南通大学医学院传染病学教研室
- 作品数：10 被引量：33H指数：4
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- HBsAg负载的慢性乙肝患者DCs诱导特异性Th1细胞分化的作用
- 2008年
- 目的:研究HBsAg负载的慢性乙肝患者外周血树突状细胞(dendritic cells,DCs)对自身Th1细胞分化的诱导作用.方法:Ficoll密度梯度离心和贴壁法分离慢性乙肝患者外周血单核细胞,以含rhIL-4+rhGM-CSF的完全培养基诱导DCs.流式细胞术检测各组DC表面CD80,CD86,CD40和HLA-DR分子的表达,CCK-8法检测各组DCs刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力,ELISA法检测各组DCs培养液上清中IL-12的水平.免疫磁珠分选慢性乙肝患者外周血CD4+T细胞,分别与患者自身的DCs共培养,细胞内细胞因子染色,流式细胞仪检测共培养后CD4+T细胞内特征性细胞因子IFN-γ和IL-4,ELISA法检测共培养上清中IFN-γ/IL-4的水平.结果:与对照组相比,HBsAg、IFN-γ和HBsAg+IFN-γ组DCs表面表达CD80,CD86,CD40和HLA-DR分子水平较高;刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力较强;DCs分泌的上清液中,IL-12水平也较高.与对照组相比,HBsAg、IFN-γ和HBsAg+IFN-γ组DCs与自身Th细胞共培养后,Th1细胞占CD4+T细胞的百分比升高(10.76%±3.98%,11.43%±4.32%,15.28%±4.73%vs7.84%±3.10%,P<0.01),Th2细胞占CD4+T细胞的百分比降低(1.43%±0.96%,1.68%±0.16%,0.92%±0.21%vs2.61%±1.27%,P<0.01),共培养上清中IFN-γ的水平增高(578±47mg/L,496±92mg/L,784±97mg/Lvs342±34mg/L,P<0.05),IL-4的水平降低(187±52mg/L,169±38mg/L,89±37mg/Lvs226±48mg/L,P<0.05),以HBsAg+IFN-γ组最为明显.结论:经HBsAg负载的DCs可以改善患者体内因DCs功能低下而引起的Th1细胞分化不足的状态.
- 吴琼汪晓莺周晓荣汤伟苏丽
- 关键词：TH1/TH2流式细胞术酶联免疫吸附试验
- 季德胜蛇药对小鼠四氯化碳慢性肝损伤的保护作用被引量：6
- 2009年
- 目的:观察季德胜蛇药对四氯化碳(CCl4)所致小鼠慢性肝损伤的保护作用。方法:48只小鼠随机分为4组:正常对照组、模型组、蛇药1组、蛇药2组。除正常组外余3组小鼠均经皮下注射40%CCl45ml/kg,蛇药治疗组自造模日起分别给予相应剂量的蛇药干预。实验5周后,以全自动生化分析仪检测实验小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基酸转移酶(AST)水平,光镜下观察各组小鼠肝脏病理改变。结果:与模型组比较,蛇药组能明显降低CCl4慢性肝损伤小鼠血清中ALT、AST水平(P<0.01)。模型组小鼠肝组织大量炎性细胞浸润,肝细胞水样变性及坏死,有类假小叶形成,蛇药组的肝脏病变程度均较模型组明显减轻且无类假小叶形成。结论:季德胜蛇药对CCl4所致小鼠慢性肝损伤具有一定的保护作用。
- 李慧汤伟汪晓莺王建民李阳
- 关键词：季德胜蛇药四氯化碳慢性肝损伤
- 季德胜蛇药对小鼠免疫调节作用的初步研究被引量：4
- 2009年
- 目的:研究季德胜蛇药对小鼠免疫功能的调节作用。方法:将BALB-c小鼠48只随机分为4组,分别为正常对照组、环磷酰胺模型组、蛇药1组、蛇药2组。各组均以灌胃给药,2次/天,连续21天,正常对照组和造模组给予同体积的生理盐水,其余实验组分别给予相应剂量的药物治疗。给药第15天起,除正常对照组外各组小鼠均用环磷酰胺30mg/kg皮下注射,连续7天制备免疫功能低下模型。末次用药1小时后,所有动物均摘眼球取血,分离血清;记录小鼠体重,脱颈椎处死后,无菌取脾、胸腺并称湿重,计算脾脏和胸腺指数;以ConA诱导脾淋巴细胞增殖,用MTT法检测并计算淋巴细胞增殖刺激指数(SI)。结果:季德胜蛇药治疗组小鼠的体重下降程度低于模型组,胸腺及脾脏指数高于模型组;治疗组SI明显高于模型组。结论:季德胜蛇药可提高免疫抑制小鼠的细胞免疫功能。
- 李阳汤伟李慧汪晓莺
- 关键词：季德胜蛇药小鼠免疫功能环磷酰胺乙型病毒性肝炎
- 慢性乙型肝炎患者树突状细胞与CD_4^+Th细胞分化的关系(英文)被引量：3
- 2009年
- 目的探讨慢性乙型肝炎患者树突状细胞(dendriticcells,DCs)与CD4+Th细胞亚群分化的关系。方法分离慢性乙型肝炎患者外周血单核细胞,以rhIL-4(50ng/mL)、rhGM-CSF(10ng/mL)和rhTNF-α(100μ/mL)诱导培养DC。以流式细胞仪检测DCs表面CD1a、CD83、CD80、CD和HLA-DR分子的表达情况。免疫磁珠分离外周血CD4+T细胞亚群,PMA+Ionomycin刺激后胞内荧光染色,流式细胞仪检测Th细胞内特征性细胞因子IFN-γ/IL-4以判断Th1/Th2分化。ELISA法检测DCs或Th细胞培养上清中IL-6、IL-12、IFN-γ和IL-4的含量。结果慢性乙型肝炎患者的DCs表达CD1a、CD83、CD80、CD86和HLA-DR分子的水平明显低于正常人;培养至第7天,慢性乙型肝炎患者DCs分泌的IL-12水平低于正常人,而分泌的IL-6水平高于正常人。与正常人相比,慢性乙型肝炎患者外周血中Th1细胞占CD4+T细胞的百分比较低,Th细胞培养上清中IFN-γ的量也较低。患者DCs与同种异体的健康人Th细胞共培养,刺激Th1型细胞因子IFN-γ产生的能力低于正常人。结论慢性乙肝患者体内DCs功能的异常可能导致了外周血Th1分化不足。
- 苏丽周晓荣汪晓莺汤伟
- 关键词：TH细胞树突状细胞慢性乙型肝炎
- 抗纤胶囊对实验性大鼠肝纤维化的治疗作用被引量：8
- 2012年
- 目的:探讨抗纤胶囊对四氯化碳(CCL4)诱导的实验性大鼠肝纤维化的治疗作用。方法:40只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、秋水仙碱组、抗纤胶囊高、低剂量组。除正常对照组外,各组大鼠均采用CCl4和高脂饲料复合诱导制备大鼠肝纤维化模型,同时治疗组分别每天ig抗纤胶囊(0.637 5,0.425 g.kg-1)和秋水仙碱(1.562 5×10-4g.kg-1),干预6周,对照组和模型组动物每天ig生理盐水。采用全自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性,放射免疫法检测血清透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)的含量,光镜下观察肝组织病理改变。结果:模型组大鼠肝组织内肝细胞广泛变性及坏死,大量炎性细胞浸润,类假小叶形成,大量胶原纤维形成;抗纤胶囊治疗组的肝脏病理变化程度较模型组明显减轻且无类假小叶形成。抗纤胶囊(0.637 5,0.425 g.kg-1)组的ALT和AST活性为(70.88±20.66),(86.25±22.05)U.L-1,(131.50±31.52),(151.25±38.66)U.L-1;抗纤胶囊(0.637 5,0.425 g.kg-1)组的HA,LN,PCⅢ的含量为(340.93±64.75),(363.88±80.44)ng.L-1,(261.59±56.93),(311.84±61.60)ng.L-1,(61.67±14.51),(76.47±19.68)μg.L-1,与模型组比较,抗纤胶囊治疗组大鼠的血清ALT,AST,HA,LN,PCⅢ水平显著降低(P<0.01)。结论:抗纤胶囊对CCL4诱导的大鼠具有较好的抗肝纤维化作用。
- 邵志祥汤伟
- 关键词：抗纤胶囊肝纤维化
- 季德胜蛇药对大鼠急性肝损伤的保护作用及机制的初步研究被引量：4
- 2009年
- 目的:探讨季德胜蛇药对大鼠急性肝损伤的保护作用及其机制。方法:SD大鼠48只,随机分为正常对照组、模型组、高剂量蛇药治疗组和低剂量蛇药治疗组。采用α-萘异硫氰酸酯(Alpha-naphthylisothiocyanate,ANIT)制备大鼠急性肝损伤模型,观察季德胜蛇药对肝损伤大鼠的血清丙氨酸转氨酶(ALT)、门冬氨酸转氨酶(AST)、总胆红素(TBil)及丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷光甘肽(GSH)、一氧化氮(NO)水平的影响,并对肝脏组织进行病理学观察。结果:与模型组比较,低剂量蛇药治疗组大鼠的血清ALT水平明显下降而血清GSH显著升高(P<0.05);蛇药治疗组大鼠的肝组织病理改变较模型组减轻,尤以低剂量组明显。结论:季德胜蛇药对ANIT所致大鼠急性肝损伤有一定的保护作用,其机制之一可能与提高机体抗氧化能力有关。
- 丁丽娟汤伟汪晓莺王建民
- 关键词：季德胜蛇药急性肝损伤Α-萘异硫氰酸酯中成药
- 季德胜蛇药抗乙型肝炎病毒的体外实验研究被引量：4
- 2010年
- 目的:探讨季德胜蛇药的体外抗乙型肝病毒作用。方法:采用灌服给药方法制备季德胜蛇药的含药兔血清。体外培养HepG2.2.15细胞,培养液中加入不同浓度的兔含药血清。于细胞培养至第4d和第7d,应用微粒子酶免疫分析法测定细胞培养上清中HBsAg、HBeAg的分泌量和采用实时荧光定量PCR方法测定细胞培养上清液中的HBV DNA拷贝数。结果:培养4d,含药血清添加浓度为5%～12.5%各组细胞上清的HBsAg和HBeAg含量均明显低于正常血清组(P<0.05),12.5%组含药血清对HepG2.2.15细胞分泌HBsAg和HBeAg的抑制率最高(48.64%和27.44%)、药物抑制率分别为24.50%和27.44%;培养7d,含药血清添加浓度12.5%组细胞上清的HBsAg和HBeAg含量明显低于正常血清组(P<0.05),含药血清的抑制率分别为62.30%和69.16%、药物抑制率分别为20.68%和42.24%。以12.5%浓度含药血清培养4d时,对HBV DNA合成的抑制率最高,为10.53%。结论:季德胜蛇药有一定的抗HBV作用。
- 孙晓雷丁丽娟汤伟汪晓莺
- 关键词：季德胜蛇药HEPG2.2.15细胞株HBVDNA
- 银杏内酯和神经生长因子对体外培养人胚肝细胞功能的影响
- 2007年
- 目的:探讨银杏内酯和神经生长因子(NGF)对体外培养人胚肝细胞功能的影响。方法:用改良的非灌流法分离人胚肝细胞,用DMEM培养基培养,分为银杏内酯组、NGF组和对照组。培养至第9d时进行糖原PAS染色,计数糖原染色阳性细胞,图象分析染色灰度;检测培养液中白蛋白和尿素的含量。STATA7.0统计软件进行方差分析和两两比较。结果:糖原染色阳性细胞银杏内酯组74.63±12.76、NGF组83.25±11.18、对照组38.25±9.44;染色灰度银杏内酯组123.19±18.96、NGF组107.25±17.09、对照组164.91±21.65;白蛋白含量(g/L)银杏内酯组3.213±0.422、NGF组3.450±0.481、对照组2.575±0.498;尿素含量(mmol/L)银杏内酯组1.813±0.290、NGF组2.013±0.344、对照组1.363±0.220。统计显示,上述数据银杏内酯组和NGF组之间的差异均无显著性意义(P>0.05),而他们与对照组之间的差异均有显著性意义(P<0.05或0.01)。结论:银杏内酯和NGF对体外培养的人胚肝细胞功能有促进作用。
- 徐芳芹田美玲胡丽新秦建兵金国华
- 关键词：银杏内酯神经生长因子肝细胞人胚
- 银杏内酯和神经生长因子影响原代人胚肝细胞的增殖及分泌
- 2007年
- 目的:如何培养足够的肝细胞以及应用一些物质、因子从而使其增加分裂、减少凋亡?观察银杏内酯和神经生长因子对体外原代培养的人胚肝细胞增殖、凋亡及相关分泌功能的影响具有临床实用性意义。方法:实验于2005-07/2006-10在南通大学神经生物学研究所完成。①细胞来源:孕14～16周流产胎儿,由南通市妇幼保健院妇产科提供,产妇及其家属均知情同意,实验经医学伦理委员会批准。银杏内酯由中国药科大学提供,神经生长因子为Roche公司产品。②实验方法:用非灌流法从人胚肝中分离肝细胞,以DMEM作为培养基,接种于4块24孔培养板中,每两块培养板各接种36孔,12孔/组,细胞3×105/孔。银杏内酯组各孔加入含37.5g/L银杏内酯和体积分数为0.1小牛血清的DMEM培养液2mL,神经生长因子组各孔加入含100mg/L神经生长因子和体积分数为0.1小牛血清的DMEM培养液2mL,空白对照组各孔加入仅含体积分数为0.1小牛血清的DMEM培养液2mL。③实验评估:人胚肝细胞原代培养至9d,倒置显微镜下计数每视野的肝细胞数,同时行MTT试验,并用流式细胞仪检测肝细胞凋亡情况。分别于培养3,6,9d时收集肝细胞培养液进行白蛋白含量检测。结果:①原代肝细胞生长情况及肝细胞计数:接种12h后各组肝细胞均已贴壁,3d后可见由3～5个细胞组成的细胞集落,至9d时银杏内酯组和神经生长因子组肝细胞已基本铺满孔底,且呈立体生长倾向,空白对照组肝细胞较少,胞间有空隙存在。至培养9d,银杏内酯组、神经生长因子组、空白对照组每视野内肝细胞计数差异有显著性意义(F=12.97,P=0.00)。②MTT试验结果:原代肝细胞培养至9d时,银杏内酯组、神经生长因子组、空白对照组吸光度值差异有显著性意义(F=71.90,P=0.00)。③肝细胞培养液白蛋白含量:培养3d时各组细胞培养液的白蛋白含量方差分析无明显差异(F=0.23,P=0.79)。培养
- 徐芳芹田美玲胡丽新秦建兵金国华
- 关键词：银杏内酯神经生长因子肝细胞细胞培养人胚
