河南农业大学牧医工程学院农业部动物生化与营养重点实验室
- 作品数：22 被引量：74H指数：6
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- 鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白可溶性原核表达及免疫原性分析被引量：7
- 2017年
- 为在大肠杆菌中表达出高可溶性的VP2-LS3蛋白笼纳米颗粒并检测其免疫原性,将扩增的7种融合标签(GST、NusA、MBP、PpiB、γ-crystallin、ArsC和Grifin)片段连在VP2-LS3基因的N端,构建7个带有不同标签的重组原核表达载体。再将其分别转化至大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE电泳分析,筛选出显著促进VP2-LS3蛋白可溶性表达的融合标签,并进行大量诱导表达、纯化。纯化得到的VP2-LS3重组蛋白分别进行TEV酶酶切、电镜观察分析及免疫家兔,并对获得的兔抗VP2血清进行Western blot和间接ELISA分析。结果显示,与其他6个标签相比,MBP标签促进VP2-LS3蛋白的可溶性表达具有显著性,可溶性表达水平达到69.5%;TEV酶可以把His6-MBP标签蛋白与VP2-LS3蛋白分开,获得高纯度的VP2-LS3蛋白;镜检显示形成了LS3蛋白笼纳米颗粒;Western blot结果表明,表达的VP2-LS3重组蛋白可与兔抗血清发生特异性反应,而不与阴性对照血清发生反应;间接ELISA检测制备的兔抗VP2血清效价达到1∶12 800。本研究获得了高可溶性的VP2-LS3蛋白笼纳米颗粒,为传染性法氏囊病病毒(IBDV)基因工程疫苗的研发奠定基础。
- 李赛赛郭玉堃舒静超曾磊郭婉莹郭豫杰
- 关键词：传染性法氏囊病病毒VP2蛋白融合标签可溶性表达免疫原性
- 不同饲养模式对奶牛血液生化指标及激素含量的影响被引量：2
- 2014年
- 本试验旨在研究不同饲养模式对奶牛血清生化指标及激素含量的影响。分别选择粗放饲养(EP)、集约化饲养(CP)和不完全集约化饲养(IP)模式下体重、胎次、泌乳日龄相近的健康奶牛各30头,采集血样,检测血液中各项生化指标及代谢相关激素,分析其与奶牛不同饲养模式的关系。结果表明,CP型、IP型奶牛血液中血糖(GLU)、白蛋白(ALB)、非酯化脂肪酸(NEFA)、β-羟丁酸(BHB)、谷丙转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、脂多糖(LPS)和组胺(HIS)含量与EP型相比有升高的趋势,而血液中免疫球蛋白(IgG、IgA)、多胺(TA)含量则显著低于EP型(P<0.05);CP型、IP型奶牛血液中胰岛素(INS)、胰岛素/胰高血糖素(INS/GC)、甲状腺素(T3)、生长激素(GH)含量与EP型相比有升高趋势,而血液中胰高血糖素(GC)含量则低于EP型。综上所述,不同饲养模式对奶牛血液生化指标及相关激素分泌有不同程度的影响,其中以CP型饲养模式较好,且CP型>IP型>EP型。
- 王林枫杨树杨改青严平邹军苗庭王月影朱河水杨国宇李明
- 关键词：饲养模式生化指标激素奶牛
- 中原经济区奶牛适宜发展模式的调查分析
- 2013年
- 为深入了解中原经济区的规模化奶牛场特点,采取有针对性的奶业发展措施,通过对中原经济区内河南、河北、山东、山西、安徽等地各种类型规模化奶牛场的调查,在了解规模化奶牛场发展现状的基础上,对奶牛场的饲料供给、粪污处理、适宜规模、经营模式等方面进行了详细分析,提出了规模化奶牛场适宜的发展规模和经营模式,供有关部门制定奶业政策时参考。
- 王林枫杨改青陈宇谭伟杰蒋潇涵申远航宋丰刘占秦
- 关键词：中原经济区规模化奶牛场养殖规模
- 弗莱维赫牛改良本地西门塔尔杂交牛的效果分析
- [目的]为研究弗莱维赫牛在中原农区改良本地西门塔尔杂交牛(local simmental crossbred cattle简称LSC)的杂交效果,为养牛业生产提供科学理论依据。[方法]本研究选择500头商丘本地西杂牛为母...
- 王林枫严平杨改青李明王鹏翔
- 关键词：乳肉兼用牛杂交改良
- 文献传递
- 奶牛乳腺上皮细胞中SCAP和SREBP1蛋白调控SCD基因表达的作用研究被引量：5
- 2018年
- 旨在研究奶牛乳腺上皮细胞中固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白(SCAP)对固醇调节元件结合蛋白(SREBP1)调控的硬脂酰辅酶A去饱和酶基因(SCD)表达的影响。培养奶牛乳腺上皮细胞,在细胞中转染奶牛SCD基因启动子载体,同时转染SREBP1和SCAP真核表达载体作为处理,采用双荧光素酶报告基因系统检测转染SREBP1和SCAP对SCD基因启动子活性的影响;采用免疫荧光技术观察SREBP1在细胞核的表达,采用荧光定量PCR检测SCD基因mRNA的表达。结果表明,与转染pcDNA3.1载体的对照组相比,转染SCAP对SCD启动子活性无显著影响;转染SREBP1和共转染SCAP/SREBP1极显著增加SCD基因启动子活性值(P<0.01),并且SCAP的转染剂量与SCD的启动子活性值之间具有极显著的量效关系(P<0.01);在乳腺上皮细胞中转染SCAP后,能够增强SREBP1在细胞核的表达;细胞转染SREBP1和共转染SCAP/SREBP1后,SCD基因mRNA的表达分别显著上调1.23倍和1.54倍(P<0.05)。本研究表明,奶牛SCAP可以增加SREBP1蛋白在细胞核中的表达,促进对SCD基因的转录激活作用。
- 韩立强孙宇付彤廉红霞高腾云
- 关键词：奶牛乳腺上皮细胞固醇调节元件结合蛋白
- 奶牛SREBP1蛋白在乳腺上皮细胞的表达定位及对SCD1基因启动子的转录调控被引量：3
- 2016年
- 【目的】固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)作为核转录因子,对于细胞脂肪合成酶基因的表达发挥着重要的调控作用。论文旨在奶牛乳腺上皮细胞中研究SREBP1对于SCD1基因启动子的转录调控作用,为进一步明确SREBP1对于靶基因的转录调控机制提供理论基础。【方法】以荷斯坦奶牛乳腺组织的c DNA为模板,采用分段克隆的方法获得SREBP1基因的编码序列,通过重组酶与pc DNA3.1载体进行重组环化构建pc DNA3.1-SREBP1表达载体,将构建的载体测序验证后提取质粒,转染奶牛乳腺上皮细胞。以EIF3K基因为内参基因,采用荧光定量PCR检测SREBP1基因m RNA的表达差异;采用免疫荧光的方法对SREBP1进行标记,以DAPI复染细胞核,激光共聚焦观察SREBP1蛋白的亚细胞定位;转染含有不同调控元件的SCD基因启动子,同时转染1.0μg pc DNA3.1-SREBP1作为处理,荧光素酶报告基因系统分析启动子活性;分别转染0.25、0.5和1μg的pc DNA3.1-SREBP1载体,分析p GL3-SCD 2和p GL3-SCD3启动子活性与SREBP1之间的量效关系。【结果】分段克隆得到的PCR产物分别为1 170、1 116、363和900 bp的片段,经过与pc DNA3.1载体重组后获得pc DNA3.1-SREBP1表达载体,经酶切和测序验证,发现除1个无义突变外,与标准序列完全相同,整个序列长度达到3 510bp;将pc DNA3.1-SREBP1载体转染乳腺上皮细胞后,Real-time PCR检测发现与转染空载体的对照组相比,SREBP1基因的m RNA表达倍数增强130.4倍(P<0.001);激光共聚焦观察发现,DAPI染色的细胞核呈蓝色,免疫荧光标记的SREBP1呈绿色,二者融合后呈现青色,共定位在乳腺上皮细胞核中;启动子活性检测发现,与p GL3-SCD1、p GL3SCD 2相比,SREBP1处理能够极显著增加p GL3-SCD3、p GL3-CD4启动子的活性(P<0.001),分别比对照组提高了1.0倍和0.7倍,进一步分析发现,在用0.25—1μg的pc DNA3.1-SREBP1处理后,与p GL3-SCD2的启动子活性持续下降相比,p GL3-SCD3的启动子活�
- 韩立强王月影王林枫朱河水钟凯褚贝贝杨国宇
- 关键词：奶牛乳腺上皮细胞转录调控
- 脂多糖对奶山羊肝脏代谢组学的影响被引量：4
- 2015年
- 【目的】探寻脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)影响奶山羊肝脏营养代谢的特征代谢物(生物标记物),阐明LPS引起肝脏代谢障碍的机制。【方法】选择12—18月龄,体重24—28 kg的关中奶山羊15只,平均分为3组(每组5只),分别为对照组(CTL)、低剂量LPS处理组(LPS-L)和高剂量LPS处理组(LPS-H)。LPS-L和LPS-H分别腹腔注射20、40μg·kg-1 BW的LPS溶液,CTL注射等容量生理盐水。24 h后,LPS-L和LPS-H追加LPS溶液。48 h后,静脉采血,分离血浆和血清,检测血液相关生化指标;然后活体采集肝脏组织,液氮保存。肝脏组织冻干后,用氢核磁共振(1H-nuclear magnetic resonance,1H-NMR)技术检测肝脏组织代谢物,运用数据库对检测到的代谢物变量进行化合物种类鉴别,再用模式识别方法中的偏最小判别二乘分析法(partia1 1east squares discriminant analysis,PLS-DA)筛选生物标记物。【结果】血清生化指标表明,LPS-L和LPS-H处理的谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(TBIL)水平较CTL显著升高(P<0.05);甘油三酯(TG)、非酯化脂肪酸(NEFA)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、白蛋白(ALB)和总蛋白(TP)的含量较CTL显著降低(P<0.05)。用1H-NMR技术共检测到69种代谢物变量,包括氨基酸,醇类,糖类及其它代谢产物。PLS-DA分析发现,代谢物变量可将CTL、LPS-L与LPS-H组之间聚类区分,并找到9种组间差异显著的代谢物,这些代谢物主要与氨基酸、脂肪和碳水化合物等代谢途径相关,可作为肝脏在LPS诱导损伤状态下的标志物。【结论】LPS可显著影响奶山羊肝脏营养代谢,1H-NMR代谢组学可以较为全面地检测到肝脏组织的代谢物,准确地筛选出差异代谢物,通过分析差异代谢物的代谢途径,阐明LPS引起肝脏代谢障碍的机理。
- 王林枫贾少丹杨改青朱河水柳如意严平李明杨国宇
- 关键词：代谢组学脂多糖肝脏代谢物奶山羊
- 基于Spyligase技术的禽流感血凝素H5HA10多聚体抗原的高效制备
- 2019年
- 利用Spyligase技术在H5HA10序列的C端和N端分别加上SpyTag和KTag序列,并分别与His6-ArsC、His6-PAS200、His6-XTEN、His6-PEAT、SiTag3-SUMO、SiTag3-MBP、SiTag3-PAS200、SiTag3-XTEN和SiTag3-ArsC促溶标签相连,成功构建了含9种不同促溶性标签的H5HA10重组表达载体,同时构建了1种含有Cherry标签的Spyligase重组表达载体。将这10种重组载体分别转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达和SDS-PAGE分析,筛选出可以显著促进H5HA10重组蛋白表达的融合标签ArsC。通过优化诱导表达条件,在大量诱导表达、纯化后成功获得了高纯度的H5HA10和Spyligase重组蛋白,最终在PCT缓冲体系中, Spyligase促使H5HA10重组蛋白的蛋白聚合,形成了环化单体、三聚体、六聚体以及九聚体。
- 贾宾陈慧心韩莹倩郭玉堃邵科宇郭豫杰
- 关键词：原核表达融合标签多聚体
- 德系西门塔尔牛对本地西门塔尔杂交牛的改良效果被引量：11
- 2014年
- 为研究德系西门塔尔牛在中原农区改良本地西门塔尔杂交牛的杂交效果,为养牛业生产提供科学理论依据。本研究选择500头商丘本地西杂牛为母本,以德系西门塔尔牛(Fleckvieh)为父本,采用人工授精的方法进行杂交改良。测定杂交一代(F1)和二代(F2)各阶段的生长性能、屠宰性能、产奶性能、乳成分等各项指标。结果表明,杂交后代初生时的各项生长性能指标与西杂牛无明显差异,随着年龄的增长,杂交后代的体尺、体重在一定程度上超过西杂牛;F1和F2代公牛的胴体重、屠宰率、净肉率均不同程度高于LSC牛,牛肉的品级提高;产奶量显著增加(P<0.05),乳品质较高。说明以德系西门塔尔牛为父本改良本地西杂牛不仅可以提高杂交后代的生长性能、屠宰性能,还可以显著改善其泌乳性能,使杂交后代由单一的肉用型转变为乳肉兼用型,提高肉牛养殖的经济效益。
- 王林枫严平杨改青朱河水王鹏翔邹军柳如意杨艳婷杨国宇李明
- 关键词：乳肉兼用牛杂交改良胴体品质牛奶质量
- 沉默SCAP基因对奶牛乳腺上皮细胞脂滴的影响被引量：2
- 2019年
- 旨在探究沉默固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白(SREBP cleavage-activating protein,SCAP)对奶牛乳腺上皮细胞脂滴的影响,本研究构建了SCAP短发夹RNA慢病毒载体,包装感染奶牛乳腺上皮细胞,通过在培养基中添加嘌呤霉素筛选获得SCAP基因沉默稳转细胞株,采用Real-time PCR和Western blot观察基因沉默细胞株中SCAP基因和蛋白的表达,尼罗河红和油红O染色脂滴检测SCAP基因沉默及SCAP质粒瞬时转染对细胞脂滴形成的影响。结果表明,本研究成功构建了奶牛SCAP基因沉默慢病毒重组载体,感染细胞后经过5 mg·L^(-1)嘌呤霉素筛选得到SCAP基因沉默稳转细胞株。基因检测发现,各个沉默细胞株的SCAP基因表达显著降低(P<0.05或P<0.01)。与对照组相比,RNAi-SCAP3细胞中的SCAP蛋白表达降低为对照组的0.49倍(P<0.05),脂代谢基因SCD和FAS表达也显著下降(P<0.05)。脂滴染色发现,RNAi-SCAP3沉默细胞株的脂滴含量显著低于对照组细胞(P<0.01),脂滴直径≤2.0μm的小脂滴个数增多,而直径≥2.5μm的大脂滴个数减少;将SCAP真核表达载体瞬时转染RNAi-SCAP3细胞株后发现,SCAP基因的过表达显著减少了细胞中小脂滴比例而增加了大脂滴比例(P<0.05)。本研究成功构建了SCAP基因沉默稳转细胞株,发现SCAP的表达影响了细胞脂滴直径的大小。
- 邢智洋张梦璐张菡王月影韩立强高腾云杨国宇
- 关键词：奶牛奶牛乳腺上皮细胞基因沉默脂滴
