上海海洋大学生物技术研究中心
- 作品数：11 被引量：45H指数：6
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- 三角帆蚌alpha-2巨球蛋白cDNA全长的克隆及表达特征被引量：10
- 2008年
- alpha-2巨球蛋白是河蚌体内重要的天然免疫因子,参与广泛的免疫防御和调节。通过RACE法克隆了三角帆蚌α2M全长cDNA序列,提交Genbank,获得核苷酸序列登陆号:DQ993157.1。同时,采用生物信息学方法对alpha-2巨球蛋白进行了系统分析。该基因cDNA全长5124bp,其中编码区4836bp,5′端非编码区35bp,3′端非编码区为253bp(含polyA尾31bp),该基因能编码1611个氨基酸,其中前23个氨基酸残基为信号肽序列,成熟蛋白分子量为177571.8u,等电点为5.49。蛋白的不稳定系数为39.53,表明该蛋白是稳定的。在此基础上,以18S作为内标,利用半定量RT-PCR法检测α2M基因在三角帆蚌不同组织和不同生理状态下的表达情况。结果表明,alpha-2巨球蛋白仅在血细胞中有表达,而在外套膜、闭壳肌、肠和性腺中没有表达。经注射大肠杆菌和嗜水气单胞菌12h后,三角帆蚌体内α2M的表达水平都有一定量的升高,证明α2M是三角帆蚌基础免疫系统中的组成部分。本研究丰富了软体动物免疫学研究内容,为三角帆蚌抗病机理提供理论资料。
- 施志仪杨显祥陈晓武李勇
- 关键词：三角帆蚌基因表达
- 褐牙鲆变态期间骨骼发育及其相关基因Sox9,Bmp4和Bmp2的表达分析被引量：7
- 2009年
- 褐牙鲆作为一种重要的经济鱼种,有一个特殊的变态发育时期,其间骨骼形态和位置都发生很大改变。本研究利用三重染色技术,对褐牙鲆变态发育时期不同阶段的仔鱼整体骨骼进行染色,并对各阶段仔鱼及部分成鱼组织,采用特异性引物对骨骼发育的相关基因Bmp2,Bmp4和Sox9基因片段进行了克隆和半定量分析。研究表明,随着仔鱼变态发育,部分软骨逐渐转化为硬骨,头部筛骨呈不对称分化,额骨和顶骨位置发生改变,口形态改变,鳃丝软骨成骨,脊椎逐渐发育成熟,随之侧线位置发生改变。Sox9以及Bmp2、Bmp4基因在这时期中存在着差异表达,对骨骼发育有一定的调控作用。成鱼中,Bmp2和Sox9只在鳃、肠道和肝脏中有表达,且鳃中表达量较高。Sox9出膜后表达量突然增加,头部表达量较高,变态发育中开始递减,在变态高峰期明显减少;而Bmp4表达量则是出膜后明显减少,随后在变态高峰期表达量有增加,总体趋势表达量减少。
- 曾宣施志仪陈晓武程千千
- 关键词：褐牙鲆变态发育
- 插核手术对三角帆蚌血淋巴中3种免疫防御因子的影响被引量：7
- 2009年
- 对三角帆蚌(Hyriopsis cumingii Lea)进行内脏团插核手术,并对术后机体免疫相关因子基因alpha-2巨球蛋白(α2M)、酶酸性磷酸酶(ACP)和超氧化物歧化酶(SOD)的变化情况进行研究,旨在为三角帆蚌内脏团育珠实践提供理论依据。实验选取100只健康三角帆蚌分为2组(各50只,每组各设5个重复,每重复各10只蚌),一组在蚌体内脏团进行插核手术(实验组),一组未经处理(对照组),分别饲养于相同条件恒温(24℃)淡水缸内。两组分别于插核后1天、2天、3天、5天及10天采集淋巴血,通过RT-PCR及酶活测定法研究α2M基因表达和ACP、SOD在术后活性的变化。结果发现,α2M基因在手术后表达量增加,在插核后第3天和第5天与对照组差异显著(P<0.05);实验组血清和血细胞中ACP活性均显著高于对照组;实验组血清中SOD活性在第3天、5天、10天高于对照组(P<0.05);实验组血细胞中SOD的活性低于对照组。本研究表明,内脏团插核手术后三角帆蚌机体的免疫防御调节增强,血液中免疫相关基因α2M的表达水平和免疫相关酶ACP和SOD活性均有明显变化。
- 何秀娟施志仪李文娟
- 关键词：三角帆蚌酸性磷酸酶超氧化物歧化酶
- 牙鲆甲状腺激素受体TRαA的原核表达和多克隆抗体的制备及其应用
- 为研究牙鲆甲状腺激素受体TRαA在牙鲆变态发育过程中的调控作用，将TRαA基因克隆插入融合表达载体pET-30a，并在大肠杆菌Escherichia coliDE3(BL21)中进行诱导表达。表达菌株经1 mmol/L异...
- 贾亮
- 关键词：牙鲆原核表达抗体制备染色质免疫沉淀
- 文献传递
- 甲状腺激素受体在大菱鲆组织细胞中的表达及其与甲状腺激素的关系
- 2010年
- 为了探讨甲状腺激素受体在大菱鲆(Scophthalmus maximus)体内的表达情况及在细胞水平三碘甲状腺原氨酸(T3)对甲状腺激素受体(TR)表达量的影响,利用荧光定量PCR法检测了大菱鲆8个组织中甲状腺激素受体TRαA、TRβ的表达量,并设计了0,50,75,100和200 nmol/L 5个不同浓度的T3处理大菱鲆肾细胞(SMKC),采用实时荧光定量PCR法测定T3处理后甲状腺激素受体TRαA、TRβ的表达量。结果表明,甲状腺激素受体TRαA、TRβ在大菱鲆不同组织中的表达量各不相同,但两者均在肾脏组织中表达量最高。在不同浓度T3处理后甲状腺激素受体的表达量存在明显的差异,在低浓度条件下,TRαA、TRβmRNA的表达量增加,当T3浓度达到100 nmol/L时,TRαA、TRβmRNA表达量明显降低,说明50,75 nmol/L的T3能够引起细胞中甲状腺激素受体TRαA、TRβ表达量的增加,而100,200 nmol/L的T3会相对抑制细胞中甲状腺激素受体TRαA、TRβ的表达量。
- 田娟施志仪
- 关键词：大菱鲆
- 内脏团插核术刺激对三角帆蚌血细胞的影响被引量：8
- 2010年
- 为了探讨三角帆蚌(Hyriopsis cumingii Lea)血细胞的类型及内脏团插核手术刺激对血细胞形态结构和数量的影响,研究利用相差显微镜、光学显微镜、透射电子显微镜和流式细胞仪对三角帆蚌血细胞进行了形态学研究。流式细胞术光散射图谱显示血细胞被分两类,一类为颗粒度高的大细胞,另外一类为颗粒度低的小细胞;相差显微镜观察显示,血细胞可分为胞体暗、折光性差和胞体明亮、折光性强的两类;Giemsa和H.E染色显示细胞分为胞质染色不均一、胞内颗粒明显和胞质染色均一、胞内颗粒不明显的两类;透射电镜超薄切片观察显示,颗粒明显的细胞胞质内线粒体、高尔基体等细胞器较丰富,颗粒不明显的细胞胞质内细胞器较少;负染结果表明血细胞主要分为表面不光滑、突起明显和细胞表面光滑、突起较不明显的两类。综合上述实验结果可见,三角帆蚌血细胞分为颗粒明显的细胞和颗粒不明显的透明细胞两大类。内脏团插核术刺激后,血细胞的形态和比例均发生显著变化。血细胞形态更多样,伪足状突起更明显,细胞内囊泡状物质增多,血细胞密度显著增高(P<0.01),颗粒细胞数量相对增加,透明细胞数量相对减少,并且手术刺激后两类细胞所占比例的变化在相差显微镜观测中差异极显著(P<0.01)。研究表明,作为三角帆蚌免疫系统重要组成部分的血细胞,在插核手术后,其类型、形态结构和数量均产生明显变化,这是机体对外界刺激产生的免疫防御反应,其中颗粒细胞担负着主要的免疫功能。
- 何秀娟施志仪陈晓武程千千
- 关键词：三角帆蚌血细胞
- 牙鲆甲状腺激素受体TRαA的原核表达和多克隆抗体的制备及应用被引量：1
- 2009年
- 为研究牙鲆甲状腺激素受体TRαA在牙鲆变态发育过程中的调控作用,将TRαA基因克隆插入融合表达载体pET30a,并在大肠杆菌Escherichia coli DE3(BL21)中进行诱导表达。表达菌株经1mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导4h后,重组蛋白TRαA表达并形成包涵体。SDS-PAGE和Western blotting检测鉴定表达产物。包涵体经变性后在His-Bind树脂进行亲和层析纯化,柱上复性法对重组蛋白复性,获得纯度较高的目的蛋白,蛋白复性的效果良好。用纯化后的目的蛋白免疫新西兰家兔制备多克隆抗体。Dotblotting检测抗体效价达1:200000,检测证明抗体特异性良好。此外,通过染色质免疫沉淀技术鉴定了在活体细胞中多克隆抗体与TRαA的特异性结合,表明了甲状腺激素通过其受体在体内参与碱性磷酸酶(ALP)基因的转录调控。
- 贾亮施志仪张俊玲
- 关键词：牙鲆原核表达抗体制备染色质免疫沉淀
- 碱性磷酸酶在大菱鲆不同组织的表达及其与甲状腺激素的关系被引量：9
- 2011年
- 为了探讨碱性磷酸酶(ALP)基因在大菱鲆(Scophthatmus maximus)体内的表达情况及在细胞水平上三碘甲状腺原氨酸(T3)对碱性磷酸酶(ALP)基因表达量的影响,利用荧光定量PCR法检测了大菱鲆肠、肌肉、脾脏、心脏、鳃、肝脏、肾脏及脑8个不同组织中ALP mRNA的表达情况,并且用0 nmol/L、50 nmol/L、75 nmol/L、100 nmol/L、200 nmol/L 5个不同浓度的T3处理大菱鲆肾细胞(SMKC),采用实时荧光定量PCR法测定T3处理后细胞中ALP mRNA的表达情况。结果表明,ALP mRNA在大菱鲆不同组织中的表达量各不相同,具有组织特异性。心脏组织中ALP mRNA的表达量最高,其次是肝脏组织中和鳃组织中,肌肉组织中ALP mRNA的表达量最少。不同浓度T3处理后大菱鲆肾细胞后,细胞中碱性磷酸酶基因的表达量存在明显的差异,ALP mRNA的表达量随着T3浓度的增加有递增趋势。结论认为,ALP基因在大菱鲆成鱼8个不同组织中均有表达,但其表达量却有明显的差异,具有组织特异性。ALP基因的表达量受甲状腺激素T3正向调控,并有浓度依赖性。
- 田娟施志仪
- 关键词：大菱鲆
- MicroRNA与动物发育被引量：6
- 2010年
- MicroRNA(miRNA)是一类约22nt大小的内源性非编码RNA,它们通过剪切靶基因的转录产物或者抑制转录产物的翻译从而起到转录后调控靶基因表达的作用。在动物体内,通过基因敲除等方法所进行的大量研究表明了miRNA参与了胚胎早期发育、脑及神经发育、心脏发育、肌肉及骨骼发育等动物发育的各个方面。miRNA是动物发生发育过程中重要的调控因子。主要介绍了近年来miRNA在动物生长发育过程中的研究进展。
- 付元帅施志仪
- 关键词：MIRNA早期胚胎发育心脏发育
- 牙鲆精氨酸酶基因片段的克隆及序列分析被引量：2
- 2016年
- 根据Gen Bank中虹鳟、大菱鲆、斑马鱼及其他生物的精氨酸酶基因序列设计并合成一对引物,并提取变态期牙鲆仔鱼总RNA作为模板进行RT-PCR,得到一条c DNA片段。将产物连接到T载体中,转化、扩增重组质粒。提取大肠杆菌中的重组质粒进行DNA测序。将DNA测序所得到的基因序列翻译成蛋白序列和已知的大菱鲆、鲤鱼、虹鳟、斑马鱼的精氨酸酶基因序列进行同源性分析。结果显示,利用RTPCR的方法扩增出一条284 bp的目的基因片段,比对结果发现,其与大菱鲆、鲤鱼、斑马鱼以及虹鳟精氨酸酶基因蛋白序列的同源性分别为96%、85%、84%和82%。对蛋白序列进行生物信息学分析发现,整个蛋白序列中无信号肽,无糖基化位点,无跨膜结构域,但含有一个典型的arginase结构。在N-端第38-44、57-64、71-76、89-94区段有β-折叠中心;第7-18、50-52、81-87区段可能形成α螺旋区域。Arg蛋白N端第37-45和第74-77区段为优势抗原表位区域。
- 刘华施婷婷施志仪
- 关键词：牙鲆精氨酸酶克隆
