华中农业大学农抗研究室
- 作品数：10 被引量：22H指数：4
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- 链霉菌高拷贝质粒pIJ101的研究——Ⅴ.两个拷贝数突变子及其与克隆片段的关系被引量：1
- 1993年
- 在分离和定位链霉菌高拷贝质粒 pIJ101上启动子活性区域的过程中,我们将 Bcll-E 片段经 MboI 进一步酶解后,克隆到由 pIJ101基本复制功能区所衍生的载体 pIJ425的 BgIII位点上,从转化变铅青链霉菌 TK64的原生质体所获得的硫链丝菌素抗性转化子中,发现了两个拷贝数极其异常的衍生质粒,命名为 pIJ2743和 pIJ2744。与 pIJ425相比,pIJ2743的拷贝数增加约10倍,而 pIJ2744的拷贝数则降低约10倍。拷贝数的剧增和剧减不是由于质粒宿主的突变,因为它们在重新转化的宿主中仍显示了突变型拷贝数特征。拷贝数的变化也不是由于载体的突变,因为切除插入片段后,载体区域再连接后的质粒仍与原始 pIJ425的拷贝数相同。将高拷贝突变子中0.63kb 的插入片段以两种不同的取向克隆到另一个类似于pIJ425的载体 pIJ486的 BamHI 位点,在一种取向插入时,新衍生的质粒仍显示出极高的拷贝数,而在另一种取向时,质粒的拷贝数不发生变化,说明拷贝数的剧增不仅只与插入片段有关,而且其功用具有明显的方向性,即为一顺式作用因子。
- 邓子新T.KieserD.A.Hopwood
- 关键词：链霉菌属拷贝质粒
- 一个链霉菌的质粒pHZ65及其载体的发展被引量：1
- 1992年
- FR-001和FR-005为农抗5102产生菌经原生质体融合后所产生的融合重组子,它们在形态及培养特征,抗菌活性及代谢产物方面均有明显差别。然而,它们则均含有一个DNA顺序同源,分子量大小均为20.1kb的质粒,命名为pHZ65。已用酶切分析法制做了这个质粒被限制内切酶BamHI,BclⅠ,BglⅡ,EcoRV,KpnⅠ,PstⅠ,SphⅠ,SstⅠ,XhoⅠ酶切共29个切点的详细图谱。在体外将携带了硫链丝菌素抗性基因tsr(可在链霉菌中表达)和氨苄青霉素抗性基因amp(可在大肠杆菌中表达)的大肠杆菌质粒pIJ2703插入到pHZ65的BclⅠ或BglⅠ位点,获得了4个既可转化链霉菌,又可转化大肠杆菌的双功能质粒pHZ200,pHZ201,pHZ206和pHZ207。将pHZ65的片段克隆到pIJ2703的BclⅠ位点所组建的一系列质粒在链霉菌中的复制能力揭示出pHZ65的必要复制功能区位于5个BglⅡ片段的2个连锁的片段(分别为4.44和0.52kb)之内。已从pHZ65衍生了一系列链霉菌——大肠杆菌的双功能载体。这类载体可以转化吸水链霉菌应城变种(FR-001和FR-005的融合亲本),而许多其它质粒载体则不能。
- 邓子新周秀芬
- 关键词：复制子限制酶链霉菌质粒
- 神农架自然保护区土壤放线菌生态分布的研究
- 1989年
- 自神农自然保护区采取不同海拔的土壤,在分析其土壤微生物区系的基础上,对其中的放线菌类群及其拮抗性作了研究。
- 周启梁蓉芳
- 关键词：土壤放线菌土壤微生物区系生态分布微生物类群土壤有机物
- 农抗5102产生菌与泾阳链霉菌5406融合的初步研究被引量：4
- 1997年
- 本文报道农抗5102产生蓖衍生菌株90－11和WH－1与泾阳链霉菌5406之间融合研究的前期结果。研究表明，二级生长培养基中蔗糖浓度增加至17％及匀浆打散菌丝团，均能提高5406菌株的原生质体释放量。农抗5102产生菌与泾阳链霉菌原生质体制备的适宜条件差异较大。菌株90-11和WH-1较易酶解，适宜条件为：32℃，溶菌酶量2－4mg／ml，1－1．5h；而5406菌株需相对较高的酶量和校长的酶解时间：32℃，溶菌酶量6－8mg／ml；1．5－2h。各菌株原生质体在-20℃下冻存，一个月内可维持70％以上相对再生率。以50％PEG1000诱导融合，利用抗性标记检出融合子，固定农抗5102产生曾与泾阳链霉菌5406的种间融合频率为10-4。
- 张修军周启
- 关键词：原生质体融合
- 类链霉菌属的一个新种
- 1993年
- 在筛选农用抗生素的过程中,从湖北省神农架海拔3100公尺的土壤中分离到一株对革兰氏阳性和阴性细菌均有抑制活性的放线菌,编号B001。该菌株的基内菌丝体不分隔,插入基质中生长,在绝大多数培养基上呈黄色色调和不产生可溶性色素;气生菌丝体发育缓慢,白色或乳黄色;菌落表面粉状,易刮落;孢子链很长,直到波曲,有互生分枝;孢子呈球形或椭圆形,表面光滑,细胞壁含有meso-DAP和Gly,全细胞糖C型;DNA中G+C克分子含量为71.4％。根据这些特性,菌株B001应属于类链霉菌属,经过与已知种比较,两者有明显区别,因此,定为新种。命名为白黄类链霉菌(Streptomycoides alboflavus n.sp)。
- 梁蓉芳谢庆周启
- 关键词：抗菌素
- 以吸水链霉菌应城变种为宿主的一系列基因克隆体系的发展被引量：3
- 1992年
- 对链霉菌分子生物学的兴趣有一个十分突出的特点,就是人们感兴趣的菌种非常广泛,这个特点出自对不同的抗生素和细胞外酶生物合成遗传调控研究的需要。吸水链霉菌应城变种就是这类有趣菌种中的一员。 吸水链霉菌应城变种具有下述有趣的特征:(一)它产生三种不同结构的农用抗生素,一种为氨基糖苷类抗生素,与有效霉素A(Validamycin)的结构相类似,对水稻病原菌中的丝核菌类(如纹枯病,小核菌核病),具有良好防效;一种为多肽类抗生素。
- 邓子新
- 关键词：吸水链霉菌
- 吸水链霉菌应城变种和庆丰链霉菌种间原生质体融合及其融合子的生物学特性被引量：5
- 1989年
- 本文报道利用抗生素产生菌吸水链霉菌应城变种WNF-2-1-90-11菌株(Leu^-Sm^R)和庆丰链霉菌A_(553-1)菌株(Pro^-Sm^R)为亲株,以42%的PEG4000为助融剂,进行了种间原生质体融合,用间接法检出融合重组子38株,其重组频率约为4.5×10^(-4)。重组子除孢子丝形态外,孢子堆颜色、抗药性、抗菌活性和抗生素生物合成能力方面与亲株均有一定差别,而且不同重组子之间也不相同,特别在抗菌活性方面,其中重组子FL-42和FL-48不仅具有两个亲株所产生的4种抗生素的活性,而且还产生两个亲株不具有的活性物质。通过纸层析谱表明,这种活性物质,两个重组子之间也不相同。
- 周秀芬周启
- 关键词：链霉菌原生质体融合
- 利用弗氏链霉菌的修饰系统克服吸水链霉菌的限制性障碍——发展吸水链霉菌转化系统的尝试被引量：7
- 1993年
- 用来自变铅青链霉菌TK24的质粒plJT02(tsr、mel^+)转化吸水链毒菌应城变种10-22的原生质体,未能得到转化子。但改用来自弗氏链霉菌ATCC 10745的plJ702转化10—22原生质体却得到了转化子。转化频率约10 ~3—10~4转化子/微克DNA。在这些转化子中,只有约1/1000是黑色菌落(mel^+),绝大部分为白色菌落(mel^-)。分别挑出黑色、白色2种菌落,只有从前者能提出电泳可见的plJ702质粒带。2种菌落的质粒提取物,均能转化TK24原生质体并正常表达黑色素。在非选择性条件下,从10-22(pIJ702)黑色菌落的群体中,获得了少数白色菌落,经证明它们是10-22的宿主突变体。这些突变体的plJ702转化子出现均一的黑色菌落。
- 覃重军邓子新周启陈华癸
- 关键词：农用抗菌素链霉菌
- 农抗5102产生菌原生质体融合育种的研究——Ⅳ.融合子FR-008的验证及其产生新活性物质的分离和鉴别被引量：6
- 1991年
- 本文在探索5102-1号抗生素液相色谱(HPLC)分析法的基础上,从出发菌株10-22和融合子FR-008的发酵物中均分离出5102-1号抗生素的主要组分,进一步证实融合于FR-008为吸水链霉菌应城变种种内融合的重组子。实验还从融合子FR-008的发酵物中分离和纯化了出发菌株不能产生的活性物质,通过与浓硫酸和浓盐酸反应呈深兰色,紫外可见光谱在403,380,360,340um处有吸收峰等特征,表明它是一种七烯大环内酯类抗生素。在建立该抗生素中芳香残基的液相色谱分析法时,证明其中含有对氨基苯乙酮残基。用氨基酸分析仪测定经硫酸甲醇醇解和醇解产物再水解后的抗生素样品,表明它含有与已知七烯大环内酯类抗生素不同的氨基糖残基,其详细结构有待进一步研究确定。
- 袁德军周启
- 关键词：育种
- 链霉菌及以链霉菌为宿主的基因表达
- 1992年
- 一、前言 链霉菌产生众多的抗生素,工业用酶和一些具有药物活性的分子,它们是腐生菌,可以催化利用许多复杂的碳、氮、磷源。为此,它们具有高度调节的分解代谢系统以及分泌水解酶的有效方式。它们的生活史还包括产生气生菌丝、孢子以及次级代谢产物的过程。因此它们既适用于基础研究,又适用于应用研究。此外,因为它们通常分泌水解酶。它们在代谢方面可能具备产生和分泌外源蛋白的整套功能。
- 周秀芬邓子新
- 关键词：链霉菌抗生素基因表达
