杨莉丽
- 作品数：6 被引量：12H指数：2
- 供职机构：天津医科大学代谢病医院更多>>
- 发文基金：天津市自然科学基金天津市教委基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人脂联素基因的克隆、表达及体外活性检测
- 目的利用Gateway表达系统快速构建脂联素原核表达载体,表达和纯化脂联素蛋白。利用一种高效的复性剂NDSB201使纯化的蛋白恢复其最大活性,了解脂联素的结构及作用机制。方法人脂肪组织总 RNA提取及脂联素基因的克隆:构...
- 刘德敏杨莉丽赵慧茹孙颖
- 文献传递
- 大鼠肝细胞的原代培养及鉴定被引量：8
- 2006年
- 目的:探讨大鼠肝细胞原代培养的方法及细胞的鉴定。方法:采用胶原酶消化获取大鼠肝细胞进行纯化、培养,并采用免疫组织化学方法对其进行鉴定。结果:培养的肝细胞产量高、活力好,用相差显微镜对不同生长时期的肝细胞进行观察证实了细胞贴壁后变平变薄,双核细胞和多核细胞呈岛状连接的形态学特性,采用抗大鼠细胞角蛋白(ck18)的特异抗体进行免疫组化细胞爬片鉴定,经SP染色DAB显色后,阳性着色部位在胞浆呈棕黄色颗粒,阴性对照未见着色。结论:成功地体外培养了大鼠肝细胞并对其进行了鉴定,为进一步的实验研究奠定了基础。
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- 关键词：肝细胞细胞培养技术免疫组织化学
- 人脂联素基因的克隆、表达及体外活性检测
- 脂联素是由脂肪组织分泌的一种特异性脂肪因子，具有降低血糖、抗动脉粥样硬化、以及抗炎效应。可以作为胰岛素抵抗以及代谢病综合征的早期诊断指标。利用Gateway表达体系成功构建了人脂联素的表达载体，并且在大肠杆菌进行脂联素蛋...
- 刘德敏杨莉丽赵慧茹靳立忠孙颖
- 关键词：脂联素基因克隆葡萄糖-6-磷酸酶体外活性
- 文献传递
- 人脂联素基因的克隆及在大肠杆菌中的表达被引量：3
- 2006年
- 目的:克隆人脂联素(adiponectin)基因,并在大肠杆菌宿主系统中高效表达出adiponectin蛋白进行鉴定。方法:从人皮下脂肪组织提取总RNA,确认其正确性后经RT-PCR扩增得到全长cDNA片段,此片段经纯化回收后克隆至pMD18-T载体,经行DNA序列分析,进一步克隆构建到表达载体至pET-DEST42中,用IPTG在大肠杆菌中诱导表达。结果:含重组adiponectin质粒的大肠杆菌经0.4mmol/L的IPTG诱导6h后有高表达。结论:adiponectin基因的克隆构建和在大肠杆菌中的表达获得成功。
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- 关键词：胞间信号肽类和蛋白质类基因表达大肠杆菌
- 人脂联素基因的原核表达、纯化及活性检测
- 2007年
- 目的:在大肠杆菌中表达具有活性的重组人脂联素蛋白。方法:利用PCR技术扩增人脂联素基因完全编码序列,选用Gateway原核表达体系,经过BP反应、LR反应两步反应,将PCR产物克隆入pET-DEST42质粒,构建融合表达载体pET-DEST42/attB-adiponectin,转化大肠杆菌BL21(DE3),以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达脂联素融合蛋白,经镍柱亲和层析纯化,NDSB201高效复性后,使重组蛋白作用于体外培养的肝细胞,RT-PCR法检测重组脂联素对肝细胞葡萄糖-6-磷酸酶转录水平的影响。结果:成功构建了表达载体pET-DEST42/attB-adiponectin,DNA序列测定结果与预期一致。IPTG诱导表达的融合蛋白经纯化后Western Blot鉴定具有人脂联素抗原性,并可使培养的肝细胞中葡萄糖-6-磷酸酶转录水平下降。结论:获得具有生物学活性的重组人脂联素为进一步研究脂联素的生理机制奠定了基础。
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- 关键词：脂联素肝细胞重组蛋白质类
- 一种新的糖尿病易感基因——Calpain-10被引量：1
- 2005年
- 杨莉丽刘德敏
- 关键词：糖尿病基因多态性
