云南农业大学动物科学技术学院云南省版纳微型猪近交系重点实验室
- 作品数：5 被引量：7H指数：2
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- 猪孤雌激活早期胚胎线粒体分布及mtDNA拷贝数变化的研究被引量：2
- 2012年
- 本研究通过线粒体分子探针标记技术检测孤雌激活早期胚胎线粒体的分布变化,运用实时荧光定量PCR技术检测mtDNA拷贝数的变化,揭示早期胚胎发育过程中线粒体分布、mtDNA拷贝数变化趋势。结果表明,成熟卵母细胞电激活后,由2-细胞胚胎开始,卵裂球内线粒体分布均匀且密集,每个细胞均有分布,卵裂球之外的空隙未见线粒体分布,直到囊胚形成,线粒体均有分布。孤雌激活4-细胞胚胎mtDNA拷贝数显著高于8-细胞胚胎mtDNA拷贝数(907210.77±145520.77,186224.33±103308.00,P<0.05),但显著低于2-细胞胚胎、桑椹胚、囊胚的mtDNA拷贝数(1563422.54±224666.51、1697626.25±176999.53和1752301.29±101146.64,P<0.05)。孤雌激活扩张囊胚mtDNA拷贝数最高,为2812545.67±156819.31,显著高于其他发育时期胚胎的mtDNA拷贝数(P<0.05)。由此可见,孤雌激活早期胚胎发育进程中线粒体分布及mtDNA拷贝数会发生变化。
- 成文敏魏红江潘伟荣信吉阁黄言曾养志
- 关键词：猪卵母细胞孤雌激活
- 版纳微型猪近交系生长激素基因克隆及原核表达研究被引量：1
- 2012年
- 本研究旨在获得版纳微型猪近交系(BMI)生长激素基因编码区序列,揭示其原核表达规律。采用RT-PCR方法从版纳微型猪近交系(BMI)脑垂体中克隆生长激素(GH)基因,并将其连接到pMD 18-T载体进行测序和生物信息学分析。克隆得到的GH基因cDNA序列长690bp,其中CDS长651bp,编码216个氨基酸,前26个氨基酸为信号肽序列。多猪种GH氨基酸序列比对表明其在各猪种中高度保守,版纳微型猪近交系的GH氨基酸序列与五指山猪和宁香猪的相似性均为100%,与藏猪、香猪、大乌猪、太湖猪、成华猪、内江猪、荣昌猪、长白猪、约克夏的相似性均为99%,与雅南猪、杜洛克的相似性均为98%。扩增GH成熟肽区编码序列,定向克隆至表达载体pET-32a(+),转化入大肠杆菌Rosseta(DE3)感受态细胞中,用IPTG诱导表达蛋白。SDS-PAGE和Westernblotting分析表明,重组质粒在大肠杆菌中获得了高效表达,融合蛋白以包涵体形式存在,分子质量约为40.6ku。以上结果为进一步探究GH基因对BMI矮小性状的影响奠定了基础。
- 王淑燕霍金龙王配潘伟荣曾养志
- 关键词：生长激素原核表达
- 猪卵母细胞Npm基因及其编码核质蛋白表达研究
- 2013年
- 核质蛋白是广泛存在于卵母细胞中的由Npm基因编码的一种酸性、磷酸化的蛋白质,为分子伴侣家族的一员。本研究通过RT-PCR检测成熟不同时期卵母细胞Npm mRNA基因表达,同时采用免疫组化以及Western blot检测成熟不同时期卵母细胞核质蛋白定性和定量表达。结果:成熟不同时期卵母细胞中均可检测到Npm基因mRNA表达。采用免疫组化的方法在体外成熟0 h和11 h卵母细胞中可检测到核质蛋白表达,但成熟22 h、33 h、44 h的卵母细胞检测不到核质蛋白表达;采用Western blot技术在体外成熟0 h和11 h卵母细胞中检测不到核质蛋白,成熟22 h、33 h、44 h卵母细胞可检测到核质蛋白。结果说明随着卵母细胞体外成熟进程的推进,Npm基因及其编码的核质蛋白表达量不断增加,可为受精后精子核解聚或体细胞核重编程做准备。
- 成文敏潘伟荣卿玉波魏红江曾养志
- 关键词：NPM卵母细胞
- 版纳微型猪近交系不育和可育公猪CRISP2基因全长编码区序列克隆及睾丸差异表达分析被引量：3
- 2015年
- CRISP2作为弱精子症发生的重要候选基因,为深入研究CRISP2与精子活力的关系及其在体内的调节与功能提供基础资料,本研究以版纳微型猪近交系(BMI)不育和可育公猪为试验动物,通过RT-PCR方法扩增得到CRISP2基因全长编码区序列,不育和可育公猪序列无差异,提交Gen Bank数据库,获得登录号为"KP780059"。生物信息学分析显示,该基因编码244个氨基酸,蛋白分子量为27.05 ku,等电点为6.76。蛋白质结构分析得出,CRISP2存在2个保守域,无跨膜结构,存在信号肽及1个亮氨酸富集的核输出信号,N端、C端均疏水;亚细胞定位显示该蛋白分泌到细胞周质的概率为94.1%。系统进化分析表明,猪与牛、绵羊的亲缘关系较近。同时,利用荧光定量PCR法确定了CRISP2 mRNA在BMI不育及可育公猪14个组织中的表达量,发现其在睾丸中特异表达,CRISP2基因在不育公猪睾丸中的表达量明显低于可育公猪,两组之间的表达量有显著的统计学差异(P<0.05),表明CRISP2表达的减少可能导致精子活力下降。本研究为进一步研究猪CRISP2基因在精子发生方面的作用奠定研究基础。
- 陈园园潘伟荣霍金龙王淑燕王配查星琴曾养志
- 关键词：精子发生
- 版纳微型猪近交系B4GALNT2基因真核表达载体构建及亚细胞定位分析被引量：1
- 2019年
- 【目的】研究异种器官移植免疫排斥相关基因B4GALNT2的亚细胞定位情况。【方法】以版纳微型猪近交系(BMI)为试验对象,通过RT-PCR方法获得B4GALNT2基因cDNA序列,运用分子克隆技术构建B4GALNT2和报告基因EGFP的重组真核表达载体pEGFP-C1-B4GALNT2,将其转染猪肾上皮细胞PK15进行瞬时表达,同时用Mito Tracker和Hoechst33342荧光染料分别对线粒体和细胞核染色,通过EGFP示踪检测B4GALNT2在PK15细胞中的表达和定位。【结果】成功构建了BMI B4GALNT2基因的绿色荧光蛋白融合表达载体pEGFP-C1-B4GALNT2,转染PK15细胞后主要在细胞质中检测到绿色荧光蛋白的表达,试验结果与PSORTⅡserver网站的预测一致。【结论】B4GALNT2蛋白主要定位于细胞质,揭示该蛋白主要在细胞质中发挥其功能作用。
- 王淑燕宋雪王配霍海龙张霞张永云李罗刚王雪飞霍金龙
- 关键词：真核表达亚细胞定位
