西北农林科技大学动物医学院陕西省干细胞工程技术研究中心
- 作品数：51 被引量：72H指数：4
- 相关作者：云彦胡勇策孙军伟殷吉庆廉智敏更多>>
- 相关机构：东北农业大学生命科学学院北京协和医学院血液病医院青岛农业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部科学技术研究重点项目教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- miRNAs对雄性生殖干细胞增殖与分化的作用
- Differential expression miRNAs were selected and confirmed by a series of techniques including miRNA deepseque...
- 华进联
- 关键词：动物生态学生殖细胞基因调控
- 牛精原干细胞体外培养条件的筛选及生物学功能验证
- 探索四种培养液、三种细胞外基质以及胰岛素样生长因子(IGF-1)对牛精原干细胞体外增殖的影响,并对其进行鉴定。试验1：以IMDM+ 1％KSR、IMDM+5％KSR、DMEM+1％KSR DMEM+5％KSR作为培养液,...
- 雷琦敬华进联
- 关键词：精原干细胞PLLLAMININMATRIGELIGF-1
- 不同长度茎部shRNA表达载体构建与鉴定
- 2010年
- 本研究针对同一目的基因设计构建不同茎部长度的shRNA表达载体,并对其在细胞及胚胎水平的干扰效应做一比较。以绿色荧光蛋白基因为沉默效应的靶基因,设计茎部长度分别为21bp、27bp、29bp的干扰片段,退火后连入带有H6启动子的真核表达载体psiSTRIKE中(分别命名为EGFP-21siRNA、EGFP-27siRNA和EGFP-29siRNA),将构建成功的载体以脂质体法转染小鼠胚胎成纤维细胞,利用荧光定量PCR对其荧光表达进行精确定量。不同茎部长度的shRNA载体均使绿色荧光蛋白基因表达降低,茎部为29bp时比21bp、27bp表现出更明显的沉默效应。细胞水平沉默效应的初步验证,为筛选适合小鼠个体水平的最佳发夹结构奠定了基础。
- 刘中华乔宪凤肖红卫刘西梅王华岩郑新民
- 关键词：基因沉默SHRNA绿色荧光蛋白小鼠荧光定量PCR
- 维生素A类化合物与生殖细胞发育被引量：1
- 2011年
- 维生素A（VA）是生命有机体内细胞增长、分化、增殖和程序性凋亡的关键调节因子，其参与胚胎发育、组织分化、肿瘤细胞生长等重要过程，对视力、上皮组织及骨骼发育、配子生成及胎儿的生长发育等所必需。视黄酸（RA）是维生素A的生物活性代谢所产生的一种脂溶性的小分子物质，主要由环乙烯、侧链和极性基团组成。根据其双键构型的不同，可分为反式视黄酸和顺式视黄酸。
- 曹晖华进联
- 关键词：维生素A类化合物肿瘤细胞生长组织分化小分子物质视黄酸
- 奶山羊睾丸组织冷冻保存及复苏后精原干细胞的分离培养被引量：4
- 2011年
- 以关中奶山羊为材料,比较了2种玻璃化冷冻法和1种慢速冷冻法对睾丸组织保存的效率,复苏后发现3种冻存方法均有较高的成活率(超过50%),其中玻璃化Ⅱ组达65%以上,培养及检测后均有精原干细胞存活,在体外培养可以形成胚胎干细胞样克隆,其表达精原干细胞和多能性干细胞的相关特异性标记:碱性磷酸酶(AP)、CD49f、CD133、C-Myc、Oct4和Klf4阳性,证明睾丸组织冷冻可以提供一种有效的奶山羊精原干细胞的保存方法。试验中所使用的低温保存方法简便易行,效果良好,表明这些方法可为癌症治疗等造成的无精症及少精症等不育症患者的医治以及一些珍稀濒危物种和优良畜禽的生殖细胞保存提供一种简捷有效的途径。
- 朱海鲸华进联宋文聪黄建升田泽华
- 关键词：睾丸组织精原干细胞奶山羊
- 小鼠Dazl基因融合蛋白表达载体的构建及转染被引量：1
- 2013年
- 根据NCBI数据库上公布的小鼠Dazl基因的mRNA序列设计引物,以小鼠睾丸组织RNA为模板,RT-PCR扩增小鼠Dazl基因编码区片段,并将其克隆到增强型绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C1中,构建重组融合蛋白表达载体pEGFP-C1-Dazl,单双酶切和测序验证正确。将pEGFP-C1-Dazl质粒转染293和NIH-3T3细胞,荧光显微镜下观察到融合表达的绿色荧光蛋白,且呈胞质表达;对照组转染pEGFP-C1,绿色荧光遍布整个细胞。Dazl蛋白的免疫荧光试验也证明重组载体转染后,Dazl基因和GFP共同定位于胞质部分。pEGFP-C1-Dazl融合蛋白表达载体的成功构建为进一步研究生殖特异性基因Dazl在小鼠和大型动物的表达特性奠定了一定的基础。
- 王龙周莹胡玥于萌白耀富华进联
- 关键词：小鼠生殖细胞绿色荧光蛋白
- 哺乳动物精子发生中减数分裂的起始被引量：1
- 2013年
- 生殖细胞的发生、增殖和分化是生命科学领域研究的重要课题之一.生殖是所有动物赖以生存的基础,精子发生是完成繁殖所必须经历的过程,其最终目的是源源不断地产生单倍体精子.精子发生过程本身是一个复杂特殊的细胞增殖与分化过程,其中减数分裂是精子发生最重要的步骤,但关于减数分裂如何精确起始的分子机制仍知之甚少.已有报道发现,维甲酸(RA)调控Stra8可能是哺乳动物减数分裂起始的机制之一,Nanos2、Boule对RA-Stra8通路具有重要的调控作用.本文对哺乳动物精子发生中减数分裂起始的相关研究进展进行综述.
- 李明昭刘维帅华进联
- 关键词：减数分裂精子发生维甲酸
- SIRT1超表达促进奶山羊精原干细胞的增殖
- 引言/目的SIRT1主要位于细胞核内,也可在细胞核和细胞浆之间穿梭,并且与细胞核和细胞浆中的蛋白相互作用,研究发现SIRT1能够调节多种干细胞的自我更新和多能性。在精原干细胞(SSC)中,Oct4和Plzf是非常重要的细...
- 吴江牛博文穆海龙李波吴崇阳康恺华进联
- 双筛选标记打靶载体的构建及其功能鉴定被引量：4
- 2010年
- 利用DNA同源重组方法(基因打靶)对动物基因组进行修饰是转基因研究的重要手段之一。为了构建一个高效的通用型基因打靶载体,本研究以pBS246质粒为骨架,在两个LoxP序列之间插入正筛选标记新霉素磷酸转移酶(neo)基因和绿色荧光蛋白(EGFP)基因;在两个LoxP序列外侧分别插入两组携带"8碱基"酶切位点的多克隆位点序列(MCS-1和MCS-2)和负筛选标记单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)基因,构建成通用型基因打靶载体pGT-V1,并且在C2C12细胞中验证了载体中各个元件的功能。该载体具有如下特点:1)在载体中引入绿色荧光标记,可以实时监控载体的转染效率,而转染效率的提高为高效基因打靶提供了保证;2)在两个LoxP位点间插入绿色荧光标记,可以直观监测打靶后遗留的筛选标记的去除情况,并且可以通过流式细胞仪或免疫磁珠法,将最终去除了筛选标记的阳性细胞(即丢失绿色荧光的细胞)分选出来,降低筛选标记在中靶细胞中可能产生的负面影响;3)采用"8碱基"酶切位点的MCS序列,便于DNA大片段的连接和重组,极大提高了该载体的通用性。总之,该载体优化了基因打靶的技术手段,为有效开展基因打靶和转基因动物研究提供了新平台。
- 李军华韩翠芹邓捷王华岩
- 关键词：同源重组打靶载体CRE-LOXP
- 成年昆明小鼠雄性生殖干细胞的分离培养及其多能性研究被引量：4
- 2010年
- 【目的】从成年昆明小鼠睾丸组织中分离具有多能性的雄性生殖干细胞(Male germline stem cells,mGSCs)。【方法】采用机械法和2步酶消化法分离出成年昆明小鼠的精原细胞,经差速贴壁后,培养在小鼠胎儿成纤维细胞(MEF)饲养层上,2周后得到类胚胎干细胞(ESCs)样mGSCs。对得到的mGSCs进行碱性磷酸酶(AP)染色、免疫荧光染色、RT-PCR、体内分化等检测。【结果】mGSCs具有类似ESCs的形态和多能性,AP染色呈阳性,免疫荧光Oct4、Vasa染色呈阳性,RT-PCR检测其表达Oct4、Nanog、Sox2等多能性基因和Vasa、C-kit等生殖细胞的标记基因,在免疫缺陷鼠体内能形成畸胎瘤,组织学检测其可形成包括3个胚层在内的多种类型细胞。【结论】从成年昆明小鼠睾丸分离的精原细胞,在体外培养去分化形成了具有类ESCs生物学特性的mGSCs,mGSCs既具有多能性,也具有生殖细胞的基本生物学特性。
- 潘少辉胡玥张姗姗王静李飞飞高志敏杨春荣华进联
- 关键词：精原细胞多能性
