孙丽萍
- 作品数：12 被引量：44H指数：3
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- 人RIP2基因启动子绿色荧光蛋白表达载体的构建与鉴定被引量：1
- 2010年
- 目的:构建人RIP2基因启动子的绿色荧光蛋白表达载体。方法:根据特定限制性内切酶位点,以人基因组DNA为模板,PCR扩增含人RIP2基因启动子不同长度2段序列,构建含人RIP2基因启动子驱动的绿色荧光蛋白载体pEGFP-C2-RIP2(750 bp)wt、pEGFP-C2-RIP2(941 bp)wt,用VspⅠ和NheⅠ双酶切鉴定重组质粒,进行DNA序列分析,重组质粒经阳离子聚合物JetPeiTM介导转染HEK293细胞48 h后观察。结果:酶切鉴定和序列测定证实目的基因已插入重组质粒;细胞转染结果表明,重组质粒转染HEK293细胞均能表达绿色荧光,其中构建的pEGFP-C2-RIP2(750 bp)wt重组质粒绿色荧光表达强于pEGFP-C2-RIP2(941 bp)wt。结论:成功构建2段不同长度的人RIP2基因启动子绿色荧光蛋白表达载体。
- 蒋宇胡巢凤曾琪孙丽萍
- 关键词：绿色荧光蛋白基因表达
- NF-κB结合位点在NOD2基因调控中的作用
- 2008年
- 目的探讨NF-κB结合位点在NOD2基因调控中的作用。方法以人基因组DNA为模板，PCR扩增含有NF-κB结合位点的人NOD2基因启动子序列，以切除启动子的pEGFP-N3作为框架结构，将这段序列进行酶切并定向克隆人表达载体pEGFP-N3中，构建含有NF-κB结合位点的人NOD2基因启动子驱动的绿色荧光蛋白（GFP）载体，将构建的重组质粒经脂质体LipofectAMINE^TM 2000介导瞬时转染HeLa细胞，在倒置荧光显微镜下观察其能否在NOD2基因启动子的调控下表达报告基因GFP。用突变试剂盒将重组质粒pEGFP-N3-NOD2wt中的NF-κB结合位点缺失突变，将构建的突变重组质粒mpEGFP-N3-NOD2瞬时转染HeLa细胞，观察绿色荧光蛋白的表达情况。结果pEGFP-N3-NOD2wt和mpEGFP-N3-NOD2经酶切鉴定和序列测定证实重组质粒构建成功，并且NF-κB结合位点突变成功。细胞转染结果表明，构建的重组质粒pEGFP-N3-NOD2wt转染HeLa细胞，在倒置荧光显微镜下能看到绿色荧光，而突变质粒mpEGFP-N3-NOD2荧光强度明显减弱，与未转染质粒相近。结论成功构建了含有NF-κB结合位点的人NOD2基因启动子的重组质粒和含有NF-κB结合位点缺失突变的重组质粒；NF-κB结合位点突变重组质粒在HeLa细胞中绿色荧光表达明显减弱，说明NF-κB结合位点在NOD2基因调控中发挥了正调节作用；为进一步研究NOD2基因表达及调控机制奠定了良好的基础。
- 孙丽萍胡巢凤张吉凯
- 关键词：基因调控缺失突变
- 人NOD8基因启动子绿色荧光蛋白表达载体的构建与鉴定
- 2009年
- 目的:构建人NOD8基因启动子的绿色荧光蛋白表达载体。方法:用特定的限制性内切酶位点,以人基因组DNA为模板,PCR扩增含有人NOD8基因启动子不同长度2段序列,并进行酶切以切除启动子的pEGFP-C2作框架结构,插入表达载体pEGFP-C2中,构建含有人NOD8基因启动子驱动的绿色荧光蛋白载体pEGFP-C2-NOD8(520 bp)、pEGFP-C2-NOD8(760 bp),用VspⅠ和NheⅠ双酶切和PCR鉴定重组质粒,再将重组质粒进行DNA序列分析。构建的重组质粒经脂质体(lipofectam ine)TM2000介导转染HEK293、K562和HeLa细胞,转染48 h后在倒置荧光显微镜下观察。结果:pEGFP-C2-NOD8(520 bp)、pEGFP-C2-NOD8(760 bp)分别经酶切鉴定和序列测定证实目的基因已插入重组质粒;细胞转染结果表明,构建的2段重组质粒转染HEK293、K562及HeLa细胞均能表达绿色荧光,其中构建的pEGFP-C2-NOD8(760 bp)重组质粒绿色荧光表达强于pEGFP-C2-NOD8(520 bp)。结论:成功构建2段不同长度的人NOD8基因启动子绿色荧光蛋白表达载体。
- 曾琪胡巢凤孙丽萍陆大祥
- 关键词：绿色荧光蛋白基因表达
- 人参茎叶皂苷对小鼠脂肪肝的作用及机制研究被引量：25
- 2009年
- 目的探讨人参茎叶皂苷对小鼠脂肪肝的作用及机制。方法小鼠分为正常对照组(NC)和模型组。喂高脂饲料复制脂肪肝模型,12 wk后证实造模成功后,模型组小鼠随机分为高脂组(HF);正常饮食治疗组(NT);人参茎叶皂苷小剂量组(GSL1);人参茎叶皂苷大剂量组(GSL2)。除HF组饲高脂饲料外,其余各组饲基础饲料。GSL1组给予GSL50 mg.kg-1.d-1灌胃,GSL2组给予GSL 100 mg.kg-1.d-1灌胃,其余各组以同等容积蒸馏水灌胃。灌胃2wk后处死所有动物,检测血清TC、TG、HDL-C、LDL-C、ALT含量;并观察肝指数和肝组织TC、TG、SOD、MDA含量,肝脏病理形态学改变及氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)、细胞色素P450 2E1(CYP2E1)的表达。结果GSL2组可以明显降低肝指数、血脂、肝脂和MDA含量,增加SOD活性,改善小鼠肝脏病理形态学改变,增加肝组织PPARαmRNA水平、降低CYP2E1 mRNA水平。NT组脂肪肝有一定的改善作用,但效果不理想;GSL1组各项指标与NT组相比差异无显著性。结论人参茎叶皂苷可能通过增加肝组织PPARαmRNA表达,降低血脂和肝脂水平;并且通过降低CYP2E1 mRNA表达,抑制脂质过氧化反应,发挥治疗脂肪肝的作用。
- 胡巢凤陆大祥孙丽萍覃莉
- 关键词：人参茎叶皂苷脂肪肝小鼠
- P53结合位点在NOD8启动子基因克隆调节及其对NOD8基因中的作用被引量：2
- 2010年
- 为探讨P53结合位点在NOD8基因调控中的作用,采用PCR技术从人基因组DNA中扩增含有P53结合位点人NOD8基因启动子序列,并定向克隆入已切除启动子的表达载体pEGFP-C2中,构建含有人P53结合位点的人NOD8基因启动子驱动的绿色荧光蛋白载体pEGFP-C2-NOD8;并构建P53结合位点缺失突变载体pEGFP-C2-NOD8,将构建的质粒经阳离子聚合物JetPeiTM介导瞬时转染HEK293细胞,在倒置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达。用不同浓度的p53抑制剂PFT-α(pifithrinalpha,PFT-α)预处理HEK293细胞24 h后,将重组质粒pEGFP-C2-NOD8wt瞬时转染HEK293细胞,观察绿色荧光蛋白的表达。结果表明pEGFP-C2-NOD8wt和mpEGFP-C2-NOD8经酶切鉴定和序列测定证实重组质粒构建成功。细胞转染后,缺失P53结合位点的NOD8启动子驱动的绿色荧光蛋白荧光强度明显低于含P53结合位点的重组质粒;且不同浓度PFT-α预处理HEK293细胞后重组质粒绿色荧光蛋白表达下降呈剂量依赖性。结论是P53结合位点突变重组质粒在HEK293细胞中其绿色荧光表达明显减弱;PFT-α可以通过抑制P53表达使重组质粒pEGFP-C2-NOD8wt在细胞中绿色荧光表达呈剂量依赖性减弱。说明P53结合位点在NOD8基因调控中发挥了正调节作用。
- 曾琪蒋宇胡巢凤孙丽萍陆大祥
- 关键词：基因调控缺失突变PFT-Α
- FPC与鞘脂激活蛋白原相互作用调节细胞增殖和凋亡
- 孙丽萍
- 关键词：蛋白相互作用NF-ΚB信号通路
- 人NOD2基因启动子的绿色荧光蛋白表达载体的构建被引量：3
- 2008年
- 人NOD2基因启动子的绿色荧光蛋白表达载体的构建。以人基因组DNA为模板,PCR扩增含有人NOD2基因启动子不同长度的4段序列,利用特定的限制性内切酶位点,以切除启动子的pEGFP-N3作为框架结构,将这4个序列片段进行酶切并插入表达载体pEGFP-N3中,用Vsp I和Pst I双酶切和PCR鉴定重组质粒,再将重组质粒进行DNA序列分析。构建的重组质粒经脂质体LipofectamineTM2000介导转染HTK293T细胞,转染24 h后加入TNF-α持续刺激细胞24 h或不加TNF-α刺激,在倒置荧光显微镜下观察其能否在NOD2基因启动子的调控下表达报告基因绿色荧光蛋白(green fluores-cent proteins,GFP)。结果:pEGFP-N3-NOD2(617 bp)、pEGFP-N3-NOD2(747 bp)、pEGFP-N3-NOD2(1 136 bp)、pEG-FP-N3-NOD2(1 387 bp)分别经酶切鉴定和序列测定证实目的基因已插入重组质粒;细胞转染结果表明,构建的4段重组质粒pEGFP-N3-NOD2(617 bp)、pEGFP-N3-NOD2(747 bp)、pEGFP-N3-NOD2(1 136 bp)、pEGFP-N3-NOD2(1 387 bp)转染的HTK293T均能表达绿色荧光,其中构建pEGFP-N3-NOD2(1 387 bp)重组质粒经TNF-α持续刺后激绿色荧光表达最强。4段不同长度的人NOD2基因启动子绿色荧光蛋白表达载体成功构建,这为进一步研究NOD2基因表达及调控机制奠定了良好的基础。
- 孙丽萍胡巢凤周羽竝
- 关键词：基因表达
- 活性氧及能量代谢障碍在体外培养肝细胞脂肪变性中的作用被引量：5
- 2008年
- 目的:探讨细胞活性氧(ROS)及线粒体能量代谢障碍在乙醇和小牛血清诱导的体外培养肝细胞脂肪变性中的作用。方法:将人肝细胞株L02进行细胞培养,加入不同浓度的乙醇,采用MTT法确定乙醇作用的最佳浓度;用2%乙醇和50%小牛血清(A+CS)诱导L02细胞,以油红O染色观察细胞内脂滴形成状况,并检测细胞TG的含量;用流式细胞仪(FCM)测定细胞活性氧及线粒体膜电位的改变;采用反相高效液相色谱分析法测定细胞ATP含量。结果:2%乙醇和50%小牛血清作用36h,肝细胞内有典型的脂滴形成,与对照组相比,细胞内TG含量及ROS水平明显增加;而细胞线粒体膜电位及肝细胞ATP的含量则显著降低(P<0.01)。结论:在乙醇和小牛血清诱导肝细胞脂肪变过程中,细胞ROS的增加及线粒体能量代谢障碍可能发挥了重要的作用。
- 胡巢凤陆大祥孙丽萍
- 关键词：肝细胞脂肪变性活性氧线粒体膜电位能量代谢
- NF-κB结合位点突变对人NOD2基因启动子调控的影响被引量：1
- 2010年
- 探讨NF-κB结合位点突变对人NOD2基因启动子调控的影响。采用PCR技术从人基因组DNA中扩增含有NF-κB结合位点的人NOD2基因启动子序列,并定向克隆入已切除启动子的表达载体pEGFP-N3中,构建含有NF-κB结合位点的人NOD2基因启动子驱动的绿色荧光蛋白(green fluorescent proteins,GFP)载体pEGFP-N3-NOD2wt,并构建NF-κB结合位点2个碱基缺失突变的载体,将构建的重组质粒瞬时转染HEK293细胞,在倒置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达情况。结果显示重组质粒转染HEK293细胞后,在倒置荧光显微镜下均能看到绿色荧光,其中pEGFP-N3-NOD2wt重组质粒在HEK293细胞中荧光表达较强,而突变质粒mpEGFP-N3-NOD2荧光强度明显减弱。说明NF-κB结合位点是驱动NOD2基因转录的重要元件,且在NOD2基因启动子的调控中发挥了正调节作用,为进一步研究NOD2基因表达及调控机制提供了新的思路。
- 孙丽萍胡巢凤
- 关键词：缺失突变
- NF-κB结合位点在NOD2基因调控中的作用
- 目的 构建含有NF-κB结合位点的人NOD2基因启动子驱动的绿色荧光蛋白表达载体和缺失NF-κB结合位点的人NOD2基因启动子驱动的绿色荧光蛋白表达载体,观察其在真核细胞中表达情况,探讨NF-κB结合位点在NOD2基因调...
- 孙丽萍
- 关键词：基因调控缺失突变
- 文献传递
