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杨剑波: 作品数：19 被引量：41H指数：4; 供职机构：新疆农垦科学院更多>>; 发文基金：转基因生物新品种培育专项国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>

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中国美利奴超细型与哈萨克羊毛囊兴盛期皮肤组织消减cDNA文库的构建被引量：3: 2012年; 【目的】筛选影响绵羊羊毛性状的重要候选基因,为研究羊毛性状形成的分子机制奠定基础。【方法】利用抑制性消减杂交技术构建中国美利奴超细型和哈萨克羊兴盛期皮肤组织间正、反向消减cDNA文库,并对差异基因进行测序和生物信息学分析;应用半定量RT-PCR和实时荧光定量RT-PCR对部分差异基因进行鉴定。【结果】①从所构建绵羊皮肤组织的正、反向消减cDNA文库中分别获得153和143个ESTs,其中分别包括5和4个未知功能的ESTs,推测可能是新基因;对部分已知功能ESTs进行了GO聚类分析、通路分析和蛋白互作分析,结果显示粗、细毛羊之间存在一定差异;②文库中的3个差异基因KRTAP8-2、Trichohyalin和KRTAP3-2均能在皮肤中特异性地高表达,其中KRTAP8-2和Trichohyalin基因在中国美利奴超细型羊皮肤组织中的表达丰度分别是哈萨克羊的3.45和2.07倍,而KRTAP3-2基因在哈萨克羊皮肤组织表达丰度是中国美利奴超细型羊的1.87倍。【结论】成功构建了中国美利奴超细型和哈萨克羊皮肤组织间抑制性消减cDNA文库,初步筛选出一批可能影响羊毛性状的差异表达ESTs。; 杨剑波甘尚权李晶高磊杨井泉张科杨永林沈敏石国庆; 关键词：抑制性消减杂交中国美利奴羊哈萨克羊

绵羊发情周期不同组织Cry1 mRNA转录水平相对定量研究被引量：8: 2013年; 研究表明,时钟基因Cry1在哺乳动物季节性繁殖内分泌过程中可能发挥了重要作用。文章以多浪羊(非季节性繁殖)和中国美利奴羊(季节性繁殖)为研究对象,采用实时荧光定量PCR技术对下丘脑-垂体-性腺轴主要组织Cry1在发情周期不同阶段的表达变化情况进行了跟踪检测。结果表明:绵羊Cry1在所检测组织中均有表达,其中松果体和甲状腺Cry1的表达水平较高;不同绵羊品种Cry1在发情周期不同阶段的组织表达谱基本一致,除下丘脑外,卵巢、子宫、松果体、垂体和甲状腺中Cry1的表达水平均是在发情前期达到峰值;卵巢、子宫、垂体和松果体Cry1在发情前期和发情期的表达变化幅度存在显著的品种间差异。研究结果表明:Cry1可能具有启动发情和季节性繁殖的重要作用。; 高磊甘尚权杨井泉杨剑波梁耀伟阿不都艾尼.努拉洪沈敏; 关键词：发情周期下丘脑-垂体-性腺轴绵羊

睾丸和卵巢打点注射pIRES2-EGFP质粒生产转基因兔的研究(英文)被引量：2: 2010年; 为探讨直接用注射器对睾丸和卵巢打点注射pIRES2-EGFP质粒转染兔的精子细胞和卵母细胞,建立操作方便、效率高、成本低、可批量生产转基因兔的可行性。选择5只成年新西兰雄兔、29只经产新西兰雌兔,每侧睾丸和卵巢内分别打点注射0.5~0.8 mg/mL质粒0.25 mL。①第3周随机取一只雄兔睾丸做冰冻切片,于荧光显微镜下观察转染情况。②（Ⅰ：1#♂×7♀、Ⅱ：2#♂×7♀、Ⅲ：3#♂×7♀、Ⅳ：4#♂×7♀）其它雄兔于第6周和第7周与3日前做过卵巢注射并超排处理的雌兔配种,最后采集新生仔兔耳组织,提取基因组DNA,经PCR和Southern杂交检测阳性率。结果显示雄兔睾丸冰冻切片于荧光显微镜下可见绿色荧光,统计所得后代转基因阳性率,并进行差异分析,其中Ⅰ组后代阳性率最高,PCR和Southern杂交检测阳性率为93.55%和83.87%,Ⅳ后代阳性率最低,依次为80.65%和70.97%,但是各组之间差异不显著。上述实验结果表明,对睾丸和卵巢同时注射外源基因可获得较高阳性率的转基因后代,生产转基因的方法操作简便、高效,为日后大规模制备一些大型家畜的转基因后代奠定了基础。; 宋天增冯静曾宪垠杨剑波杨华张红琳杨井泉韩猛立贾斌赵宗胜石国庆; 关键词：转基因兔

绵羊KAP1.1基因多态性与毛纤维直径的相关性分析被引量：1: 2012年; 以768只中国美利奴羊(新疆军垦型)为材料,采用测序和PCR技术分析KAP1.1(B2A)基因单核苷酸多态性及其与羊毛纤维直径的相关性。结果表明:中国美利奴羊(新疆军垦型)KAP1.1基因存在30个碱基的插入/缺失和6种基因型,分别为(341 bp)AA基因型、(311 bp)BB基因型、(281 bp)CC基因型、(341 bp/311 bp)AB基因型、(341 bp/281 bp)AC基因型和(311 bp/281 bp)BC基因型。AA、BC、AC、AB和CC基因型间的毛卷曲度、细度离散、毛长、污毛重、净毛率和密度差异不显著(P>0.05),而BB基因型羊只的平均纤维直径显著小于AA、BC、AC、AB和CC基因型羊只的平均纤维直径(P<0.05)。以上结果表明,KAP1.1基因可作为绵羊毛纤维直径的主要候选基因之一,BB基因型可作为分子标记用于预测绵羊毛纤维直径。; 冯静宋天增杨华徐从祥杨剑波韩猛立杨永林石国庆; 关键词：SNP 纤维直径

卵巢打点注射质粒pIRES2-EGFP生产转基因兔的研究(英文)被引量：1: 2010年; 本研究以绿色荧光蛋白为报告基因,转染兔卵母细胞,探索建立操作方便、效率高、成本低、可定量生产转基因兔的可行性方法。选择14只成年新西兰雌兔,每侧卵巢内分别打点注射0.25 mL 0.5-0.8 mg/mL的质粒,注射后第3日、第16日和第31日进行人工辅助配种;卵巢注射后第3日、第16日和31日随机各取1只雌兔卵巢做冰冻切片,置荧光显微镜下观察绿色荧光;应用PCR和Southern杂交检测转基因新生仔兔阳性率。结果经荧光显微镜观察,卵巢注射后第3日配种的雌兔卵巢冰冻切片及48 h以后的胚胎呈现绿色荧光;卵巢注射报告基因后第3日配种的雌兔后代阳性率最高,PCR和Southern杂交检测结果分别为72.7%和45.5%;第31日配种的后代阳性率最低,分别为36.8%和15.8%;第16日配种、第3日配种和第31日配种雌兔的阳性后代数量呈递减趋势。卵巢注射后第3日配种,虽然后代阳性率较高,但是其产仔数最少。实验结果表明,用注射器直接对卵巢打点注射外源基因生产转基因兔的方法操作简便、高效,为日后大规模制备一些大型家畜的转基因后代奠定了基础。; 宋天增冯静曾宪垠杨剑波杨华韩猛立杨井泉黄新张红琳陈永耀贾斌石国庆; 关键词：卵巢转基因兔

绵羊KAP1.1基因克隆与单核苷酸多态性分析被引量：11: 2010年; 本研究以768只中国美利奴羊(新疆军垦型)为实验材料,采用测序和PCR技术分析KAP1.1(B2A)基因单核苷酸多态性。测序表明中国美利奴羊(新疆军垦型)KAP1.1基因存在30 bp的插入/缺失,12%PAGE电泳证实KAP1.1基因存在6种基因型:(341 bp)AA型、(311 bp)BB型、(281 bp)CC型、(341 bp/311 bp)AB型、(341 bp/281 bp)AC型和(311 bp/281 bp)BC型,基因型频率依次为0.0208、0.5534、0.0260、0.1589、0.0456和0.1953。检测到A、B和C3个等位基因,基因频率依次为0.1230、0.7305和0.1465。研究结果将为开展优质细毛羊毛性状功能基因的研究提供基础。; 冯静杨华宋天增杨剑波石国庆徐从祥黄锡霞; 关键词：SNP 基因克隆

检测硫酸雌酮间接ELISA方法的建立: 2009年; 目的:建立酶联免疫吸附法(ELISA)以检硫酸雌酮的含量.方法:首先合成硫酸雌酮-BSA,然后将其作为包被抗原,建立检测硫酸雌酮的间接ELISA法.结果:建立了检测硫酸雌酮的标准曲线y=9E-5X+0.0998,该ELISA法灵敏度为0.69 ng.mL-1,批内和批间变异系数分别为8.8%和10.3%,与孕酮、炔雌醇、睾酮的交叉反应不明显.结论:初步建立了定量测定硫酸雌酮含量的间接酶联免疫吸附试验方法(ELISA).; 杨剑波吴向华周红霞林兴凤张红琳; 关键词：ELISA

绵羊ILK基因的克隆及其在毛囊生长期的表达被引量：4: 2012年; 整合素连接激酶（ILK）是一种支架蛋白,在毛囊发育过程中发挥重要作用。文章利用PCR技术,首次获得绵羊ILK基因的编码区全长序列,并进行了生物信息学分析;同时对该基因的组织表达谱及其在不同绵羊品种毛囊生长期皮肤组织中的表达变化进行了研究。结果表明,绵羊ILK基因ORF全长1 359 bp,编码452个氨基酸。ILK蛋白结构经预测含有3个锚定重复序列和1个激酶结构域,并存在多个磷酸化位点和蛋白激酶C的磷酸化位点。半定量RT-PCR结果显示该基因在绵羊心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、骨骼肌、皮肤和小肠组织中均有表达,皮肤、脾脏和肝脏中表达量较高;实时荧光定量PCR结果表明在3~5月份（毛囊生长起始期）,ILK基因在中国美利奴超细型和哈萨克羊皮肤组织中的表达水平较高并均呈逐月上升趋势;在6~10月份（毛囊生长期）,中国美利奴超细型皮肤ILK基因表达水平高于同期的哈萨克羊。分析认为ILK可能在调控绵羊次级毛囊生长发育过程中起一定作用。; 杨剑波甘尚权杨永林张红琳宋天增冯静杨井泉高磊石国庆沈敏; 关键词：整合素连接激酶基因克隆毛囊绵羊

卵巢打点注射质粒pIRES2-EGFP生产转基因兔的研究: 本研究以绿色荧光蛋白为报告基因，转染兔卵母细胞，探索建立操作方便、效率高、成本低、可定量生产转基因兔的可行性方法。方法选择14只成年新西兰雌兔，每侧卵巢内分别打点注射O．25mlO．5mg/ml—0．8mg/ml的质粒，...; 宋天增张红琳陈永耀冯静石国庆曾宪垠杨剑波杨华韩猛立杨井泉黄新; 关键词：卵巢转基因兔

绵羊LPAR6基因的克隆、序列分析及其组织表达谱分析: 为初步了解绵羊LPAR6基因信息,利用RT-PCR扩增绵羊LPAR6基因cDNA并进行序列分析;通过半定量RT-PCR检测该基因在绵羊组织表达谱.结果显示:首次获得了绵羊LPAR6 cDNA序列,其中CDS全长1026b...; 高磊甘尚权梁耀伟杨井泉杨剑波沈敏; 关键词：绵羊基因克隆组织表达谱; 文献传递

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