吉栩
- 作品数：4 被引量：19H指数：2
- 供职机构：北京大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- PPF1基因C端片段在大肠杆菌中的融合表达和纯化以及抗体制备被引量：7
- 2002年
- PPF1是与G2豌豆短日不衰老现象紧密相关的基因之一 .以pSK PPF1为模板 ,用PCR方法得到了编码该蛋白C端的基因片段 ,称为PPFC .进一步将该基因片段克隆到中间载体pGEM T easy ,再酶切得到PPFC片段插入到pGEX 4T 1载体中 ,构建成表达质粒pGEX 4T PPFC .在BL2 1细胞中经IPTG诱导表达 ,得到GST PPFC融合蛋白 .用GST亲和柱纯化得到PPFC蛋白 ,将其作为抗原得到兔源的多克隆抗体 .Western杂交分析表明所得到的抗体具有较强的特异性 ,ELISA分析证实其效价为 10 6.该抗体的获得为用免疫沉淀等免疫分析技术研究PPF1与其它蛋白质的相互作用 。
- 徐云剑苏力坦.阿巴白克力吉栩朱玉贤
- 关键词：C端片段大肠杆菌纯化抗体制备多克隆抗体植物细胞
- 水稻矮缩病毒外壳蛋白P9具有体内转录激活活性被引量：12
- 2007年
- 将RDV微核心蛋白基因S9克隆到酵母表达载体pGBKT7中,转入AH109酵母细胞,转化子可以在SD/Trp-His-Ade-多营养缺陷固体培养基上正常生长,证明RDV P9在酵母中具有转录激活活性,运用β-半乳糖苷酶的活性分析对重组质粒转化子的转录激活程度做了定量分析,发现与正对照相比,转化pGBK-S9的酵母菌中β-半乳糖苷酶活性可达到正对照的40%以上。构建了含有gusA报告基因的植物表达载体用来分析P9在植物中的转录激活活性,实验结果表明,融合GAL4 DB的P9蛋白可以在植物体内激活报告基因的表达,Western印迹法分析表明了P9蛋白在酵母和植物中均可以表达。证明了在植物体内RDV P9蛋白同样能够激活基因的转录,暗示该蛋白可能在病毒的侵染和复制过程中参与调控病毒或寄主基因的转录表达。
- 尹哲吉栩吴云锋李毅
- 关键词：水稻矮缩病毒转录激活活性
- 水稻矮缩病毒运动蛋白Pns6生化活性研究和病毒细胞间运动探讨
- 水稻矮缩病毒(Rice dwarf virus，RDV)是具有12条双链RNA基因组组分的植物呼肠孤病毒。水稻矮缩病毒基因组组分S6编码的非结构蛋白Pns6是该病毒的运动蛋白。本实验室以前的研究表明，Pns6能互补由于2...
- 吉栩
- 关键词：水稻矮缩病毒生化活性呼肠孤病毒薄层层析突变体蛋白
- 水稻矮缩病毒非结构蛋白Pns6的表达及其单克隆抗体的特异性分析被引量：1
- 2009年
- 水稻矮缩病毒（RDV）的基因组包含12条双链RNA,其中基因组片段S6编码的非结构蛋白Pns6为该病毒的运动蛋白.在本研究中,在大肠杆菌中表达了N端融合His-tag的重组Pns6蛋白.在低温和低IPTG浓度的诱导后,通过Ni螯合亲和层析进行纯化获得了HisPns6蛋白.稳定性分析表明,HisPns6是一个稳定的蛋白,可耐受37℃下长达24h的处理.纯化的蛋白后续用于单克隆抗体的制备并得到18个杂交瘤细胞株系.使用从感染RDV的水稻叶片中提取的Pns6为样品,以健康水稻总蛋白为对照,通过Western blot法对抗体进行特异性分析,获得了15个阳性抗体.对其进行抗原决定簇分析表明,最敏感的抗原决定簇位于Pns6的C端区域（296~509位氨基酸）.该结果与生物信息学预测分析相吻合.
- 吉栩魏春红李毅
- 关键词：水稻矮缩病毒单克隆抗体抗原决定簇
