杨秋慧
- 作品数：10 被引量：66H指数：5
- 供职机构：首都医科大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 6-羟多巴胺纹状体内注射制作大鼠帕金森病模型的研究被引量：25
- 2003年
- 目的 为拓宽 6 OHDA损毁多巴胺能神经元所制备大鼠帕金森病模型的应用范围 ,采用多位点纹状体内注入 6 OHDA的途径来制备模型。方法 研究用SD大鼠 ,两个针道内四点定位注射 ,每点注射 3 μg/ μl 6 OHDA3 μl。结果 术后两周出现缓慢旋转 ,4周旋转行为达到 7转 /分并保持稳定 ;形态学染色可见损毁 1周后注射侧黑质酪氨酸羟化酶免疫组化阳性细胞减少 2 0 % ,2周后减少 3 8% ,3～ 4周减少 70 %以上 ,6周后损伤趋缓。高效液相 电化学法活体检测纹状体内多巴胺的代谢产物 3、 4 二羟基苯乙酸 (DOPAC)和高香草酸 (HVA) ,发现注射侧和非注射侧相比含量分别下降98 3 3 %和 96 0 5 % ;组织匀浆检测损毁侧黑质多巴胺含量下降了 73 %以上 ,3、 4 二羟基苯乙酸 (DOPAC)含量下降60 %。结论 纹状体内注射 6
- 赵焕英苏月杨秋慧段春礼杨慧徐群渊
- 关键词：帕金森病动物模型6-羟多巴胺
- Nurrl可以维持成年多巴胺能神经元表型并可以通过基因治疗保护、挽救DA进一步变性
- ＜正＞ Nurr1对胚胎期中脑多巴胺能神经元的分化是必需的,成年期Nurr1持续表达说明其在维系DA表型上发挥作用。用Nurr1表达载体转染小鼠中脑多巴胺神经元细胞系MN-9D,western blotting检测,细胞...
- 杨秋慧姜传涛杨慧徐群渊
- 文献传递
- Nurr1在MN9D细胞中的过表达及其对酪氨酸羟化酶的影响被引量：4
- 2003年
- 目的 :观察MN9D细胞中Nurr1的表达和分布及Nurr1过表达对酪氨酸羟化酶的影响。 方法 :应用高压液相色谱、免疫细胞化学、转基因、Westernblot和Northernblot等方法检测了MN9D细胞中多巴胺及其代谢物的水平和Nurr1蛋白在细胞中的分布 ,建立了过表达Nurr1的细胞株并观察了Nurr1过表达对TH基因的影响。结果 :MN9D细胞裂解液中含有大量多巴胺及其代谢物 ;Nurr1蛋白主要分布在MN9D细胞的胞质中 ,尤以核周最多 ;MN9D细胞中有Nurr1的mRNA存在和蛋白质的表达 ;过表达Nurr1的MN9D细胞A1株酪氨酸羟化酶表达增高。结论 :Nurr1与多巴胺能神经元发育有关 ,有可能用于帕金森病的基因治疗。
- 杨秋慧杨慧赵焕英姜传涛徐群渊
- 关键词：NURRL酪氨酸羟化酶帕金森病基因治疗
- 用Nurr1基因治疗帕金森病的前期研究——Nurr1对体外培养MN9D细胞功能的影响、pAAV-Nurr1载体的构建及其在骨髓基质细胞中的表达
- 该研究采用分子生物学和免疫细胞化学等方法检测了MN9D细胞中多巴胺的含量、孤儿核受体(Nurr1)基因的表达、蛋白的分布和Nurr1过表达对酪氨酸羟化酶(TH)的影响,发现MN9D细胞在正常情况下可以合成多巴胺,并表达T...
- 杨秋慧
- 关键词：孤儿核受体酪氨酸羟化酶骨髓基质细胞基因治疗帕金森病
- 文献传递
- 胎儿脑组织体外保存获取神经干细胞的时限被引量：16
- 2002年
- 目的 探讨人胎儿脑海马组织体外保存不同时限后培养获取神经干细胞的可行性。 方法 利用无血清培养 ,从死亡后孵育在 4℃Hank液 0h、4h、2 4h、4 8h、72h及 96h的胎儿海马分离细胞 ,在体外连续传代培养 ;采用免疫荧光细胞化学方法检测培养细胞的神经上皮干细胞蛋白 (nestin)表达、经BrdU孵育后的BrdU表达以及诱导分化后的神经元标记 (tubulin)或星型胶质细胞抗原 (GFAP)表达 ;比较不同时限的细胞在Nestin的表达、增殖能力和诱导分化后神经元及胶质细胞比例的差异。 结果 从保存在 4℃Hank液 72h以内的各组胎儿海马中均可获得具有连续增殖能力的神经球 ,培养出的细胞Nestin表达为阳性 ,通过BrdU的摄取表明细胞处于活跃的有丝分裂状态 ,在此期限内各组之间无明显差异 ;诱导分化后的神经元和胶质细胞比例在各组之间亦相似 ;但随着在Hank液中孵育时间的延长 ,所获得的神经球数量呈减少趋势 ;在 96h组则未能获得神经球。 结论 人胎儿海马组织在 4℃Hank液中孵育 72h内可培养出呈神经球样生长的神经干细胞 。
- 姜传涛杨秋慧苏玉金赵春礼杨慧徐群渊
- 关键词：胎儿脑组织体外保存神经干细胞无血清培养
- 胎儿海马神经干细胞的体外培养及神经元前体细胞的纯化被引量：7
- 2002年
- 目的 从人胎儿海马分离培养具有自我更新和多向分化能力的神经干细胞 ,并从中纯化神经元前体细胞。 方法 利用无血清培养从胚胎 4个月的胎儿海马区分离细胞 ,并在体外连续传代培养 ;采用免疫荧光细胞化学技术检测神经上皮干细胞蛋白 (nestin)的表达、经BrdU孵育后的BrdU表达 ;比较两种诱导分化方法所获得的神经元和胶质细胞的比例差异 ;利用单细胞克隆技术纯化神经元前体细胞。 结果 分离的细胞具有连续克隆能力 ,在体外培养了 16个月 ,传了 4 3代 ;细胞冻存、复苏后仍保持干细胞特性 ;培养的细胞呈Nestin阳性 ,在BrdU孵育后呈BrdU阳性 ,诱导分化后的细胞能够表达Tubulin、NeuN或GFAP ;利用无血清诱导所得到的分化细胞中神经元的比例约占 80 % ,而血清诱导的分化细胞中胶质细胞的比例则大于 90 %。利用单细胞克隆技术可从神经球中纯化的细胞表达Nestin ,并且全部分化成神经元。 结论 从胎儿海马区分离的细胞具有自我更新能力和多向分化潜能 ,属于神经干细胞 。
- 姜传涛赵春礼杨秋慧杨慧王元身鲁强徐群渊
- 关键词：胎儿海马神经干细胞体外培养神经元前体细胞纯化无血清培养
- Nurr1基因在大鼠体外培养骨髓基质细胞的表达被引量：5
- 2003年
- 目的 :为获得高效表达孤儿核受体 (orphannuclearreceptor,Nurr1)基因的骨髓基质细胞。 方法 :采用分子克隆技术 ,构建携带Nurr1基因的重组腺相关病毒 (adeno associatedvirus,AAV)载体 ;与包装质粒 pAAV RC和辅助质粒phelper一起用磷酸钙法转染包装细胞HEK2 93制备具有感染活性的AAV Nurr1病毒粒子 ;用病毒上清液感染原代培养的大鼠骨髓基质细胞 (Marrowstromalcells,MSCs) ,并用免疫细胞化学方法检测阳性细胞。 结果 :经酶切鉴定和DNA测序 ,得到了序列正确的重组pAAV Nurr1;感染HT10 80细胞进行病毒滴度测定 ,每mL病毒贮存液可达 10 12 个阳性细胞 ;获得了Nurr1阳性的骨髓基质细胞 ,阳性率在 6 0 %以上。结论 :重组AAV携带的Nurr1基因能够在MSCs中表达 ,本文为进一步探讨将该细胞用于帕金森病基因治疗的可能性研究奠定了基础。
- 杨秋慧赵焕英杨慧姜传涛鲁玲玲江小华赵春礼徐群渊
- 关键词：体外培养骨髓基质细胞分子克隆技术孤儿核受体腺病毒相关病毒
- 成年大鼠及猴骨髓基质细胞的体外培养及向神经元的分化诱导被引量：8
- 2003年
- 为了探讨成年动物骨髓基质细胞的体外培养和神经元诱导及其不同培养时程对外源基因的转染率,本实验采用直接和间接两种方法分离、培养成年大鼠和猴的骨髓基质细胞。在体外进行神经元诱导,用免疫细胞化学方法进行鉴定;用携带酪氨酸羟化酶基因的逆转录病毒载体转染体外培养第1～10代大鼠骨髓基质细胞,经免疫细胞化学鉴定并计算转染率。结果显示,成年大鼠和猴骨髓基质细胞以未分化状态至少可持续培养20余代,部分细胞表达干细胞的标志蛋白nestin,经BrdU孵育后呈BrdU抗体免疫阳性;经诱导后细胞具有典型的神经元形态,表达神经元的特异性蛋白NeuN;培养第3代至6代的骨髓基质细胞对外源性基因的转染效率较其他时程明显增高。实验结果说明,骨髓基质细胞可以在体外培养并被诱导成为神经元,它还可携带外源性治疗基因。
- 姜传涛杨秋慧刘玉军赵焕英杨慧徐群渊
- 关键词：成年大鼠骨髓基质细胞体外培养神经元转染率
- 人三磷酸鸟苷酸环化水解酶Ⅰ基因的克隆与表达被引量：1
- 2003年
- 目的 研究人三磷酸鸟苷酸环化水解酶Ⅰ (GCHⅠ )基因在多巴胺代谢过程中的作用。 方法 从人胚胎肝脏中提取总RNA ,以RT PCR法扩增GCHⅠcDNA ,克隆于PGEM T easy载体中 ,测序正确后再构建真核表达载体 ,转染猴肾成纤维细胞系COS7,原位杂交检测其表达。 结果 RT PCR扩增出 90 4bp的cDNA ,并成功构建真核表达载体pCI neo GCHⅠ ,原位杂交证实其在COS7表达阳性率为 70 %～ 80 %。 结论 GCHⅠ有望用于帕金森病的基因治疗。
- 苏玉金江小华姜重建张宇新杨秋慧徐群渊杨慧
- 关键词：基因克隆RT-PCR原位杂交帕金森病基因治疗
- Nurr1基因、AAV载体在帕金森病基因治疗的可能应用
- 2003年
- Nurrl属于孤儿核受体家族 ,目前认为它对中脑多巴胺能神经元的发育、存活和成熟后的表型维持发挥重要作用。Nurrl基因可以提高多巴胺转运体 (DAT)基因和酪氨酸羟化酶 (TH)基因的转录。在人类 ,与年龄相关的DA表型标志物TH的降低与黑质部位Nurrl表达的下调有关。Nurrl有望成为帕金森病基因治疗的候选基因。腺病毒伴随病毒(AAV)是目前公认的较有希望的病毒载体 ,它可以感染非分裂细胞 ,由AAV Ⅱ型改造的重组AAV载体可以定点整合于宿主细胞染色体 ,可以特异性感染神经元 ,适合对中枢神经系统的治疗。重组AAV应该是能够良好携带Nurrl基因进行帕金森病基因治疗的载体。
- 杨秋慧杨慧徐群渊
- 关键词：NURRL腺相关病毒基因治疗帕金森病
