张俊彦
- 作品数：58 被引量：487H指数：12
- 供职机构：浙江省疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：浙江省医药卫生科学研究基金浙江省自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 食品中志贺活菌叠氮溴乙锭实时荧光聚合酶链反应技术研究被引量：3
- 2016年
- 目的利用叠氮溴乙锭（ethidium monoazide bromide,EMA）实时荧光聚合酶链反应（PCR）技术,建立一种简便、快速、特异、灵敏的在食品中检测志贺活菌的方法。方法根据志贺菌ipa H基因保守序列设计特异性引物和探针。用不同EMA浓度、不同光照次数优化样品EMA前处理条件。用已知菌验证志贺活菌检测的敏感性和志贺死菌检测的抑制性。用31株志贺菌、26株单增李斯特菌、24株沙门菌、25株副溶血弧菌、11株阪崎肠杆菌、10株致病性大肠埃希菌和1株大肠埃希菌验证方法的特异性和稳定性。同时用本研究方法和常规分离培养法,对30件模拟样品进行实样验证。结果志贺活菌EMA实时荧光PCR方法的循环阈值（Ct）=32.10~3.19×log（菌量）（R2=0.994）。最低检测浓度为2.20 CFU/反应。对死菌DNA抑制效率≥99.97%。31株志贺菌Ct值最低为15.04,最高为26.54,而97株非志贺菌的Ct值均〉35或无Ct值（呈一条直线）。重复试验Ct值变异系数〈3。30件模拟样品采用本研究方法和常规分离培养法的检测结果一致,但采用EMA实时荧光PCR方法耗时不超过7.5 h,而常规分离培养方法则需要3~5 d。结论 EMA实时荧光PCR技术是一种快速简便、特异性强、灵敏度高、仅检测志贺活菌的方法,建议在食品检测中推广应用。
- 梅玲玲徐昌平杨勇占利陈鸿鹄张云怡张俊彦陈建才程苏云
- 关键词：食品志贺菌实时荧光PCR
- 检测志贺菌的实时荧光PCR试剂盒及检测方法
- 本发明提供了一种检测志贺菌(Shigella)的实时荧光PCR试剂盒及其检测方法。所述试剂盒主要包括特异性引物和荧光探针、PCR缓冲液、脱氧三磷酸核苷混合物和DNA聚合酶，所述特异性引物和荧光探针序列如下：上游引物：5′...
- 梅玲玲朱敏张俊彦程苏云占利
- 文献传递
- 用分值计算法对选择性培养基质量进行比较
- 2007年
- 朱敏梅玲玲张俊彦姜德霞童贵忠杨更发
- 关键词：培养基质量肠道致病菌选择性培养基
- 浙江省209株沙门菌PFGE指纹图谱研究被引量：13
- 2009年
- 目的：建立浙江省沙门菌PFGE指纹图谱资料库,为查明沙门菌食源性疾病污染源,确定各病例之间的病原学关系,及时处理大范围内呈散发特征的沙门菌事件提供科学依据。方法：收集、提取全省历年来在各类食品和腹泻病人中分离的209株沙门菌的DNA,用限制性内切酶Xbal切割,脉冲场凝胶电泳（PFGE）技术建立PFGE指纹图谱,用BioNu-merics V5.1软件UPGMA方法进行聚类分析。结果：209株沙门菌分成10个基因型别160种PFGE基因指纹图谱。其中67株德尔卑沙门菌可分为6个型别35种PFGE指纹图谱,主要集中在1个PFGE指纹图谱型别中。14株肠炎沙门菌分属3个型别8种PFGE指纹图谱,相似系数在0.800-1.000之间。鼠伤寒沙门菌间的PFGE指纹图谱差异较大。结论：PFGE指纹图谱与血清学型别无相关性,该方法在研究沙门菌分子流行病学、确定各病例之间的病原学关系效果良好。
- 梅玲玲罗芸叶菊莲朱敏张俊彦潘军航龚璞杨婷婷
- 关键词：沙门菌脉冲凝胶电泳
- 基于霍乱毒素B亚单位结构功能分析的霍乱弧菌基因分型被引量：1
- 2010年
- 目的:描述和分类自然发生的霍乱毒素B亚单位DNA和蛋白序列的多态性,及时提供潜在有用的霍乱诊断、疫苗研制和流行病学信息。方法:采用生物信息频谱分析平台,同时包括Clustal W,MEGA和PyMOL分析法,对245个霍乱毒素B亚单位DNA和蛋白序列进行结构和功能及基因分型特性的研究。结果:所分析的霍乱毒素B亚单位的103个氨基酸区域有共同的信息频谱特征,其主峰特征为F(0.3333,19),显示了霍乱菌株的霍乱毒素B亚单位的共同作用模式。霍乱毒素B亚单位蛋白的T68I氨基酸残基关键变异明显增加了F(0.3333)的特征峰高,可能对"人类"作用的模式有较大影响。经过系统聚类分析,发现了19个霍乱毒素B亚单位DNA序列多态。基于以上结果和流行病学资料,提出了19个霍乱弧菌的霍乱毒素B亚单位基因型。霍乱弧菌古典生物型参考株(569B)的霍乱毒素B亚单位基因型为1a(CTBgenotype 1a)。霍乱弧菌埃尔托生物型参考株(N16961)和霍乱弧菌O139血清群的参考株(4260B)的霍乱毒素B亚单位基因型都为2a(CTB genotype 2a)。结论:以上内容可对霍乱毒素B亚单位DNA和蛋白序列的多态性提供更好的理解;提供了对霍乱毒素B亚单位分子变异监测的一个技术和方案;可为今后预防和处置霍乱弧菌的感染和流行,进一步扩展了鉴别潜在的免疫、治疗和诊断的分子靶标的可能性。
- 王志刚朱水荣张俊彦阮卫程洁贾红宇包其郁张政
- 关键词：霍乱弧菌霍乱毒素基因型
- 副溶血性弧菌实时重组酶聚合酶扩增检测技术研究
- 目的建立一种快速检测副溶血性弧菌的实时重组酶聚合酶扩增(RPA)方法。方法根据副溶血性弧菌tlh基因保守序列设计筛选引物及探针,建立副溶血性弧菌的实时重组酶聚合酶扩增方法。通过检测不同浓度副溶血性弧菌标准株DNA模板评价...
- 占利徐昌平张云怡陈鸿鹄张政陈建才张俊彦梅玲玲
- 霍乱毒素亚单位B的基因分型和蛋白结构功能分析预测
- @@霍乱毒素是引起霍乱腹泻的主要毒性物质，由A、B两个亚单位组成。B亚单位(CTB)的主要功能是通过与哺乳动物小肠上皮细胞上的单唾液酸神经节苷脂GM1结合而使得A亚单位进入细胞，由5个相同的11.6 kDa的多肽组成。C...
- 王志刚朱水荣张俊彦
- 关键词：基因分型蛋白结构功能分析
- 文献传递
- 两种方法同步检测禽样品沙门菌结果分析被引量：2
- 2011年
- 目的:应用LAMP(Loop-Mediated Isothermal Amplification)快诊技术及国标(GB)传统分离方法对杭州市不同来源75份新鲜禽(鸡)样品进行沙门菌检测,并对结果进行分析。方法:在应用GB法对禽样品进行传统分离、生化及血清学鉴定的同时,利用LAMP快诊技术同步检测沙门菌属invA基因及O9群抗原因子基因,并对两种方法检出率及效率进行比较。结果:GB法检出3份阳性,阳性率4.00%;LAMP快诊检测阳性结果因不同增菌液其检测结果不同,检测阳性率最高达17.33%。结论:禽样品可能受沙门菌污染量较低,以致GB法检出率相对较低,但LAMP技术的检测敏感性明显偏高,两种方法同步应用能全面、合理、科学地反映食品中目标菌的污染程度,建议基层实验人员尝试使用。
- 朱水荣潘军航朱敏张俊彦龚璞梅玲玲
- 关键词：环介导等温扩增技术沙门菌
- 食物中毒暴发疫情主要病毒和细菌的快速检测分型
- 张严峻丁钢强张弘卢亦愚张磊程苏云金大智潘军杭茅海燕龚黎明梅玲玲严菊英李辉程洁徐昌平张俊彦
- 该研究基于金黄色葡萄球菌肠毒素基因的PCR检测分型技术的建立和PFGE指纹图谱的使用，可以快速有效的对金黄色葡萄球菌污染引起的食物中毒事件进行检测和溯源。基于实时荧光定量PCR及多重实时荧光定量PCR等分子生物学检测技术...
- 关键词：
- 关键词：食物中毒检测试剂盒
- 金黄色葡萄球食品分离株肠毒素基因型分析被引量：5
- 2010年
- 目的:检测金黄色葡萄球菌食品分离株肠毒素基因的阳性率和型别,比较生牛奶分离株和其它食品分离株肠毒素基因阳性率和分布状况。方法:采集生牛奶和其它食品标本,用国标方法分离鉴定金黄色葡萄球菌,VITEK32生化验证。应用PCR检测肠毒素,比较生牛奶分离株和其它食品分离株肠毒素基因阳性率,分析不同型别肠毒素基因分布特征。结果:金黄色葡萄球菌食品分离株肠毒素基因阳性率为67.5%,生牛奶分离株和其它食物分离株肠毒素基因阳性率没有显著差异,生牛奶分离株的新型肠毒素基因(SEG-SE J)阳性率显著高于其它食品分离株的。结论:金黄色葡萄球菌食品分离株肠毒素基因阳性率较高,生牛奶分离株肠毒素基因型与其它食品分离株肠毒素基因型的分布不同。
- 张俊彦张严峻朱敏梅玲玲潘军航龚璞
- 关键词：金黄色葡萄球菌肠毒素基因型
