吕萍
- 作品数：35 被引量：25H指数：3
- 供职机构：中国食品药品检定研究院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家科技支撑计划“重大新药创制”科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生自动化与计算机技术更多>>
- 脑蛋白水解物注射液中钙镁元素含量的测定
- 2012年
- 目的测定脑蛋白水解物注射液中钙镁元素的含量。方法采用原子吸收分光光度法测定脑蛋白水解物注射液中钙镁元素的含量。结果国内31家企业生产的脑蛋白水解物注射液中镁钙元素含量差别较大,Ca/Mg也有较大差异。结论为研究该品种的质量提供了有用的数据。
- 吕萍丁晓丽梁成罡杨化新
- 关键词：脑蛋白水解物注射液火焰原子吸收分光光度法
- 特立帕肽宿主DNA残留量检测方法研究
- 2012年
- 目的:对特立帕肽宿主DNA残留量进行了方法学研究,为该品种的质控标准提供依据。方法:根据中国药典2010年版三部的方法,分别对10 dose.mL-1和1 dose.mL-1 2个样品浓度的宿主DNA残留量检测进行了方法学研究。结果:研究表明特立帕肽原液2个浓度的宿主DNA残留检测均符合系统适用性要求。特立帕肽注射液的10 dose.mL-1浓度对加样回收有一定干扰,不能保证加样回收测定均符合规定,而1 dose.mL-1浓度的注射液在10 ng和1 ng的加样回收均没有干扰,因此将1 dose.mL-1样品浓度作为宿主DNA残留量检测浓度。对1 dose.mL-1样品浓度分别进行了1 ng、0.1 ng的加样回收测定,结果均符合要求。对3批特立帕肽原液和注射液检测结果表明每1剂量的宿主DNA残留量均小于10 ng。结论:该方法检测灵敏度较高,特异性较强,操作较安全简便,可用于特立帕肽的质量评价及进口检定。
- 吕萍辛中帅梁成罡
- 关键词：重组人甲状旁腺激素特立帕肽原液注射液
- 均相时间分辨荧光法测定人胰岛素生物学活性
- 2022年
- 建立基于均相时间分辨荧光免疫分析技术的人胰岛素体外生物学活性测定方法。利用CHO-INSR B1284转基因细胞,通过均相时间分辨荧光免疫分析系统检测人胰岛素的体外生物学活性;对靶细胞铺板密度、药物的量效范围、刺激时间等关键参数进行优化;验证方法的专属性、相对准确度、中间精密度、线性与范围,以及细胞的传代稳定性;以重组人胰岛素国家标准品为参比品,将本研究建立的方法应用于其他人胰岛素类似物原料药、制剂的生物学活性测定。结果表明人胰岛素及其类似物存在剂量效应曲线,R^(2)>0.995,符合四参数方程y=(A-D)/[1+(x/C)^(B)]+D。本方法专属性良好,64%、80%、100%、125%、156%共5个效价浓度的待测品相对效价(n=8)的几何均值、相对偏倚、几何变异系数(GCV,%)均符合《中华人民共和国药典》2020版四部通则9401的要求;且方法可适用于其他胰岛素类似物的生物学活性测定。该方法操作简便、耗时短、准确度高、精密度好,可用于胰岛素类产品的生物学活性评价和质量控制。
- 王绿音杨艳枫张孝明吕萍张慧李晶梁成罡
- 关键词：生物学活性人胰岛素转基因细胞
- 报告基因法测定人绒毛膜促性腺激素生物活性
- 2024年
- 本研究根据人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin,hCG)与受体结合后激活cAMP信号通路,构建一种LHCGR-CRE-luc-HEK293转基因细胞系,采用荧光素酶检测系统对hCG进行生物活性检测,利用四参数拟合分析计算样品相对效价。并且对该方法条件进行优化,对方法的专属性、相对准确度、精密度和线性进行验证。结果显示,hCG浓度与报告基因表达量存在量效关系,且符合四参数曲线。经优化后,条件确定为hCG初始浓度为2.5μg·mL-1,稀释倍数为1∶4,细胞数为每孔10000~15000个,诱导时间为6 h。该方法具有良好的专属性,相对准确度的相对偏倚范围在-8.9%~3.4%,线性回归方程相关系数为0.996,中间精密度几何变异系数范围为3.3%~15.0%,线性范围为50%~200%。本研究成功建立并验证了一种报告基因法检测hCG生物学活性,可以用于hCG生物活性检测和质量控制。
- 黄盈张孝明李鹤洋王绿音张慧吕萍李晶高向东梁成罡
- 关键词：人绒毛膜促性腺激素生物活性
- GLP‑1样化合物的生物学活性的体外检定方法
- 本发明涉及了一种GLP‑1样化合物体外生物学活性检定的方法。该方法是在U2OS/GLP‑1R细胞种上加入梯度稀释的GLP‑1样化合物、然后检测并分析。本申请用高内涵对结果进行图像采集、数据输出，确保结果快速分析；用Sof...
- 梁成罡魏云林王杰吕萍季秀玲张胜婷李晶张慧
- 重组人促卵泡激素体外生物学活性测定方法的联合验证被引量：2
- 2023年
- 为探索基于报告基因的重组人促卵泡激素体外生物学活性测定方法的标准化应用前景,进行实验室间的联合验证。按照《中华人民共和国药典》2020年版通则9401对该方法进行相对准确度、中间精密度、线性与范围等方法学验证;联合3个实验室采用本方法测定来自不同生产企业的6批制剂及3批原液的体外生物学活性,对测定结果进行实验室间一致性分析以及实验室内、实验室间精密度分析;据联合验证中发现的问题对方法进行调整优化。实验室内方法学验证的结果符合《中华人民共和国药典》2020版四部通则9401的要求;针对联合验证中发现的问题,对细胞铺板培养基、标准品及供试品的预稀释缓冲液、加药后吸弃上清方式进行了优化,优化后各实验室之间的测定结果无显著差别(P>0.05),具有统计学等效性;实验室内及实验室间精密度良好,几何变异系数(GCV%)均小于15%。综上,本方法具有良好的实验室内重复性及实验室间重现性,且适用于不同生产厂家的重组人促卵泡激素制剂与原液产品,有望作为测定此类产品体外生物学活性的标准化方法进行推广。
- 王绿音吕萍张慧李晶梁成罡
- 关键词：生物学活性重组人促卵泡激素
- 利拉鲁肽中长链脂肪酸——棕榈酰谷氨酸残留量的检测方法研究被引量：1
- 2022年
- 目的建立超高效液相-高分辨质谱法测定利拉鲁肽中的长链脂肪酸--棕榈酰谷氨酸残留量检测方法,为长效脂肪酸修饰型胰岛素和胰高糖素样肽-1类似物的脂肪酸残留量检测提供思路。方法色谱柱ACQUITY UPLC peptide BEH C4(2.1 mm×150 mm,2.7μm);流动相A为甲酸/水(1:1000,V/V),流动相B为甲酸/乙腈(1:1000,V/V),梯度洗脱:0~10 min,35%~95%B;10~10.5 min,95%~35%B;10.5~15 min,35%B。流速0.3 ml/min,柱温50℃,样品盘温度25℃,检测波长214 nm,进样体积2μl。利用超高效液相色谱质谱联用技术(UPLC-MS),在正离子电喷雾离子化(ESI+)选择性离子检测(SIM)模式下(检测离子分子式为C_(21)H_(39)NO_(5),[M+H^(+)]m/z 386.2901),测定利拉鲁肽中棕榈酰谷氨酸的残留量。结果该方法专属性强,棕榈酰谷氨酸与利拉鲁肽分离度良好,棕榈酰谷氨酸在0.0125~2μg/ml的范围内峰面积与浓度有良好的线性关系(R=1.000),方法平均回收率为98.2%(n=9),RSD%为3.7%。结论经方法学验证,本法能准确测定利拉鲁肽中棕榈酰谷氨酸残留量,方法精密度、重复性、准确度和耐用性良好,并且为类似产品的脂肪酸残留量检测提供一定的借鉴和数据支持。
- 胡馨月孙悦张慧吕萍李晶梁成罡
- 关键词：利拉鲁肽液质联用高分辨质谱
- 蛋白酶消化结合荧光定量PCR法和杂交法检测重组人胰岛素中E.coli细胞DNA残留量的比较被引量：1
- 2017年
- 目的:利用蛋白酶K消化结合荧光定量聚合酶链式反应(q-PCR)技术,检测重组人胰岛素原料中E.coli细胞DNA残留量,并进行初步的方法学验证,与狭缝杂交-放射自显影方法进行比较。方法:通过蛋白酶K消化样品,利用核酸纯化提取试剂盒提取DNA,然后采用Taqman探针法对样品和标准DNA进行定量PCR测定,再根据标准曲线对样品中DNA残留量进行分析。对方法进行线性、范围、准确度和精密度的验证,对重组人胰岛素中DNA残留量进行测定。结果:该方法检测E.coli细胞DNA残留的最低定量限度为0.03 pg·μL^(-1),DNA含量在0.03~2.25×10~3 pg·μL^(-1)范围内线性关系良好,相关系数在0.98以上;该方法检测不同加标样品回收率较接近,3次测定的相对标准偏差均小于20%;该方法检测各批次重组人胰岛素的DNA残留量均小于10 ng·剂量^(-1),而狭缝杂交——放射自显影法50 pg(标准DNA)均未出现条带。结论:蛋白酶消化结合试剂盒洗脱解决了残留DNA检测中样品前处理的难题,定量PCR检测可能代替杂交法,快速、准确、灵敏地对重组人胰岛素原料中E.coli细胞残余DNA进行定量测定,为将来荧光定量PCR检测药物中宿主DNA残留方法标准化奠定了基础。
- 王杰吕萍张慧李晶丁晓丽魏云林梁成罡
- 关键词：重组人胰岛素
- 三硝基苯磺酸法测定聚乙二醇化重组人生长激素的平均修饰度被引量：2
- 2011年
- 目的:建立测定三种不同结构聚乙二醇化重组人生长激素(PEG-rhGH)平均修饰度的三硝基苯磺酸法(TNBS)。方法:采用基质辅助激光解吸附飞行时间质谱(MALDI-TOF)测定PEG-rhGH的分子量,求得理论平均修饰度。既而通过正交试验、游离PEG干扰等方法学考察,建立TNBS法。结果:从质谱法可知PEG-rhGH的理论修饰度为10%,TNBS法测得三种PEG-rhGH的修饰度分别为为10%、12%及10%,与理论值相符。结论:TNBS操作简单,不需要专门的仪器,可作为测定PEG-rhGH平均修饰度的方法。
- 李晶王永利杨化新梁成罡程速远丁晓丽吕萍
- 首批重组特立帕肽国家标准品的研制与标定被引量：3
- 2021年
- 目的:为满足国内重组特立帕肽(重组人甲状旁腺激素1-34,rh PTH1-34)及相关制剂质量控制的需要,研制并标定首批重组特立帕肽国家标准品。方法:采用免疫斑点、质谱、N端氨基酸测序、反相HPLC鉴别、氨基酸组成以及肽图等方法对用于待标品制备的原液进行定性及结构确认;以WHO第2批rhPTH1-34国际标准品15/304作为标准,参照原国家食品药品监督管理总局颁发的生物制品标准YBS00062017中相关方法,联合3个实验室参加协作标定;并对待标品均一性及稳定性进行考察。结果:重组特立帕肽待标品经协作标定,最终含量定值为0.975 mg·瓶^(-1),生物效价为9750 IU·瓶^(-1);均一性考察符合要求、稳定性考察结果4℃条件下20 d纯度略有下降,40℃放置5 d和光照20 d后纯度明显下降。结论:本批待标品确认为重组特立帕肽,可以作为首批重组特立帕肽国家标准品,以供重组特立帕肽及相关制剂的HPLC鉴别、含量测定及生物活性测定用,本批待标品含量以0.975 mg·瓶^(-1)计,效价以9750 IU·瓶^(-1)计。
- 张伟张慧吕萍李晶陈莹王绿音李懿汤火龙黄洁梁成罡
- 关键词：国家标准品生物测定
