伍时冠
- 作品数：17 被引量：47H指数：4
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- 发文基金：澳门特别行政区科学技术发展基金国家科技重大专项广州市科技支撑计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人副流感病毒的快速分离培养与鉴定被引量：11
- 2016年
- 目的副流感病毒是婴幼儿下呼吸道感染的重要病原体，为快速准确诊断副流感病毒感染，文中探讨一种从鼻拭子快速分离培养及鉴定副流感病毒的方法。方法采集0—5岁诊断为急性呼吸道感染的患儿鼻拭子标本，以3000r／min离心1h接种至96孔板预制LLC—MK2细胞以及按照传统培养法进行接种，最后补充含4ug/mLTPCK胰酶的病毒维持培养基。每天观察细胞病变，培养第2、5、8天分别作血吸附、血凝试验，试验阳性时作免疫荧光鉴定。结果从83份鼻拭子标本中分离鉴定6株副流感病毒，阳性率7．2％。离心培养法与传统培养法在标本培养2d后其分离率分别为7．2％和0，差异有统计学意义（P〈0．05）。阳性标本感染的细胞镜下可见局部变长、融合、破碎的细胞病变，血凝试验4℃凝集而室温不凝集，血吸附试验4℃阳性而室温阴性，免疫荧光可见细胞内特异性苹果绿荧光。结论快速分离培养方法可最快在2d内从鼻拭子标本中获得有毒力和生物活性的副流感病毒并进行鉴定。
- 秦笙伍时冠孟少伟郑贵星陈德晖李际强陈茶
- 关键词：副流感病毒病毒鉴定
- 白藜芦醇抗柯萨奇病毒作用机理研究被引量：2
- 2011年
- 在非洲绿猴肾细胞(Vero E6)上接种柯萨奇B2病毒,采用细胞病变抑制法(Cytopathic effect inhibition Assay)和四甲基偶氮唑蓝(MTT)法,在预防、治疗和直接作用3种试验模式下探讨白藜芦醇体外对柯萨奇病毒的抑制作用。白藜芦醇体外抗病毒药效显示:(1)预防模式对柯萨奇病毒无抑制作用;(2)治疗和直接作用模式对柯萨奇病毒均有一定程度的抑制作用,且治疗模式(抑制率为71.5%)效果优于直接作用(抑制率为41.5%)。说明白藜芦醇对柯萨奇病毒具有体外抑制作用,其可能通过多个途径抑制病毒在宿主细胞内的复制。
- 叶劲松关文达招穗珊杨子峰王玉涛秦笙伍时冠潘思华占扬清谢慧珺
- 关键词：白藜芦醇柯萨奇病毒
- 金刚烷胺与利巴韦林对不同甲型流感病毒株的体外作用敏感性比较被引量：2
- 2010年
- 目的评价金刚烷胺和利巴韦林对不同甲型流感病毒株的体外抑制作用,为临床选择抗流感病毒药物提供实验依据。方法分别接种甲型流感病毒标准实验株[H1H1(A/PR/8/34、A/FM1/47),H3N2(A/Aichi/2/1968)]和临床分离株[H1N1(A/Guangzhou/GIRD02/2009、A/Guangzhou/GIRD166/2009),H3N2(A/Guangzhou/GIRD18/2009、A/Guangzhou/GIRD26/2009)],于狗肾细胞(MDCK),采用空斑试验观察金刚烷胺和利巴韦林对甲1和甲3型流感病毒不同实验株和分离株的敏感性。对测试毒株的MP基因进行序列测定和分析,了解金刚烷胺的药物敏感性。结果金刚烷胺在MDCK细胞的半数毒性浓度(TC50)为335μg/ml,对部分甲型流感病毒标准实验株[A/FM1/47(H1N1)、A/Aichi/2/1968(H3N2)]及临床分离株[A/Guangzhou/GIRD02/2009(H1N1)]有抑制作用(半数有效浓度IC50分别为14.9、20.1、16.8μg/ml)。利巴韦林的TC50为2.05mg/ml,对测试的所有毒株均有抑制作用(IC50为6.8～37μg/ml)。金刚烷胺耐药毒株均为单位点突变(第31位的丝氨酸S置换为天冬酰胺N,S31N)。结论甲型流感病毒对金刚烷胺较易出现耐药,而利巴韦林体外对金刚烷胺敏感株和耐药株均有显著的抑制作用,临床抗流感病毒治疗时可考虑应用。
- 占扬清关文达王玉涛黄群娣招穗珊秦笙伍时冠赵韵诗杨子峰
- 关键词：金刚烷胺利巴韦林流感病毒体外
- 稳定表达呼吸道合胞病毒非结构蛋白NS1细胞的构建及其生物特性研究被引量：3
- 2011年
- 获得稳定表达RSV病毒NS1基因的HEp-2-NS1细胞株并对其生物学特性进行初步研究。采用RT-PCR方法从RSV病毒中获得NS1全长基因,克隆到逆转录病毒载体pBABE-puro中,重组载体与包装质粒PIK通过磷酸钙共沉淀法转染包装细胞293FT细胞,产生的逆转录病毒颗粒感染HEp-2细胞,经嘌呤霉素筛选后得到稳定表达细胞株,用QPCR、细胞病变染色法、RT-PCR和间接免疫荧光法检测细胞中NS1 mRNA和蛋白表达情况。结果表明重组逆转录病毒载体pBABE-NS1经双酶切及测序鉴定正确;筛选获得5株阳性单克隆细胞株,QPCR结果显示HEp-2-NS1细胞有NS1基因扩增,其中d株的相对表达量是正常细胞对照组的8 483倍;在外源干扰素作用下,HEp-2-NS1细胞仍对VSV病毒保持敏感,细胞感染病毒48h后染色结果显示全部死亡;对第3代及第30代细胞的RT-PCR和间接免疫荧光法检测结果显示,导入的NS1基因在HEp-2细胞中不仅能转录成相应的mRNA而且能成功稳定地表达。成功构建了稳定表达RSV病毒非结构蛋白NS1的HEp-2-NS1改造细胞株,为建立适用于临床分离的转基因细胞提供良好的基础。
- 秦笙王玉涛杨子峰陈俏连关文达伍时冠刘文宽郑兆广李海涛周荣
- 关键词：呼吸道合胞病毒非结构蛋白细胞
- 呼吸道合胞病毒NS1基因原核表达及其免疫原性分析
- 2012年
- 目的原核表达呼吸道合胞病毒(RSV)非结构NS1蛋白,并对其免疫特性进行研究。方法采用PCR技术获得NS1基因,将其插入pET41a(+)载体上,导入大肠杆菌后诱导表达;利用GST亲和层析柱对诱导表达的NS1蛋白进行纯化,免疫动物制备抗体,Westernblot法鉴定抗体的特异性。结果重组质粒经酶切鉴定和DNA序列测序完全正确,经IPTG诱导后融合蛋白在大肠杆菌BL21-DE3中得到高效表达,表达产物经超声破碎和GST亲和层析纯化获得重组蛋白,分子量约42000Mr,以抗NS1蛋白的多克隆抗体为一抗进行Westernblot检测,结果只有RSV感染细胞的样品在15000Mr处有特异性带显示,其他病毒感染的细胞和阴性对照没有相应条带。结论 NS1基因得到高效表达,免疫制备得到的抗体与RSV感染细胞有特异性反应,与其他常见呼吸道病毒感染细胞无交叉免疫反应。
- 刘昆陈俏连伍时冠潘思华李海涛杨子峰关文达秦笙
- 关键词：呼吸道合胞病毒非结构蛋白蛋白纯化
- 从呼吸道标本中分离人偏肺病毒及病毒培养方法比较被引量：7
- 2013年
- 目的从急性呼吸道感染患者的鼻咽拭子标本中分离人偏肺病毒(hMPV),同时利用分离株比较3种病毒培养方法,探索适合于临床病毒实验室分离培养hMPV的方法。方法接种55份经实时荧光定量PCR(real time-PCR)法检测为hMPV阳性的鼻咽拭子标本至Vero-E6细胞,连续盲传培养3代。每天观察细胞病变,结合real time-PCR和直接免疫荧光法(DFA)检测病毒的核酸复制和蛋白抗原,对分离株的G和F基因序列进行同源性分析。利用real time-PCR比较转鼓培养法、离心培养法和静置培养法3种方法hMPV的复制效率。结果从55份临床标本中分离鉴定出3株hMPV病毒(GZ/1/12、GZ/2/12、GZ/3/12),序列同源性分析显示3株临床分离株属于B型。hMPV病毒复制效率比较:转鼓培养法与离心培养法对hMPV复制效率相当,二者皆优于静置培养法。而离心培养法的操作更简便,更适用临床病毒实验室。结论成功分离鉴定出3株hMPV临床株,离心培养法更适合临床病毒实验室分离培养hMPV。
- 黄文博伍时冠刘文宽周荣杨子峰
- 关键词：人偏肺病毒急性呼吸道感染
- 黄芩苷对甲型流感病毒PR8株的体外抑制作用研究
- 目的研究不同来源黄芩苷对甲型流感病毒PR8株的体外抑制作用。方法制备流感病毒空斑模型,通过预防保护(病毒吸附前给药)和治疗(病毒吸附后给药)两种模式观察黄芩苷对流感病毒不同阶段的抑制作用并结合神经氨酸酶抑制试验寻找其可能...
- 秦笙莫自耀招穗珊关文达王玉涛杨子峰伍时冠
- 关键词：体外抑制作用甲型流感病毒黄芩苷
- 呼吸科临床实验室甲型H1N1流感暴发调查
- 目的 对广州某院呼吸科临床实验室发生一起甲型HIN1流感病毒暴发疫情的经过进行调查。方法 采用问卷调查、感染现场调查和个案调查相结合，描述本次实验室感染的传播过程，并对病例标本进行实验室病原体检测。结果 本次医院感染临床...
- 关文达钟超里潘思华伍时冠杨子峰
- 离心培养法检测上呼吸道感染患者流感病毒的应用与评价被引量：3
- 2011年
- 目的评价离心培养法分离检测流感病毒的敏感性、特异性,探讨其临床应用价值。方法收集2010年1月至2011年2月895份上呼吸道感染患者鼻咽拭子,以传统细胞培养法和离心培养法进行流感病毒培养,并作免疫荧光试验(IF)鉴定。结果广州地区上呼吸道感染患者的流感病毒感染呈两个高峰期,分别为3～5月的春季高峰(以乙型流感病毒为主)和7～9月夏季高峰(甲型流感病毒为主);传统细胞培养分离流感病毒288例,分离率为32%;离心培养分离病毒260例,分离率、敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为29%、89%、99%、98%、95%。结论离心培养法结合IF具有高的敏感性和特异性并能快速报告结果,而且操作简单、节省人力,可实现流感病毒快速分离,适于临床实验室使用。
- 秦笙杨子峰伍时冠刘文宽王玉涛关文达莫自耀周荣罗翌徐霞
- 关键词：流感病毒病毒培养上呼吸道感染
- 三种甲型流感病毒抗原POCT的应用比较被引量：2
- 2024年
- 目的比较甲型流感病毒抗原即时检验(POCT)免疫荧光法、乳胶免疫层析法和免疫胶体金法的临床诊断效能。方法以q RT-PCR为诊断标准,比较3种甲型流感病毒抗原POCT对甲型流感病毒的检出限、分析特异性和在临床样本检测中的诊断灵敏度和诊断特异性。结果免疫荧光法、乳胶免疫层析法和免疫胶体金法对H1N1pdm09的检出限分别为1∶10000、1∶1000和1∶100,对季节性流感H1N1、H1N1(PR8株)、H3N2(Aichi株)、禽流感病毒H6N2和H7N3的检出限分别为1∶100000、1∶10000和1∶1000。检出限从低到高依次为免疫荧光法、乳胶免疫层析法和免疫胶体金法。3种甲型流感病毒抗原POCT对除甲流外的25种临床呼吸道感染常见病原体均无交叉反应。与qRT-PCR相比,免疫荧光法、乳胶免疫层析法、免疫胶体金法的诊断灵敏度分别为74.63%、56.72%和40.30%,免疫荧光法的诊断灵敏度高于乳胶免疫层析法,差异有统计学意义(χ^(2)=46.13,P<0.05),免疫荧光法的诊断灵敏度高于免疫胶体金法,差异有统计学意义(χ^(2)=71.94,P<0.05),乳胶免疫层析法的诊断灵敏度高于免疫胶体金法,差异有统计学意义(χ^(2)=103.54,P<0.05)。免疫荧光法、乳胶免疫层析法、免疫胶体金法的诊断特异性分别为96.41%、100.00%、100.00%,受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)分别为0.86、0.78和0.70。结论免疫荧光法在3种甲型流感病毒抗原POCT中表现最佳,具有最低的检出限、最高的诊断灵敏度和AUC,以及较好的分析特异性和诊断特异性,可满足临床对甲型流感病毒抗原的快速检测需求。
- 丁信刘勇刘勇吴秋保伍时冠伍时冠潘思华杨子峰邓小燕杨子峰
- 关键词：甲型流感病毒免疫荧光法
