康立新
- 作品数：11 被引量：20H指数：3
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- 通过基因剂量效应提高植物酸酶基因在毕赤酵母中表达
- 农作物中磷的主要贮存形式是植酸,单胃动物不能产生水解植酸的植酸酶。因此在单胃动物的饲料中添加植酸酶可以将植酸磷降解为可利用磷,既可减少磷的添加量,又可以消除植酸的抗营养作用,提高蛋白质、微量元素的利用率,有重要的应用价
- 黄光瑞田丽春张桂敏马向东康立新马立新
- 文献传递
- 酶法制备甘露低聚糖被引量：9
- 2012年
- 利用枯草芽孢杆菌产生的碱性甘露聚糖酶,以魔芋、槐豆胶、瓜尔胶与田菁胶为原料,制备甘露低聚糖。比较了酶对底物水解反应动力学,对低聚糖制备过程中的水解液进行了还原糖测定,并通过质谱对最终酶解液组分进行分析。结果表明:魔芋与槐豆胶为甘露聚糖酶的最适水解底物,水解8h后,还原糖得率稳定,可作为甘露低聚糖生产的指导依据。酶解24h后,魔芋、槐豆胶、瓜尔豆胶及田菁胶的主要产物分别为二糖至九糖、五糖至十糖、二糖至十糖和二糖至十糖。利用酶法生产甘露低聚糖的方法具有水解过程简单、产物聚合度低、纯度高的优点。
- 康立新周玉玲马立新
- 关键词：甘露聚糖酶解甘露低聚糖质谱
- β-甘露聚糖酶异源表达及甘露寡糖制备研究被引量：2
- 2016年
- 以产β-甘露聚糖酶(MAN)的枯草芽孢杆菌HD145为目的菌株,PCR扩增MAN基因片段,克隆到p HBM905A载体并转化至毕赤酵母,重组子利用甲醇进行诱导。纯化的MAN酶解槐豆胶与瓜尔豆胶,质谱检测水解产物。SDS-PAGE结果表明,MAN基因实现了表达,摇瓶酶活性为3 200 U/m L,酶最适温度与pH分别为55℃与6.0,pH 4~7时稳定性较好,在40、50、60℃的半衰期分别为165、105、42 min,Zn^(2+)、Ag^+、Co^(2+)对酶活性存在一定的抑制。槐豆胶与瓜尔胶经MAN酶解后得到二糖至十糖的寡糖。
- 尹梦雅康立新
- 关键词：甘露聚糖酶克隆甘露寡糖
- 裂解多糖单加氧酶在毕赤酵母中的异源表达被引量：3
- 2019年
- 裂解多糖单加氧酶(lysate polysaccharide monooxygenase,LPMO)是一类含铜氧化酶,在还原型辅因子存在下可氧化裂解纤维素,对纤维素的降解起重要作用.优化并合成黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)lpmo基因,构建pPICZαA-Pclpmo表达载体,电转毕赤酵母GS115实现了分泌表达,重组蛋白表达量为450mg/L.重组PcPLMO对微晶纤维素催化活性为14U/mL,对碱预处理的秸秆纤维活性较高,为24U/mL.PcPLMO具有较好的热稳定性,分别在80、90、100℃保温60min,残留活性为80%、62%与48%.经EndoH脱糖基化分析,PcLPMO发生了高度糖基化修饰,从而促进了酶的高温热稳定.相关结果可为LPMO协同纤维素酶降解纤维素的应用提供参考.
- 姚昌阳谢兴欢蒋思婧马立新康立新
- 关键词：异源表达热稳定糖基化
- 壳聚糖酶与脱乙酰酶的重组表达及性质分析
- 壳聚糖酶主要来源于细菌与真菌。壳聚糖酶在天然宿主中不能持续表达,需要一定的诱导底物;并且宿主分泌量低,限制了其在工业上的大规模应用。本实验室从自然界中筛选到一株产壳聚糖酶的枯草芽孢杆菌HD145,研究发现在甘露多糖条件下...
- 康立新马立新
- 关键词：壳聚糖酶基因重组基因表达酶学性质
- 文献传递
- T7核酸内切酶Ⅰ的基因合成、克隆与表达
- 根据已报道的T7核酸内切酶Ⅰ序列设计引物,利用PCR合成与DpnⅠ点突变较正的方法,获得全长450bp的T7核酸内切酶Ⅰ基因。将该基因克隆到pBAD载体上,转化E.coli XL10-GOLD菌株,以L-阿拉伯糖为诱导物...
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- 文献传递
- 大肠杆菌K12植酸酶热稳定性突变体在毕赤酵母中的高效表达和性质研究(英文)
- 2013年
- 植酸酶广泛用作工业饲料添加剂。通过基因优化和两步法基因合成了E.coli K12植酸酶的耐热突变体AppA NR,将其克隆到毕赤酵母表达载体pHBM905A上,然后将构建好的质粒转入毕赤酵母GS115中表达。经过筛选得到了一株高表达毕赤酵母工程菌GS115/AppA NR,产量达到10mg·mL-1,活力为980U·mL-1。该重组酶在95℃加热10min,仍保留90%的活力,相比野生型植酸酶,更能抵抗高温。同时,该酶具有较宽的pH值范围和抗胃酶水解的能力。所有这些性质的改善表明该重组酶比较适合用作工业饲料添加剂。
- 周玉玲邹由付玲江维战飞翔康立新马向东马立新
- 关键词：基因合成酶特性
- 一株产环糊精葡萄糖基转移酶的短小芽孢杆菌的选育,产酶条件及酶学特性研究
- 从土壤分离物中筛选到一株环糊精葡萄糖基转移酶(cyclodextrin glucanotransferase, CGTase)产生菌CGT01。16SrDNA序列分析表明该菌与短小芽孢杆菌(Bacillus pumill...
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- 文献传递
- 毕赤酵母GS115/phyA产植酸酶诱导条件研究被引量：4
- 2005年
- 康立新马立新张桂敏
- 关键词：植酸酶毕赤酵母发酵条件
- 壳聚糖酶的克隆表达与壳寡糖的制备分析被引量：2
- 2012年
- 目的:克隆壳聚糖酶基因于大肠杆菌中实现高表达,制备壳寡糖。方法:以枯草芽孢杆菌总DNA为模板扩增壳聚糖酶基因(CSN),克隆至载体pET23a(+)上,转化菌株BL21(DE3)。重组子经0.5 mmol/L IPTG诱导后,SDS-PAGE和质谱检测与鉴定重组酶。酶纯化后水解壳聚糖,薄层色谱分析其水解产物。结果:质谱证明壳聚糖酶(31.5kDa)成功表达,表达量占菌体总蛋白的45%左右。纯化后重组酶浓度为900 mg/L,纯度95%、回收率85%,酶活力为10 000 U/mg。壳聚糖降解产物为壳二糖至壳四糖。结论:原核表达载体pET23a(+)-CSN构建正确,壳聚糖酶表达量与活性高,适用于水解壳聚糖制备壳寡糖。
- 康立新周玉玲马立新
- 关键词：壳聚糖酶IPTG重组蛋白壳寡糖
