李腾
- 作品数：16 被引量：13H指数：2
- 供职机构：军事医学科学院国家生物医学分析中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 表皮生长因子效应评价细胞模型的建立
- 2011年
- 为了筛选表皮生长因子(EGF)信号通路的未知调控分子,利用人正常乳腺上皮细胞系MCF10A建立了EGF效应评价模型,包括细胞增殖、迁移以及细胞周期的进程等。结果显示,EGF能有效促进MCF10A细胞的增殖。饥饿同步化后,EGF能促进细胞从G1期进入S期,开始DNA的合成。此外,Transwell实验显示EGF能明显促进MCF10A细胞的迁移。
- 陈亮穆蕊甄诚高彦飞李腾于鸣巩伟丽李爱玲
- 关键词：表皮生长因子细胞周期
- 磷酸酶PPM1G与IKKi相互作用下调IRF的转录活性
- 2011年
- 为了研究磷酸酶PPM1G对IRF信号通路的影响,首先在真核细胞中成功表达了HA-PPM1G蛋白质。应用双荧光报告系统,研究了PPM1G对IRF信号通路的影响。结果显示,过表达PPM1G能够显著抑制IKKi激活的IRF转录活性。进一步免疫共沉淀的实验结果表明,PPM1G和IKKi在细胞内存在相互作用。
- 陈亮穆蕊甄诚高彦飞李腾周杰于鸣巩伟丽张维娜
- 关键词：IRF转录活性
- CUEDC2在细胞有丝分裂期的功能研究
- 细胞的有丝分裂是一个复杂、精巧的调控过程,它使携带遗传信息的染色体一代代地以相同的数目传递下去,通过把染色体平均分配到两个子细胞从而维持了遗传的稳定性。为保证遗传信息的平均分配,每一个姐妹染色体对上的着丝粒都需要与分别来...
- 李腾
- 关键词：CUEDC2染色体不稳定性有丝分裂
- 文献传递
- 干涉UBXN1慢病毒颗粒制备及稳定细胞系的建立
- 2013年
- 构建并鉴定UBXN1-shRNA慢病毒表达载体,以便应用RNAi技术以及慢病毒感染系统建立稳定干涉细胞系并进一步研究UBXN1的功能。将携带不同特异性干涉序列的DNA片段插入PLKO.1载体中构建慢病毒表达载体,并制备慢病毒颗粒。将慢病毒颗粒感染U2OS细胞,建立稳定干涉细胞系,应用real-time PCR和western blot技术分别检测U2OS细胞中UBXN1 mRNA和蛋白质水平的表达差异。重组克隆经酶切证实shRNA正确插入慢病毒载体,DNA测序证实插入的序列正确,western blot检测证实设计的五条shRNA干扰序列有效的敲低U2OS细胞中内源性UBXN1的表达。成功制备UBXN1的慢病毒干涉颗粒,并建立UBXN1稳定下调的U2OS细胞系。
- 巩伟丽涂海清韩秋影张飒李腾
- 关键词：慢病毒
- HeLa/GFP-α-tubulin/GFP-CENP-A细胞系的构建及对其有丝分裂的观察
- 2014年
- 有丝分裂中染色体的正确排列及准确地分离依赖于一系列的分子调控机制;其中微管的精确组装与运动发挥着重要的调控作用。微管功能调控异常可导致基因组不稳定性,从而促进肿瘤的发生;同时许多以微管为靶点的抗肿瘤药物被临床广泛应用。为了在细胞水平更好地研究微管的作用机制,利用慢病毒系统构建了稳定表达绿色荧光蛋白GFP-tubulinα及GFP-cenp A的HeLa细胞系,通过实时成像的激光共聚焦显微镜,实现了对HeLa细胞在有丝分裂期微管运动的动态观察,为研究肿瘤的发生机制及抗肿瘤药物的作用机理提供了实验基础。
- 李辉李帅锋李娜李腾王晓明
- 关键词：有丝分裂
- 体外反应体系中APC/C活性及相关研究
- 2011年
- 为利用体外反应体系研究纯化的细胞周期后期促进复合物(APC/C)相关的分子事件,以其底物泛素化为检测指标,分别从来源细胞裂解液浓度,不同底物间泛素化强度,以及与纺锤体检查点复合物的解离等几方面进行了研究。结果显示,由浓度高的细胞裂解液纯化出的APC/C活性高,其对底物Geminin的泛素化活性较Cyclin B高,在APC/C活性由被抑制到释放过程中,APC/C与Mad2,BubR1结合减少且Cdc20泛素化增强。
- 高彦飞李腾常艳王玉博穆蕊陈亮甄诚韩秋影于鸣巩伟丽张维娜李慧艳
- 关键词：底物活性解离
- SOX11结合p53并上调其转录活性被引量：1
- 2010年
- 目的:研究SOX11对p53转录活性的影响,并检测二者的体外相互作用。方法:在H1299(p53缺失)和H460(含野生型p53)2种细胞中分别过表达SOX11和p53,用双萤光素酶方法测定p53的转录活性;用大肠杆菌DH5α表达GST和GST-p53融合蛋白并将其纯化,用GST pull-down实验检测SOX11与p53在体外是否存在相互作用。结果:萤光素酶实验结果表明,在H1299和H460细胞中,过表达SOX11分别能促进外源p53和内源p53的转录活性;GST pull-down实验表明SOX11能在体外与p53发生相互作用。结论:SOX11能在体外与p53发生相互作用并促进p53的转录活性,为进一步研究p53的功能提供了新的线索。
- 常艳张维娜李腾高彦飞李慧艳满江红梁冰巩伟丽于鸣潘欣
- 关键词：P53相互作用转录活性
- epsin2蛋白质昆虫细胞纯化及液-液相分离功能探索
- 2021年
- 目的利用昆虫杆状病毒表达系统得到epsin2蛋白质并进行纯化后,探索其能否在体外发生液-液相分离。方法构建pmCherryC1-epsin2载体,在HeLa细胞内过表达后观察其胞内状态。构建pFastBac HT-B-mCherryepsin2蛋白质纯化载体,转染昆虫细胞Sf9,获得His-mCherry-epsin2融合蛋白质。进一步探索epsin2蛋白质能否在体外发生液-液相分离以及不同蛋白质浓度、盐浓度等对其的影响。结果 PONDR数据库分析发现,epsin2 C端有明显的低复杂无序区域。HeLa细胞内过表达pmCherryC1-epsin2后发现epsin2蛋白质在细胞质呈点状聚集。pFastBac HT-B-mCherry-epsin2蛋白质纯化载体构建成功后,通过转染Sf9细胞获得His-mCherry-epsin2融合蛋白质。经过镍柱和快速蛋白质液相色谱(fast protein liquid chromatography,FPLC)纯化获得高纯度的His-mCherry-epsin2蛋白质,通过宽场荧光高分辨率活细胞成像系统观察发现mCherry-epsin2蛋白质发生了浓度依赖的液-液相分离,且可受高盐及1,6-HD抑制。结论成功纯化出His-mCherry-epsin2融合蛋白质并发现其在体外可以发生液-液相分离,为后续探索epsin2如何通过相分离参与网格蛋白介导内吞(clathrin-mediated endocytosis,CME)调节生理功能奠定了基础。
- 赵冰李卓欣李亭亭陈肖华李卫华李腾
- 关键词：内吞真核表达蛋白质纯化
- CUEDC2突变体的构建及在原核和昆虫表达系统中的表达被引量：1
- 2011年
- 为构建CUEDC2的突变体并在原核和昆虫表达系统中表达验证,根据人cuedc2序列设计引物,以其突变体质粒为模板PCR扩增目的片段,酶切后连接至pET28a原核表达载体以及pFastBac1-Flag-N和pFastBac-HTA昆虫表达系统的表达载体。转化至DH5α后提取质粒,经菌液PCR、测序鉴定后,转入大肠杆菌BL21(DE3)及DH10Bac感受态细胞中。原核表达载体在E.coli中表达后用Ni-NTA亲和纯化,SDS-PAGE检测。昆虫表达载体提取杆粒,转染至昆虫细胞Sf9中表达。最后用western进行鉴定。结果成功构建了CUEDC2的突变体,并在原核和昆虫表达系统中表达。说明在原核和昆虫表达系统中,成功表达的CUEDC2突变体蛋白为CUEDC2的结构和功能研究奠定了基础。
- 王玉博高彦飞李腾常艳穆蕊徐金敬王芊艺巩伟丽于鸣李慧艳
- 关键词：CUEDC2昆虫突变体
- AWP1抑制TNFα诱导的NF-κB转录活性
- 2011年
- AWP1含有A20样锌指蛋白结构域。在人乳腺文库中克隆了AWP1 cDNA序列。双荧光报告基因检测系统证明过表达AWP1抑制TNFα诱导的NF-κB转录激活,并且AWP1与TNFα受体复合物中的TRAF2、IKKγ存在外源相互作用,为AWP1抑制TNFα信号通路的机制研究提供线索。
- 穆蕊高彦飞陈亮李腾甄诚于鸣巩伟丽潘欣夏晴
- 关键词：TNFΑNF-ΚB
