩酶A(aldolase A,ALDOA)后,在X线作用下ALDOA在细胞内定位的改变,以及其对细胞存活率的影响。方法:克隆出ALDOA全长编码序列,构建真核表达质粒pECFP-C1-ALDOA,实验组通过脂质体介导将pECFP-C1-ALDOA转染HeLa细胞,设载体pECFP-C1作为阴性对照,各组均给予X线照射,荧光显微镜观察照射前后HeLa细胞中pECFP-C1-ALDOA和pECFP-C1表达及定位的变化,用XTT法检测细胞存活率的改变。结果:双酶切和DNA测序证明所构建质粒正确;荧光显微镜下观察HeLa细胞内pECFP-C1-ALDOA主要分布于胞浆,pECFP-C1为全细胞均匀分布;经X线照射24h后胞浆中的pECFP-C1-ALDOA逐渐转至胞核,而pECFP-C1在细胞内的定位则不发生明显改变;经XTT法检测,发现X线照射后,转染pECFP-C1-ALDOA质粒的细胞存活率明显高于转染pECFP-C1的对照组细胞。结论:抑制ALDOA的表达,可使X线更易诱导宫颈癌细胞的死亡,因此其可能作为宫颈癌放射治疗的新靶点。
- 何敏毅孙学刚文戈赵亮
- 关键词：X线HELA细胞
- 脂多糖和热打击联合作用对人肠上皮细胞细胞骨架的影响被引量：8
- 2010年
- 目的观察脂多糖(LPS)与热打击单独和联合作用对人肠上皮细胞细胞骨架的影响。方法培养人肠上皮细胞株(SW 480),实验分组为:对照组,热打击组(又分为热打击1、3、6 h组),LPS刺激组,热打击和LPS联合刺激组,用骨架蛋白(肌动蛋白F-actin)的特异性染料罗丹明标记的F-actin特异性结合物鬼笔环肽(rhodam ine-phalloid in)和细胞核特异性染色剂(DAPI)行免疫荧光,检测在上述刺激作用下细胞形态的改变和F-actin在细胞内分布的变化。结果相比于对照组,热打击1 h就可以使细胞轮廓变圆,细胞伪足变短变粗,细胞间间隙变大。热打击3 h时上述情况更加明显,而热打击6 h时,细胞几乎全部坏死漂浮。单独LPS作用6 h时也能看到多数细胞出现伪足变短变粗,细胞间间隙增大情况,但较单独热打击1 h组程度轻。而热打击和LPS联合作用则可看到二者间存在一定的协同作用。正常对照组细胞的F-actin呈相对均匀分布,但以细胞周边和核的周围居多,而单独LPS作用即可看到细胞骨架发生重组,出现应力纤维,而和热打击联合作用时,细胞周边的F-actin明显减少,出现明显的应力纤维(变粗、变短、紊乱,排列呈明显的非极性单向分布)。结论热打击和LPS单独作用均可使细胞形态发生明显改变,细胞骨架发生重组,细胞间间隙增大,并且二者之间存在一定的协同效应,这为理解重症中暑至多脏器功能衰竭(MODS)发生发展过程中,肠屏障细胞的通透性增加进而引发肠道细菌和内毒素移位的作用机制提供了直观的实验依据。
- 刘志锋曾平刘亚伟唐柚青童华生苏磊
- 关键词：脂多糖细胞骨架肠上皮细胞重症中暑
- 热休克蛋白27在大肠癌中的表达及其与淋巴结转移的关系被引量：3
- 2008年
- 目的探讨热休克蛋白27(HSP27)表达与大肠癌淋巴结转移的关系。方法应用免疫组化方法检测68例临床大肠癌组织标本中Hsp27的表达情况。应用RT-PCR、Western blotting和免疫组化方法检测不同转移潜能大肠癌细胞株中Hsp27mRNA和蛋白的表达情况。结果在大肠癌组织中,热休克蛋白27的表达率与年龄、性别、淋巴结转移、临床分期无相关性(χ2test,P>0.05),但其过表达和大肠癌淋巴结转移显著负相关(Fisher'sexacttest,P=0.035)。应用RT-PCR、Western blotting和免疫组化方法检测结果显示Hsp27基因和蛋白在高淋巴结转移潜能的SW620细胞中呈低表达,在低淋巴结转移潜能的SW480细胞中呈高表达。结论Hsp27和大肠癌肿瘤细胞的转移行为可能为负相关,可能在阻止其转移中发挥重要作用。
- 赵亮李祖国丁彦青
- 关键词：大肠癌热休克蛋白27淋巴结转移
- 脂多糖和热打击联合作用对人肠上皮细胞释放细胞因子的影响
- 目的：观察脂多糖(LPS)与热打击单独和联合作用对人肠上皮细胞释放细胞因子的诱导作用。
方法：培养人肠上皮细胞株(SW480)，分别用不同浓度的LPS(0，0.01，0.1，1，10μg/ml)刺激培养的SW4...
- 刘志锋刘亚伟唐柚青孟繁甦徐秋林刘铮苏磊
- 关键词：脂多糖细胞因子肠上皮细胞重症中暑多脏器功能衰竭
- 文献传递
