于鸣
- 作品数：71 被引量：186H指数：8
- 供职机构：军事医学科学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Mcl—1在人骨髓瘤细胞系XG—7凋亡中的作用
- 为进一步研究IL—6对XG—7细胞凋亡的调节作用,我们首先将XG—7细胞在2%FCS1640培养基中进行去IL—6饥饿处理18h,然后再补加10ng/mLIL—6刺激细胞12h。收集细胞样品进行PI染色和FACS分析。结...
- 宋伦黎燕孙英勋于鸣沈倍奋
- 文献传递
- 抗人重组IL－1单克隆抗体的制备及初步鉴定
- 1995年
- 以重组人ＩＬ－１免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞６５３融合，得到一组分泌抗人重组ＩＬ－１单克隆抗体的杂交瘤细胞。对其中的３株ＹＡ１３３、ＹＡ１４０和ＹＡ１６３进行了初步鉴定；抗体类别为ＩｇＧ，亚类均为ｌｇＧｌ；免疫转印显示，３株抗体均能特异性地识别分子量为１７．５ｋＤ的ＩＬ－１蛋白条带；ＥＬＩＳＡ法证明与其它细胞因子如：ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＴＮＤ－α、ＩＦＮ－γ和ＧＭ－ＣＳＦ均无交又反应；放射免疫测定结果证实，３株抗体分别识别ＩＬ－１分子上两个不同的抗原决定簇。
- 于鸣孙瑛勋杨子义孙启鸿沈倍奋
- 关键词：白细胞介素-1单克隆抗体
- RACE策略克隆抗人CD16单克隆抗体轻链可变区基因被引量：5
- 2003年
- 鼠源性单克隆抗体(mAb)应用于人体治疗首先需对其进行基因工程化改造.目前, 常用的克隆mAb可变区基因的方法, 是利用抗体可变区内骨架区(FR)序列的保守性, 设计一组通用引物, 采用RT-PCR法扩增可变区基因[1,2].但由于引物的简并性, 克隆过程中将不可避免地改变抗体可变区两侧(FR1、FR4)的氨基酸序列, 这些改变可能导致基因工程抗体亲和力降低[3].我们对传统方法进行了改进, 采用5′-RACE(rapid amplification of cDNA end, RACE)克隆的策略, 获得了抗人CD16 mAb轻链可变区(VL)基因的真实序列.
- 解志刚郭宁冯健男施明孙瑛勋于鸣沈倍奋
- 关键词：基因克隆基因序列
- 抗人CD3嵌合抗体基因的构建、表达及表达产物的初步功能研究被引量：4
- 2005年
- 目的: 构建并表达抗人CD3嵌合抗体, 以克服鼠源单克隆抗体(mAb)用于临床的局限性。方法: 采用基因工程技术, 将抗体VL、VH 基因分别克隆入嵌合抗体表达载体VLExpress及VHExpress中。共转染COS- 7细胞后, 用ELISA检测培养上清中嵌合抗体的表达水平; 采用ProteinA亲和层析法纯化抗体, 并进行Westernblot鉴定。用FACS检测嵌合抗体结合抗原的活性; 混合淋巴细胞培养检测抗体的功能。结果: 成功地构建了VH Express VH 及VLExpress VL表达载体并表达纯化。Westernblot的结果显示, 表达的抗人CD3抗体为人鼠嵌合抗体。FACS的结果显示, 该抗体具有良好的结合抗原活性; 混合淋巴细胞培养结果显示, 该抗体具有一定的免疫抑制功能。结论: 成功地构建、表达了抗人CD3嵌合抗体, 为进一步的研究打下了基础。
- 吕明赖春宁于鸣郭宁黎燕沈倍奋
- 关键词：CD3嵌合抗体混合淋巴细胞培养免疫抑制
- SOX11结合p53并上调其转录活性被引量：1
- 2010年
- 目的:研究SOX11对p53转录活性的影响,并检测二者的体外相互作用。方法:在H1299(p53缺失)和H460(含野生型p53)2种细胞中分别过表达SOX11和p53,用双萤光素酶方法测定p53的转录活性;用大肠杆菌DH5α表达GST和GST-p53融合蛋白并将其纯化,用GST pull-down实验检测SOX11与p53在体外是否存在相互作用。结果:萤光素酶实验结果表明,在H1299和H460细胞中,过表达SOX11分别能促进外源p53和内源p53的转录活性;GST pull-down实验表明SOX11能在体外与p53发生相互作用。结论:SOX11能在体外与p53发生相互作用并促进p53的转录活性,为进一步研究p53的功能提供了新的线索。
- 常艳张维娜李腾高彦飞李慧艳满江红梁冰巩伟丽于鸣潘欣
- 关键词：P53相互作用转录活性
- E-选择素突变体的构建和表达
- 1998年
- 从ｐＵＣ１８／Ｅ－选择素（Ｅ－ｓｅｌｅｃｔｉｎＣＤ６２Ｅ）重组质粒，以ＰＣＲ的方法扩增得到Ｅ－ｓｅｌｅｃｔｉｎ突变体ＣＤ６２Ｅ１和ＣＤ６２Ｅ２基因。将其分别插入痘苗病毒表达载体ｐＪＳＡ１１７５的单一ＳｍａⅠ位点，在痘苗病毒真核系统中进行了表达。初步的细胞粘附功能试验结果表明，Ｅ－ｓｅｌｅｃｔｉｎ分子不同结构域的缺失可削弱其粘附能力，为进一步研究Ｅ－ｓｅｌｅｃｔｉｎ公子的结构与功能奠定了基础。
- 胡美茹蔡铀庆孙英勋于鸣裴武红汲言山沈倍奋
- 关键词：E-选择素疫苗病毒突变体
- 抗人TNF-α单链抗体rScFvH22原核表达及纯化
- 2004年
- 目的 :应用PET32 c原核表达载体快速、高效地表达及纯化单链抗体。方法 :将单链抗体H2 2基因克隆到PET32 c原核表达载体中 ,通过酶切及测序鉴定正确后 ,进行原核诱导表达和纯化 ,并检测纯化后单链抗体的功能。结果 :DNA琼脂糖凝胶电泳表明 ,单链抗体基因克隆成功 ;SDS PAGE结果表明 ,单链抗体得到成功表达和纯化 ;ELISA和Western印迹结果表明 ,单链抗体H2 2能够特异性结合人TNF α。结论 :成功地表达及纯化抗人TNF α单链抗体rScFvH2 2。
- 林周秦卫松胡美茹于鸣沈倍奋黎燕
- 关键词：单链抗体原核表达纯化琼脂糖凝胶电泳
- 抗人CD16单克隆抗体可变区基因的克隆和表达被引量：7
- 2002年
- 目的 克隆抗人CD16单克隆抗体重、轻链可变区（VH,VL）基因并合成单链抗体（ScFv）基因。方法 从分泌抗人CD16单克隆抗体的杂交瘤细胞B88-9中提取总RNA,应用RT-PCR技术获得抗CD16单克隆抗体的VH、VL基因。用连接肽（Linker）将VH和VL连接成具有VH-Linker-VL结构的ScFv基因,将其克隆到表达载体pcDNA3.1（+）,并转染COS-7细胞。结果VH基因长度为354bp,属于鼠抗体可变区重链基因家族I（B）亚群;VL基因长度为333bp,属于鼠抗体可变区 kappa轻链基因家族Ⅲ亚群。采用夹心ELISA方法检测到ScFv的表达。结论 抗人CD16单克隆抗体VH与VL基因的克隆和ScFv基因的构建为基于CD16的导向免疫治疗奠定了基础。
- 解志刚郭宁施明冯健男孙瑛勋于鸣沈倍奋
- 关键词：克隆CD16抗体可变区基因免疫疗法
- 蛋白激酶ERK活化介导IFN-α在人骨髓瘤细胞系U266上的增殖促进效应被引量：2
- 2002年
- 目的 研究IFN α在人骨髓瘤细胞系U2 6 6上的生物学效应及其分子机制。方法 采用MTT方法检测IFN α对U2 6 6细胞生长的影响 ;采用FACS方法检测IFN α作用下U2 6 6细胞生长周期及其表面IL 6R、gp130等分子表达水平的改变情况 ;采用免疫印迹方法检测能够介导细胞生长的Ras/MAPK途径中蛋白激酶ERK在IFN α刺激作用下的活化情况 ,并同时观察Ras/MAPK途径特异性抑制剂PD980 5 9作用后ERK激酶活化和细胞生长所发生的变化。结果 IFN α能够促进U2 6 6细胞周期行进 ,同时表现出细胞增殖促进效应 ;但它不影响U2 6 6细胞上IL 6R和gp130分子的表达。IFN α可明显激活蛋白激酶ERK ,PD980 5 9作用后ERK活化受抑 ,同时IFN α在U2 6 6细胞上的生长促进效应明显下调。结论 IFN α通过激活蛋白激酶ERK介导其在U2 6
- 宋伦黎燕于鸣沈倍奋
- 关键词：IFN-Α多发性骨髓瘤增殖效应MM
- GADD45α/JNK/AP1途径活化介导砷化物诱导的肿瘤细胞凋亡效应
- 目的:GADD45 a是一种能在细胞应急损伤过程中发挥重要作用的蛋白,它可以通过介导损伤基因修复,引起细胞周期阻滞和诱导细胞凋亡的方式来避免肿瘤的发生和发展,而由我们前期的研究发现,近些年来在治疗急性早幼粒细胞白血病中取...
- 高明宋伦胡美茹于鸣郭宁
- 关键词：砷化物信号转导
- 文献传递
