张亮
- 作品数：114 被引量：644H指数：13
- 供职机构：第三军医大学西南医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学自动化与计算机技术理学更多>>
- 基于磁珠的可视化基因芯片在诺如病毒快速检测中的应用被引量：12
- 2009年
- 目的建立可用于临床样本检测的基于磁珠的可视化基因芯片检测方法。方法在玻璃芯片上以链霉亲和素包被的磁珠作为标记物,采用生物素标记的核酸为样品,通过链霉亲和素与生物素的亲和作用,进行核酸杂交检测,杂交结果以肉眼或通过普通显微镜观测,验证方法的特异性、灵敏性及重复性。结果方法检测的灵敏度为50ng,特异性和重复性均较好;对20份临床粪便样本分别进行PCR和芯片检测,芯片检测结果与PCR方法检测结果一致。20份临床样本中,6份阳性,其中1份为诺如病毒Ⅰ型、5份为诺如病毒Ⅱ型,14份阴性。结论方法显示具有高效、实用和可视化的特点,可同时检测样品中含有的诺如病毒Ⅰ型、诺如病毒Ⅱ型;检测时间短,能够满足口岸诺如病毒的快速检测要求,具有较好的实用价值,对于进一步开发更多指标的微生物检测方法具有很好的示范作用。
- 史蕾顾大勇徐云庆吕志平黄彤文赵纯中臧庆伟张亮冬冰
- 关键词：诺如病毒磁珠基因芯片可视化
- 肾综合征出血热患者外周血中VEGF通路相关分子的检测
- 2013年
- 目的检测肾综合征出血热(HFRS)患者不同病期外周血中VEGF通路相关分子含量的变化,并分析其与病程中血管渗漏的关系,为研究HFRS的发病机制提供依据。方法用酶联免疫吸附法(ELISA)检测141例不同病期HFRS患者外周血中血管内皮生长因子(VEGF)、可溶性血管内皮生长因子受体2(sVEGFR2)、可溶性血管内皮生长因子受体1(sVEGFR1)、可溶性血管内皮钙黏蛋白(sVE-cadherin)4种分子的含量,同时将30例健康志愿者作为正常对照。结果 HFRS患者血浆VEGF含量在发热期、少尿期、多尿期均高于对照者。HFRS患者sVEGFR2在休克期、少尿期、多尿期均低于对照者,sVE-cadherin在低血压休克期、少尿期高于正常对照者,sVEGFR1在血浆中的含量很低,仅能在休克期检测到极微量的存在。上述结果差异均有统计学意义。结论 HFRS患者血管通透性增高与VEGF表达升高可能有关,sVEGFR2的表达下降增强了VEGF的功能。sVE-cadherin在疾病进程中含量与疾病严重程度成正比。
- 于蒙蒙叶伟白露徐永妮于澜张亮刘勇于海涛徐志凯张芳琳
- 关键词：肾综合征出血热血管内皮生长因子可溶性血管内皮生长因子受体
- 天然抗角蛋白自身抗体识别的角蛋白模拟表位的研究被引量：1
- 2002年
- 目的探索利用天然抗角蛋白自身抗体(AKautoAb)淘筛噬菌体递呈的随机肽库,获得在体内具有功能活性的角蛋白模拟表位方法。方法用角蛋白亲和层析柱从正常人混合血清中分离并纯化AKautoAb,然后进行生物素标记;用生物素化的AKautoAb对噬菌体递呈的随机15肽库进行3轮淘洗并进行ELISA检测;挑取23个阳性克隆进行DNA测序,分析所获数据并进行竞争实验。结果DNA测序分析表明,AKautoAb特异识别3个抗原表位区:SLSPMPTTNRR、PPLIPIPLRTM和TTPRPPMRIMLPRIT,其中SLSPMPTTNRR可能含有优势表位;携有这些短肽的噬菌体可与AKautoAb特异结合,角蛋白可阻断这种特异的结合反应。结论利用噬菌体随机肽库技术成功地获得了AKautoAb所识别的角蛋白模拟表位。
- 张亮刘玉峰李巍李承新张衍国杨乔欣任君萍黎志东
- 关键词：天然抗角蛋白自身抗体ELISA法
- 抗汉滩病毒中和性鼠／人嵌合抗体基因转化拟南芥的初步研究
- 2008年
- 目的:建立能表达抗汉滩病毒中和性鼠/人嵌合抗体基因的转基因植株,为汉坦病毒基因工程抗体的研究提供实验基础。方法:将构建的含抗汉滩病毒中和性鼠/人嵌合抗体基因的植物抗体表达质粒3G1MH-pCAMB IA2301,用TSS冻融法导入农杆菌GV3101,利用农杆菌介导的抽真空转基因技术转化野生型拟南芥,获得转基因植株。用PCR、Northernblot检测转基因植株。结果:经PCR分析表明,拟南芥的基因组中有抗汉滩病毒中和性鼠/人嵌合抗体基因整合,并成功获得7株T0代转基因拟南芥。植株提取RNA,经Northernblot分析可见约1 500 bp及800 bp处的目的条带,为编码重、轻链的目的基因。结论:成功地构建了含抗汉滩病毒中和性鼠/人嵌合抗体基因的拟南芥植株,为进一步利用植物表达治疗性抗体奠定了基础。
- 周伟吴兴安罗雯胡刚张芳琳白文涛张亮于澜史梦远徐志凯
- 关键词：汉滩病毒嵌合抗体转基因植物植物抗体
- 联合应用抗原递呈分子HSP70C基因的汉滩病毒嵌合基因GnS0.7、GcS0.7重组腺病毒的构建及鉴定
- 2014年
- 目的构建含有抗原加工递呈分子基因HSP70C的HTNV嵌合基因GnS0.7、GcS0.7重组腺病毒。方法通过PCR扩增获得HSP70C基因,分别克隆入本室已构建的重组腺病毒转移载体pShuttle-pCAG-GnS0.7及pShuttle-pCAGGcS0.7中,进而构建新的重组腺病毒转移载体pShuttle-pCAG-GnS0.7-HSP70C及pShuttle-pCAG-GcS0.7-HSP70C。进一步通过双酶切将转移载体中的目的嵌合基因再分别克隆入腺病毒载体,得到重组腺病毒载体rAd-pCAG-GnS0.7-HSP70C、rAd-pCAG-GcS0.7-HSP70C,使用Pac I线性化后转染HEK293细胞,包装后获得重组腺病毒,感染HEK293细胞后用免疫荧光法检测表达产物。结果经过酶切、PCR扩增和测序结果显示,各重组腺病毒转移载体及重组腺病毒载体构建正确。免疫荧光实验检测到各重组腺病毒中目的蛋白的表达。结论成功制备了含抗原递呈分子HSP70C基因的汉滩病毒嵌合基因GnS0.7、GcS0.7重组腺病毒,为进一步研究构建的汉滩病毒重组腺病毒的免疫学特性奠定了实验基础。
- 张亮程林峰于澜刘梓谕李璞媛徐志凯张芳琳
- 关键词：汉滩病毒腺病毒热休克蛋白70
- 医学微生物学实验教学实践及体会被引量：3
- 2010年
- 医学微生物学是一门实践性极强的学科,实验课教学占相当的比重,就如何提高本科生的基本技能,培养学员严谨的科学作风,引导学员在实验中提出问题,提高学员的实验操作能力,培养其分析能力作一总结。
- 张亮张芳琳白文涛徐志凯
- 关键词：医学微生物学教学方法实验课
- 遗传序优化方法的初步研究
- 对于大量最优解未知的多极小NP难题,不仅难以高效实现全局优化,而且难以评价所得解对整个解空间的质量.文章将序优化思想和遗传算法的搜索策略相结合,首先对确定性问题提出了一类遗传序优化算法,即采用遗传算法的进货操作在序优化思...
- 王凌张亮郑大钟
- 关键词：遗传算法序优化旅行商问题
- 文献传递
- 抗汉滩病毒鼠/人嵌合抗体工程细胞的驯化、抗体表达及鉴定
- 2016年
- 目的:通过对稳定表达抗汉滩病毒鼠/人嵌合抗体的CHO细胞进行驯化,检测其抗体的表达情况,并对所表达抗体的生物学活性进行初步鉴定。方法:将本课题组前期筛选得到的稳定高表达细胞株1-D9进行无血清驯化,使其适合悬浮培养后接种到摇瓶,通过调整不同的培养条件,每天检测细胞的活率和抗体表达量,并对表达的抗体进行生物学活性鉴定。结果:通过驯化得到了适合悬浮培养的CHO细胞株,其抗体表达量高,生产周期短;并优化了其悬浮培养条件,表达的抗体经鉴定其生物学活性稳定。结论:优化了抗汉滩病毒鼠/人嵌合抗体表达条件,为下一步工业化生产提供了实验依据。
- 张晓晓冯伟张尧程林峰应旗康马瑞雪马铁军刘梓谕刘蓉蓉王芳张亮叶伟张芳琳徐志凯吴兴安
- 关键词：汉滩病毒CHO细胞嵌合抗体
- 汉坦病毒G1S0.7嵌合基因真核载体的构建及表达被引量：2
- 2010年
- 构建含汉坦病毒嵌合基因G1S0.7的真核重组质粒,并在真核细胞中有效表达。从本室前期构建并经测序的重组质粒pShuttle—G1S0.7上双酶切回收得到片段G1S0.7后,克隆入真核表达载体pVAX,并将其通过脂质体介导转染HEK293细胞,表达产物用ELISA和Western—blot进行鉴定。酶切鉴定结果表明,成功构建了含汉坦病毒嵌合基因G1S0.7的重组质粒pVAX—G1S0.7;ELISA检测结果和Western—blot结果显示,汉坦病毒G1S0.7嵌合基因在HEK293细胞中得到了表达,所表达的融合蛋白分子量约90kD,与预期大小一致,并且表达产物可与抗汉坦病毒NPmAb特异性结合。说明所构建的表达载体可在真核细胞中表达出与汉坦病毒抗体有特异性结合活性的融合蛋白,为下一步基因免疫及进一步筛选HFRS基因疫苗候选组分提供实验依据。
- 楚琰李璞媛李凯胡刚吴兴安张芳琳白文涛张亮王海涛徐志凯
- 关键词：汉坦病毒核蛋白基因表达
- 汉滩病毒核蛋白CTL表位肽联合不同免疫佐剂的免疫学特性研究
- 2016年
- 目的:研究汉滩病毒(HTNV)核蛋白细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位肽联合不同免疫佐剂免疫C57BL/6小鼠后的免疫学特性,确立一种免疫效果良好的多肽免疫C57BL/6小鼠方案。方法:分别用氢氧化铝、弗氏佐剂和脂质体作为免疫佐剂与汉滩病毒核衣壳蛋白上的CTL表位肽段混合,经皮下注射免疫C57BL/6小鼠,共免疫3次,每次间隔2周;免疫结束后分离小鼠脾细胞,并分别采用ELISPOT和CTL杀伤试验进行检测。结果:HTNV核蛋白CTL表位肽联合弗氏佐剂加脂质体组小鼠脾细胞分泌IFN-γ能力和CTL杀伤能力优于其他各实验组(P<0.01)。结论:HTNVCTL表位肽联合弗氏佐剂加脂质体免疫C57BL/6小鼠效果最佳,可为HTNV多肽疫苗的免疫策略提供参考。
- 马瑞雪程林峰马铁军王敬增应旗康张晓晓刘蓉蓉王芳刘梓谕张亮叶伟张芳琳徐志凯吴兴安
- 关键词：免疫佐剂汉滩病毒表位肽C57BL/6小鼠
