叶伟
- 作品数：20 被引量：24H指数：3
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- 汉滩病毒感染并诱导肾小球内皮细胞中Ⅰ型干扰素应答
- 叶伟徐永妮惠倩倩曹梦远张芳琳徐志凯
- 两种方法检测汉坦病毒滴度的比较研究被引量：5
- 2012年
- 比较双抗体夹心ELISA法与直接免疫荧光(DFA)法在检测汉坦病毒灵敏度方面的差别。用汉坦病毒76—118株感染Vero—E6细胞,取不同时间点的病毒感染细胞制备细胞爬片或细胞培养物冻融上清,分别用本室制备的抗汉坦病毒单克隆抗体标记荧光素或辣根过氧化物酶(HRP),建立直接免疫荧光法和双抗体夹心ELISA法检测上述细胞中的病毒抗原,并比较两者的检测灵敏度。用空斑形成实验结果作为金标准,以评价两种方法在检测病毒抗原灵敏度方面的差异。结果:用两种检测方法测定不同时间点的汉坦病毒培养物抗原,双抗体夹心ELISA法不仅检出的时间早,而且其病毒滴度均较IFA法高(P<0.01)。说明ELISA法检测汉坦病毒滴度的灵敏度较IFA法更高,并且操作简单、可重复性好、便于大批量规模化检测,因此更适用于汉坦病毒的检测。
- 白露叶伟于蒙蒙张亮于澜刘梓谕吴兴安徐志凯张芳琳
- 关键词：汉滩病毒病毒滴度双抗体夹心ELISA直接免疫荧光
- 炎症因子和炎症小体在汉坦病毒感染致病中作用的初步研究
- 肾综合征出血热（hemorrhagic fever withrenal syndrome，HFRS）是由旧大陆汉坦病毒引起的，以急性肾功能损害为主要特征的急性传染病。该病自从被发现报道以来，我国发病人数一直位于世界首位，...
- 叶伟
- 关键词：汉坦病毒肾综合征出血热炎症细胞因子人脐静脉内皮细胞
- 文献传递
- qRT-PCR快速检测汉滩病毒抗体中和活性实验方法的建立
- 2017年
- 目的:建立一种基于qRT-PCR的微量细胞中和实验改良法,快速、定量检测汉滩病毒感染中的中和抗体活性。方法:将本室前期制备的抗汉滩病毒高中和活性鼠源性单抗3G1、鼠/人嵌合单抗1D9和感染剂量为100 TCID50的病毒混合液于37℃孵育1 h后感染Vero-E6细胞,提取细胞总RNA。根据GenBank数据库中汉滩病毒76-118株S基因序列设计特异性引物,在上述实验基础上以细胞总RNA为检测样品,建立qRT-PCR快速、定量检测汉滩病毒感染中中和抗体活性的实验方法。结果和结论:建立了一种基于qRT-PCR的微量细胞中和实验改良法,可定量测定汉滩病毒感染中的中和抗体活性,该法具有快速、灵敏、特异和重复性好等优点。
- 张晓晓张尧冯伟程林峰王芳应旗康马瑞雪马铁军刘梓谕刘蓉蓉张亮叶伟张芳琳徐志凯吴兴安
- 关键词：汉滩病毒QRT-PCR中和抗体肾综合征出血热
- 汉坦病毒与机体干扰素免疫应答被引量：1
- 2012年
- 汉坦病毒属（hantavirus，HV）是布尼亚病毒科的单负链RNA病毒，其基因组分为L、M、S3个片段，分别编码病毒的RNA聚合酶（L）、包膜糖蛋白（Gn和Gc）和核衣壳蛋白（NP）。
- 叶伟白文涛
- 关键词：汉坦病毒属免疫应答干扰素机体RNA聚合酶布尼亚病毒
- 基孔肯雅病毒病毒样颗粒的制备及初步鉴定被引量：1
- 2017年
- 目的通过杆状病毒表达系统表达制备基孔肯雅病毒(CHIKV)病毒样颗粒并进行初步鉴定。方法首先将基孔肯雅病毒的结构蛋白基因C-E3-E2-6K-E1克隆入p Fast-Bac^(TM) Dual转移载体中并鉴定;然后将构建正确的重组转移载体转化DH10Bac感受态细胞后提取重组杆粒并鉴定;再将重组杆粒转染Sf9昆虫细胞后获得重组杆状病毒,并利用免疫荧光法(IFA)鉴定其感染Sf9细胞后E2蛋白的表达;最后通过透射电镜(TEM)和Western-Blot鉴定CHIKV病毒样颗粒。结果成功获得了含有CHIKV结构蛋白基因的重组杆状病毒,该重组病毒经过IFA及WB验证在昆虫细胞中能够表达CHIKV的E蛋白,并在电镜下观察到了直径约60~80 nm的CHIKV病毒样颗粒。结论通过杆状病毒表达系统成功表达并获得CHIKV的病毒样颗粒,为CHIKV早期快速检测法的建立奠定基础。
- 陈何嵩程林峰马宏炜叶伟韩佩君张亮雷迎峰张芳琳
- 关键词：基孔肯雅病毒杆状病毒表达系统病毒样颗粒
- 汉滩病毒受体与细胞因子TNFRⅠ真核表达载体的构建及稳定转染细胞系的建立
- 2012年
- 为构建带有荧光标签的汉滩病毒受体整合素β3与细胞因子TNFRⅠ的稳定转染细胞系,构建目的基因的真核表达载体pIRES2-EGFP-β3和pIRES2-DsRed-TNFRⅠ(EC),并转染CHO细胞,直接荧光观察报告基因和荧光定量RT-PCR检测目的基因mRNA表达。结果转染重组质粒pIRES2-EGFP-β3的细胞可检测到荧光报告基因和目的基因β3 mRNA的表达,转染pIRES2-DsRed-TNFRⅠ(EC)的细胞可检测到荧光报告基因和目的基因TNFRⅠmRNA的表达。结果表明成功地构建了真核表达整合素β3与TNFRⅠ的稳定细胞系。
- 叶伟白露于蒙蒙于澜张亮吴兴安张芳琳徐志凯白文涛
- 关键词：汉滩病毒整合素Β3
- 血管内皮生长因子通路在汉坦病毒致病过程中的作用研究进展
- 目前己知致病性的汉坦病毒主要利用整合素β3入胞;血管内皮细胞(ECs)表面大量表达αvβ3整合素，是汉坦病毒感染主要的靶细胞。ECs上血管内皮钙粘蛋白(VE-cadherin)是构成粘着连接(Ajss)的主要成分，而VE...
- 叶伟白露张芳琳徐志凯
- 关键词：汉坦病毒血管内皮生长因子病理学机制钙粘蛋白
- 羊布鲁菌外膜蛋白omp2b的克隆,原核表达及纯化被引量：1
- 2011年
- 研究羊布鲁菌外膜蛋白omp2b基因的克隆,原核表达,以及纯化。根据羊布鲁菌M5株外膜蛋白omp2b蛋白基因序列设计引物,扩增出大小约为1 130 bp的目的基因片断,克隆入融合表达载体pGEX-4T-1,构建重组质粒pGEX-4T-1-omp2b。在大肠埃希菌中将该蛋白表达并用亲和层析法纯化。用Western-blot分析方法鉴定纯化蛋白。结果成功构建了pGEX-4T-1-omp2b原核表达载体并在大肠埃希菌中表达了omp2b基因,纯化后所获得的蛋白与目的蛋白大小一致且与兔抗布鲁菌血清发生特异性反应,说明其为布鲁菌omp2b蛋白。本研究成功构建了pGEX-4T-1-omp2b原核表达载体,并且在大肠埃希菌中进行表达,纯化的omp2b蛋白具有良好的免疫原性。
- 张蕾张亮于澜白文涛应旗康李凯程林峰叶伟吴兴安徐志凯张芳琳
- 关键词：克隆纯化
- 汉坦病毒感染对Ⅰ型干扰素应答的调节机制被引量：6
- 2014年
- 汉坦病毒主要感染人内皮细胞,细胞在病毒感染早期诱导生成的Ⅰ型干扰素(IFN-Ⅰ)可阻断汉坦病毒的复制,但不同的病毒蛋白和不同型别的汉坦病毒在IFN应答的调节机制上可能有所不同。就汉坦病毒感染对IFN应答的调节机制进行了综述。
- 徐永妮曹梦远叶伟张芳琳
- 关键词：汉坦病毒
