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周国林: 作品数：15 被引量：97H指数：7; 供职机构：中国预防医学科学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家重点实验室开放基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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海南岛两株甲病毒基因组3′末端核苷酸序列的克隆与分析被引量：32: 2000年; 目的　从分子水平鉴定海南省分离的两株甲病毒 (HBb17和M1病毒 )。方法　采用RT-PCR方法 ,分别扩增两株病毒基因组的 3′末端核苷酸序列 ,扩增产物经亚克隆 ,筛选重组子并测定核苷酸序列对序列进行分析。结果　HBb17和M1病毒分别扩增出约 1 6kb和 1 3kb的特异片段。序列分析表明 ,在 3′末端非翻译区HBb17病毒与罗斯河病毒 (国际标准株T48病毒 )核苷酸同源性为99 % ,M1病毒与鹭山病毒 (SAG)同源性为 98% ;两病毒结构基因的E1区序列 ,HBb17病毒与罗斯河病毒核苷酸 (氨基酸 )同源性为 99% (99% ) ,M1病毒与鹭山病毒核苷酸 (氨基酸 )同源性为 97% (99% ) ,M1病毒与盖塔病毒同源性为 94% (98% )。结论　序列分析表明 ,海南岛分离的HBb17病毒属于罗斯河病毒。; 赵文忠周国林何海怀付士红金奇赵春生方美玉蒋廉华林立辉梁国栋侯云德; 关键词：甲病毒属克隆分子生物学

辛德毕斯病毒结构蛋白基因对宿主细胞影响的初步研究被引量：2: 2000年; 目的　了解辛德毕斯病毒基因结构与功能的关系 ,阐明其分子致病分子机理。方法　构建了辛德毕斯病毒 (XJ- 16 0病毒株 )结构基因的真核表达质粒 ,pcDNA3.1ABC ,转染BHK - 2 1细胞后观察其对宿主细胞的影响。结果　转染病毒结构基因的BHK - 2 1细胞 ,可以发生辛德毕斯病毒感染所出现的细胞毒性反应 ,表现为 :细胞存活率降低 ;细胞核染色质浓缩、凝集 ;G1期细胞减少、而处于S期的细胞增多。; 李蕾梁国栋赵炳文周国林付士红何海怀金奇侯云德; 关键词：辛德毕斯病毒脱噬作用结构基因

YN87448病毒毒株全基因组序列及其克隆方法: 一种YN87448病毒毒株全基因组序列及其克隆方法,该克隆方法将全基因分15片段,用RT－PCR方法扩增相应cDNA,连入pGEM－T载体,利用通用引物测序,在病毒基因序旬扩增引物设计上,选择甲病毒保守区域的核苷酸序列设...; 梁国栋周国林李蕾付士红金奇张海林黄文丽侯云德; 文献传递

我国分离的甲病毒YN87448株基因组序列的初步分析被引量：26: 1998年; 我国分离的甲病毒ＹＮ８７４４８株基因组序列的初步分析周国林梁国栋李蕾付士红金奇张海林黄文丽侯云德作者单位：１０００５２北京中国预防医学科学院病毒基因工程国家重点实验室（周国林梁国栋李蕾付士红金奇侯云德）；云南省流行病防治研究所（张海林黄文丽）。１９９...; 周国林梁国栋李蕾付士红付士红张海林金奇侯云德; 关键词：甲病毒基因组序列

中国分离的甲属病毒YN87448毒株非结构区基因的核苷酸序列测定及分析被引量：21: 1999年; 目的　研究我国首例从发热病人血清中分离的YN87448病毒的分子致病基础。方法　甲属病毒基因序列保守区设计引物,用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)方法扩增,再将扩增片段克隆到pGEMT载体。测定YN87448毒株非结构基因序列。结果　YN87448病毒非结构区基因序列为7613个核苷酸(不包括5′端帽子结构),编码非结构蛋白1(nsP1),非结构蛋白2(nsP2),非结构蛋白3(nsP3),非结构蛋白4(nsP4);有一个起始密码子(ATG)位于第60位碱基;含有2个终止密码子(TGA),分别位于基因组nsP3基因和nsP4基因的末端。YN87448病毒非结构区基因与辛德毕斯病毒家族中唯一能致成年小鼠死亡的S.A.AR86株相应基因的核苷酸序列同源性为988%,但YN87448毒株不致成年小鼠死亡。与S.A.AR86株相比,基因结构上有三点明显差异:YN87448毒株在nsP3区位于基因组5256bp5309bp含54个核苷酸的插入;位于基因组5603bp处3个核苷酸(AGT)的缺失;在nsP3和nsP4之间有乳白突变终止密码子(TGA)。此序列已输入GeneBank,序列号为AF103734。结论　YN87448为一株新的辛德毕斯病毒株。; 周国林梁国栋李蕾付士红李福胜金奇张海林黄文丽侯云德; 关键词：甲病毒属分子克隆聚合酶链反应碱基序列

重组腺病毒介导的白细胞介素-12(IL-12)在肝癌细胞中的表达被引量：1: 1999年; 利用腺病毒表达系统在肝癌细胞中成功地表达了有生物活性的白细胞介素－１２（ＩＬ－１２）。ＩＬ－１２的Ｐ３５和Ｐ４０ｃＤＮＡ分别克隆到腺病毒载体ｐＡＣＣＭＶｐＬｐＡ，构建ｐＡＣ／Ｐ３５和ｐＡＣ／Ｐ４０表达质粒。与腺病毒重组质粒ｐＪＭ１７共转染２９３细胞，通过基因重组产生ＩＬ－１２Ｐ３５和Ｐ４０重组腺病毒。用重组腺病毒感染肝癌细胞株ＨｅｐＧ２和ＳＭＭＣ７７２１，经ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎ检测证明，在这两株细胞中均有ＩＬ－１２的表达，并且经ＩＦＮ－γ诱生法检测表明，在ＨｅｐＧ２和ＳＭＭＣ７７２１细胞中表达的ＩＬ－１２具有诱导产生ＩＦＮ－γ的生物学活性。本实验为研究ＩＬ－１２对肝癌的基因治疗奠定了基础。; 王自力梁国栋付士红周国林刘礼初陈飞施侣元侯云德; 关键词：白细胞介素12 肝癌腺病毒

我国分离的两株病毒为重组甲病毒被引量：24: 2001年; 目的　明确我国分离的XJ 90 2 6 0和XJ 910 0 6病毒的分类地位、种系发生和遗传型。方法　特异引物逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)扩增两株病毒的NSP4、E1基因区和 3′端非编码区 ,测序 ,进行核苷酸序列同源性比较和 3′端非编码区核苷酸序列分析 ,并结合同属其他病毒这些基因区的核苷酸序列进行种系进化分析。结果　两株病毒的核苷酸序列同源性为 10 0 % ,与西方马脑炎病毒的核种酸序列同源性最高 ,具有西方马脑炎病毒 3′端非编码区结构特征 ,其NSP4基因区与东方马脑炎病毒同源 ,E1基因区与辛德毕斯病毒同源 ,两株病毒均位于西方马脑炎病毒B组 ,与西方马脑炎病毒俄罗斯分离株进化关系最近。结论　我国分离的XJ 90 2 6 0和 910 0 6病毒属于西方马脑炎病毒同一遗传型 ,均为重组甲病毒。; 何海怀吕新军杨益良付士红周国林张桂筠陈向伟梁国栋金奇侯云德; 关键词：甲病毒属

我国分离的甲病毒YN87448毒株全部结构区基因核苷酸的序列测定及分析被引量：19: 1999年; ＹＮ８７４４８毒株１９８６年分离自云南傣族５２岁女发热病人的血液标本，曾用血清学方法鉴定为披膜病毒科甲病毒属。用我们创立的单引物差异ＲＴ－ＰＣＲ方法及简并引物ＲＴ－ＰＣＲ法均已证明：该病毒为甲病毒属的辛德毕斯样病毒（Ｓｉｎｄｂｉｓ－ｌｉｋｅｖｉｒｕｓ）。本研究从甲病毒属的病毒基因序列的共同保守区，设计４对引物。用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增，再将扩增片段分别连结克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ载体。通过对４个克隆的测序完成了对ＹＮ８７４４８毒株的全部结构区基因序列的测定，结果表明：（１）ＹＮ８７４４８病毒的全部结构区基因序列长度为４０５９个核苷酸（不包括多聚腺苷酸尾）；（２）ＹＮ８７４４８病毒的全部结构区基因与辛德毕斯病毒家族中毒力最强的、唯一能致成年小鼠１００％死亡的、南非分离的辛德毕斯样病毒Ｓ Ａ ＡＲ８６株相应基因的核苷酸序列同源性为９９％，但ＹＮ８７４４８毒株不致成年小鼠死亡；（３）二者基因结构上有一点大的差异是，ＹＮ８７４４８病毒位于基因组８６４１ｂｐ处的结构区基因Ｅ２和Ｅ３之间多出３个核苷酸（ＡＡＡ）；（４）与其它甲属病毒的进化树比较来看?; 周国林梁国栋李蕾付士红李福胜金奇张海林黄文丽侯云德; 关键词：克隆 RT-PCR 核苷酸

应用单引物差异RT-PCR法鉴定我国分离的甲病毒(YN87448病毒)被引量：1: 2000年; YN87448 virus strain was isolated from a fevered female patient (52 years old ) in Yunnan Province in 1986, and was identified as a member of Alphavirus using serological method. One primer was designed from common hairpin conserved region of Alphavirus. Two fragments were amplified by single primer differential RT PCR, and they were cloned into pGEM T vector. Sequences were determined, and then analyzed by Software and GenBank. Results showed that the 1118pb long fragment was highly homologous to the sequence of Sindbis like virus S.A.A.R86. The homogeneity of the 1118bp fragment between YN87448 virus strain and S.A.A.R86 virus strain was 98%. Single primer differential RT PCR is a useful method with simple, economic, and practical value for Alphavirus identification.; 周国林梁国栋付士红何海怀金奇张海林黄文丽侯云德; 关键词：核苷酸序列

辛德毕斯病毒毒株全基因组序列及其克隆方法: 一种辛德毕斯病毒毒株全基因组序列及其克隆方法,该克隆方法将全基因分15片段,用RT－PCR方法扩增相应cDNA,连入pGEM－T载体,利用通用引物测序,在病毒基因序列扩增引物设计上选择甲病毒保守区域的核苷酸序列设计引物,...; 梁国栋李蕾周国林付士红金奇侯云德; 文献传递

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