徐佳
- 作品数：14 被引量：18H指数：3
- 供职机构：东北农业大学更多>>
- 发文基金：“十一五”国家科技支撑计划国家自然科学基金家畜疫病病原生物学国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生政治法律生物学更多>>
- TLR4/TLR2在感染旋毛虫小鼠中的变化
- Balb/c小鼠经口感染旋毛虫肌幼虫,感染剂量为500蚴/只,感染后0d、4d、7d、14d、21d和28d对小鼠体内Toll样受体和相关细胞因子进行检测。根据GenBank中登录的TLR4、TLR2和管家基因(β：ac...
- 路义鑫韩彩霞李巍李晓云徐佳唐颖刘畅宋铭忻
- 关键词：兽医学旋毛虫流式细胞术巨噬细胞免疫反应
- 旋毛虫重组HSP70对小鼠巨噬细胞TLR2/4表达的影响
- 2014年
- 观察旋毛虫重组热休克蛋白HSP70(rTs-HSP70)对体外培养小鼠巨噬细胞Toll样受体TLR2/4表达的影响。体外常规培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7,分别加入不同浓度rTs-HSP70刺激培养24 h,半定量PCR方法检测培养细胞TLR2/4 mRNA表达,流式细胞仪检测表面标志分子CD80和CD86表达。平行设立不加刺激物阴性对照组,细菌脂多糖LPS阳性对照组;同时试验比较5μg·mL-1浓度的HSP70组和HSP70+LPS组(HSP70预刺激后再加入LPS刺激培养12 h)RAW264.7细胞TLR2/4 mRNA表达差异。结果表明,低浓度rTs-HSP70与巨噬细胞活化呈正相关,浓度为5μg·mL-1时,TLR2/4表达水平达到峰值(P<0.05),并可刺激巨噬细胞共刺激分子CD80和CD86高表达,随着HSP70浓度升高(>5μg·mL-1)则对巨噬细胞RAW264.7表现为抑制作用;当对RAW264.7进行旋毛虫HSP70预刺激,可引起免疫抑制效应,抑制LPS对巨噬细胞TLR2/4的活化反应。试验可为旋毛虫相关分子免疫调节机制研究及旋毛虫病防治提供参考。
- 李成禹洋徐佳刘畅周兴东李晓云
- 旋毛虫HSP70基因的原核表达及其免疫原性
- 利用RT-PCR方法扩增旋毛虫HSP70基因,将其扩增产物克隆到pEASY-Blunt Simple载体中,经限制性酶切后与pET-28a(+)载体连接,进一步转化至感受态细胞Transetta(DE3)中,用IPTG诱...
- 宋铭忻路义鑫韩彩霞李巍李晓云徐佳王泽
- “一带一路”下国际服务贸易互联互通法律问题研究
- 自汉代以来，“丝绸之路”就对政治经济文化等各方面的交流发挥了重要促进作用，并得到其他国家的一致肯定。当前，WTO存在着成员国数量众多，各成员国之间的利益诉求有冲突等问题，在实践中很难达成让各方都满意的协议。鉴于当前全球化...
- 徐佳
- 关键词：国际服务贸易互联互通法律制度
- 文献传递
- 旋毛虫感染小鼠后TNF-α诱导肺细胞凋亡的观察被引量：1
- 2013年
- 为探究TNF-α在旋毛虫致小鼠肺损伤发生过程中的致病作用及信号传导途径,应用半定量RT-PCR法检测感染前、后不同时期小鼠肺组织中TNF-α及细胞凋亡与抗凋亡基因mRNA的表达量,并应用TUNEL法对肺细胞凋亡形态进行观察。结果显示,旋毛虫感染后第4天,TNF-αmRNA的相对表达量由感染前的0.74上升到1.19,肺细胞凋亡增加,凋亡指数为2.57%;第14天出现峰值1.33,此时凋亡指数为21.42%,肺细胞凋亡明显(P<0.05),35d后表达量逐渐下降至1.11,此时凋亡指数为14.74%。TNFR1、FADD、Caspase8、Caspase3、TRAF2、RIP和NF-κB的相对表达量与TNF-α变化趋势相似。结果表明,TNF-α诱导肺细胞凋亡严重程度与旋毛虫生活史的不同阶段相关。
- 李兴超李巍徐佳刘畅俞昭阳李晓云宋铭忻张唯哲
- 关键词：旋毛虫TNF-Α肺损伤
- 旋毛虫致小鼠心肌损伤的试验
- 2012年
- 本研究旨在对重度感染旋毛虫后小鼠心肌损伤的研究。通过对小鼠接种旋毛虫,1 000条/只,分别于不同时间对血清中心肌损伤标志物H-FABP、CK-MB和cTnT进行动态检测,以及心肌组织病理形态学变化进行观察。结果显示,H-FABP比CK-MB、cTnT敏感性高(P<0.05),出现及达到高峰的时间最早;感染旋毛虫后19d～24d,心肌组织损伤最为严重。H-FABP可用于早期旋毛虫病患者心肌损伤的诊断,具有较高的敏感性和特异性。
- 赵风强韩彩霞路义鑫徐佳张子群谢晓峰宋铭忻
- 关键词：旋毛虫心肌损伤H-FABP
- 感染旋毛虫小鼠腹腔巨噬细胞TLR4及细胞因子的变化被引量：4
- 2014年
- 为研究旋毛虫感染对小鼠腹腔巨噬细胞Toll样受体4(TLR4)及细胞因子的影响,本研究分别取感染前、后不同时期小鼠腹腔巨噬细胞,采用半定量PCR和流式细胞术检测巨噬细胞TLR4的表达量,western blot检测TLR信号传导相关蛋白MyD88和NF-κB相对表达量,并对巨噬细胞培养上清液细胞因子浓度进行测定。结果显示,巨噬细胞TLR4在基因和蛋白水平上表达量变化趋势基本一致,呈双峰状,峰值分别在感染后4 d和21 d:旋毛虫感染初期4 d左右TLR4表达升高,之后降低,14 d左右至最低点,感染后期21 d左右TLR4表达重新升高,然后降低并趋于稳定。MyD88/NF-κB的相对表达量及炎性因子含量变化趋势与巨噬细胞TLR4表达量变化趋势相似。由此表明,小鼠腹腔巨噬细胞TLR4的表达与旋毛虫生活史的不同阶段及抗原密切相关,在旋毛虫不同时期抗原刺激下,经由TLR4/MyD88/NF-κB传导途径活化细胞,继而引起炎性因子分泌发生变化。
- 李晓云徐佳李巍禹洋刘畅俞昭旸宋铭忻
- 关键词：旋毛虫巨噬细胞细胞因子
- 感染旋毛虫小鼠不同时期TLR2/TLR4 mRNA表达量及血清炎性因子的变化
- 2014年
- 目的探讨旋毛虫感染对小鼠不同组织细胞TLR2/TLR4(Toll样受体)表达量及血清炎性因子的影响。方法分别取感染前、后不同时期小鼠心肌、肺及腹腔巨噬细胞,应用半定量PCR方法检测TLR2/TLR4mRNA相对表达量,同时应用ELISA方法对血清相关炎性因子进行检测。结果随着旋毛虫感染时间的变化,TLR4和TLR2在心肌、肺和腹腔巨噬细胞上的表达略有不同,但大致呈双峰状。旋毛虫感染初期4d左右,TLR2/TLR4mRNA表达均有不同程度升高,之后降低,14d左右,心肌与肺TLR升高,巨噬细胞TLR则继续下降,在21d左右,心肌TLR表达量达到最高值,且与对照组差异显著(P<0.05),肺组织TLR呈下降趋势,巨噬细胞TLR表达升高,之后下降并趋于稳定。感染鼠的血清中炎性因子IL-2和NO的表达量显著升高(P<0.05),而TNF-α、IL-10和IL-12的表达量则显著降低(P<0.05),IL-6的表达量变化不明显。结论旋毛虫感染可引起小鼠心肌、肺和巨噬细胞上的Toll样受体TLR2/TLR4表达发生变化,继而调节相关细胞因子分泌也发生变化,这种变化与旋毛虫生活史不同阶段抗原及其引起的宿主免疫反应和组织器官损伤具有一定相关性。
- 徐佳李晓云韩彩霞禹洋刘畅俞昭旸宋铭忻
- 关键词：旋毛虫炎性因子
- 小鼠TLR2的克隆表达及生物学活性分析被引量：1
- 2013年
- 采用RT-PCR方法从小鼠巨噬细胞中扩增Toll样受体2(mTLR2)基因,得到基因全长CDS,经克隆测序正确后构建真核表达质粒pcDNA3.1-mTLR2。重组质粒瞬时转染HEK293T细胞,分别用RT-PCR与免疫荧光检测其表达及细胞定位。利用TLR2激活物pam3csk4刺激转染重组质粒的HEK293T细胞后,用双荧光素酶报告基因系统分析其下游转录因子NF-κB的转录活性。结果显示,mTLR2转染后成功表达并定位于细胞膜,pam3csk4刺激后荧光素酶活性显著高于生理盐水对照组,说明表达的mTLR2具有野生型分子的功能。本研究成功克隆与表达了mTLR2基因且表达产物具有生物学活性,为研究TLR2信号通路及其在抗寄生虫感染中的作用奠定了基础。
- 俞昭旸李巍唐颖李兴超刘畅禹洋徐佳宋铭忻
- 关键词：TOLL样受体2真核表达核转录因子-ΚB
- 旋毛虫HSP70基因的原核表达及其免疫原性被引量：4
- 2012年
- 利用RT-PCR方法扩增旋毛虫HSP70基因,将其扩增产物克隆到pEASY-Blunt Simple载体中,经限制性酶切后与pET-28a(+)载体连接,进一步转化至感受态细胞Transetta(DE3)中,用IPTG诱导表达重组旋毛虫HSP70。以纯化的重组HSP70制备多克隆抗体,并对HSP70进行免疫印迹分析及免疫组织化学染色。结果表明,重组质粒的鉴定和DNA测序均正确;SDS-PAGE和Western-blot分析结果显示,在70ku处获得一目的条带;免疫组织化学染色结果显示,该HSP70具有很好的免疫原性。证实,成功构建了重组表达质粒pET28a-HSP70,为深入研究旋毛虫HSP70的功能奠定了基础。
- 徐佳禹洋唐颖俞昭旸李晓云宋铭忻
- 关键词：旋毛虫热休克蛋白70原核表达
