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信号分子Mint2与神经生长因子受体TrkA在体结合与功能研究: 神经生长因子NGF/(nerve growth factor/)是神经营养素家族成员之一,该家族还包括BDNF,NT-3,NT-4//5,对于神经元的存活、生长、分化等具有重要的调节作用。NGF的效应受两类不同的细胞表面...; 刘翾; 文献传递

Dok1与TrkA之间相互作用的酵母双杂交研究: 2006年; 目的:研究downstream of kinases1(dok1)与TrkA之间的相互作用,寻找TrkA的可能底物或调控蛋白,以深入认识TrkA下游信号转导机制。方法:将TrkA胞内域与LexA蛋白融合作为DNA结合蛋白,分别将dok1、dok1PTB及dok1ΔPTB与B42AD蛋白融合作为激活域蛋白,共转化酵母菌后,通过β-半乳糖苷酶活性检测以及氨基酸营养缺陷生长实验分析它们之间的相互作用。结果:dok1及dok1PTB与TrkA之间在酵母中存在结合,而dok1ΔPTB不与TrkA结合。结论:证实TrkA与dok1之间具有相互作用,dok1的PTB结构域在介导此相互作用的过程中非常重要。; 刘翾张勇矫力刘秀杰张照环王永刚朱伟何成; 关键词：TRKA 酵母双杂交

Dok1与表皮生长因子受体之间相互作用的酵母双杂交研究: 2004年; 目的 :研究 downstream of kinases(dok1 )与表皮生长因子受体 (EGFR)之间的相互作用 ,寻找 EGFR的可能底物或调控蛋白 ,以深入认识 EGFR下游信号转导机制。方法 :将 EGFR胞内域与 L ex A蛋白融合作为 DNA结合蛋白 ,分别将dok1、dok1 PTB及 dok1 ΔPTB与 B4 2 AD蛋白融合作为激活域蛋白 ,共转化酵母菌后 ,通过 β-半乳糖苷酶活性检测、生长实验以及免疫共沉淀实验分析它们之间的相互作用。结果 :dok1及 dok1 PTB与 EGFR之间在酵母中存在结合 ,而 dok1Δ PTB不与 EGFR结合。结论 :首次证实 EGFR与 dok1之间具有相互作用 ,dok 1的; 张勇刘秀杰张骐阎志勇矫力刘翾路长林何成; 关键词：表皮生长因子受体 PTB 酵母双杂交

SNT1与RET之间相互作用的酵母双杂交研究: 2006年; 目的:研究suc1-binding neurotrophic target(SNT1)与RET之间的相互作用,寻找RET受体下游的结合蛋白,以深入认识RET下游信号转导机制。方法:将RET胞内域与LexA蛋白融合作为DNA结合蛋白,分别将SNT1、SNT1PTB及SNT1ΔPTB与B42AD蛋白融合作为激活域蛋白,共转化酵母菌后,通过β-半乳糖苷酶活性检测以及氨基酸营养缺陷生长实验分析它们之间的相互作用。结果:SNT1及SNT1PTB与RET之间在酵母中存在结合,而SNT1ΔPTB不与RET结合。结论:证实RET与SNT1之间具有相互作用,SNT1的PTB结构域在介导此相互作用的过程中非常重要。; 矫力张勇刘翾刘秀杰张照环王永刚朱伟何成; 关键词：RET PTB 酵母双杂交蛋白相互作用

PC12-Mint2基因工程细胞株的构建: 2005年; 目的:构建稳定表达Mint2蛋白的PC12-Mint2基因工程细胞株。方法:用PCR方法将Mint2基因亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1A,构建真核表达质粒peDNA3.1A-Mint2;采用脂质体Lipofectamine2000介导,将重组载体转染入PC12细胞,G418筛选抗性克隆,有血清培养并传代具有G418抗性的细胞,数代培养后获得工程细胞株;分别提取野生型PC12细胞和PC12-Mint2工程细胞的mRNA及细胞裂解液,RT-PCR方法检测Mint2基因是否整合入PC12细胞基因组,并用West-ern印迹法检测外源基因Mint2在PC12-Mint2工程细胞中是否正常表达。结果:扩增出的基因片段大小为2 253 bp;pcDNA3.1A-Mint2重组质粒酶切结果表明Mint2基因正确地插入到pcDNA3.1A载体中,测序结果正确;将peDNA3.1A-Mint2转染PC12细胞,经G418筛选获得PC12-Mint2工程细胞株;RT-PCR结果表明Mint2基因已整合入PC12细胞,Western印迹结果显示在120 000处有特异条带,大小与Mint2蛋白理论计算值一致,表明在PC12-Mint2基因工程细胞中确实有Mint2蛋白表达。结论:本试验成功构建了真核表达质粒pcDNA3.1-Mint2,并获得了稳定表达Mint2蛋白的PC12-Mint2基因工程细胞株,为进一步研究Mint2生物学功能及其作用机制奠定了基础。; 张骐张勇曹莉刘翾矫力何成; 关键词：PC12细胞转染 WESTERN印迹法

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刘翾