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人骨保护素N端片段在大肠杆菌中的表达及其活性分析被引量：1: 2005年; 骨保护素 (OPG)成熟肽N端D1～D4结构域仅由 2个外显子编码 .以人基因组DNA作为模板 ,采用重叠延伸PCR得到N端D1～D4域编码序列 ,并在其上游引入 2×His密码子序列 ,然后克隆入载体pQE 30进行表达 ,SDS PAGE表明 8×His融合蛋白主要以包涵体形式存在 ,可被抗OPG抗体识别 .变性条件下通过Ni NTA金属螯合亲和层析对表达产物进行纯化后再经梯度透析进行复性 ,采用破骨细胞样细胞 (osteoclast likecell ,OLC)诱导分化实验来检测重组蛋白的生物活性 ,证实单核巨噬细胞集落刺激因子 (M CSF)和破骨细胞分化因子 (ODF)可协同促进多核OLC的生成 ,但加入重组OPG片段后 ,OLC生成显著减少 .; 王宝利戴芳梁晖张瑞吴亚锋郭刚张镜宇; 关键词：骨保护素活性分析

骨形态发生蛋白-7生物学功能的研究进展被引量：1: 2005年; 最初发现骨形态发生蛋白(BMP)-7的作用是异位诱导成骨,并根据这一特点应用于治疗临床一些难治性骨缺损疾病。新近发现BMP-7还与泌尿系统、生殖系统关系密切,可用于治疗动物模型中缺血性肾病、炎性肾病、高转换率肾性骨营养不良和血管钙化等。因此,BMP-7具有广泛的功能与应用前景。; 梁晖张镜宇; 关键词：骨形态发生蛋白-7 生物学功能动物模型缺血性肾病

重组可溶性核因子κB受体活化因子体外抑制甲状旁腺激素诱导的破骨细胞生成被引量：4: 2007年; 新近发现的核因子κB受体活化因子配基(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL),核因子κB受体活化因子(receptor activator ofnuclear factor-κB,RANK)／护骨素(osteoprotegerin,OPG)细胞因子系统提高了对破骨细胞生物学和骨稳态分子水平的认识。RANKL与RANK之间的相互作用决定了破骨细胞的分化。本研究通过体外实验评价可溶性RANK (soluble RANK,sRANK)是否可作为RANKL的拈抗剂下调破骨细胞生成和骨吸收陷窝的形成。构建sRANK的原核表达载体,转化入大肠杆菌表达菌株Origami B(DE3),成功表达了重组蛋白,亲和层析进行纯化。重组sRANK以剂量依赖方式抑制由甲状旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)诱导的破骨细胞生成和骨吸收陷窝形成。RT-PCR实验证实,sRANK可显著抑制PTH刺激的小鼠骨髓细胞碳酸苷酶Ⅱ和抗酒石酸酸性磷酸酶mRNA的表达。结果表明,sRANK具有抗骨吸收功能,可能成为一种治疗以骨吸收加强为特征的骨疾病的新方法。; 王宝利梁晖郑纺李晓霞刘玉冰戴晨琳; 关键词：核因子ΚB受体活化因子破骨细胞体外

重叠延伸PCR法在合成人骨保护素N端编码序列中的应用被引量：26: 2004年; 目的 :获得人骨保护素 (OPG)N端D1～D4结构域编码序列。方法 :OPGN端D1～D4域仅由2个外显子编码。采用改良方法自人血标本提取基因组DNA ,以此DNA作为模板 ,PCR分别扩增OPG基因外显子2和外显子3 ,并使外显子2的3'引物和外显子3的5'引物具有相互重叠的一段序列。以2种PCR产物的混合物作为模板 ,采用重叠延伸法再次进行PCR ,扩增产物克隆于载体pGEM -Teasy 进行序列分析。结果 :PCR扩增得到N端编码序列 ,序列分析证实该序列完全正确。结论 :重叠延伸PCR法合成人OPGN端编码序列的完成为基因工程研制有生物活性蛋白提供了可行的技术手段。; 王宝利梁晖戴芳郭刚张镜宇; 关键词：聚合酶链式反应骨保护素

人骨形态发生蛋白-7成熟肽毕赤酵母表达重组子的构建被引量：1: 2004年; 目的 :构建人骨形态发生蛋白 -7(bonemorphgeneticprotein -7,BMP -7)巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris)表达重组子。方法 :以本室保存的重组质粒 pBV220/BMP -7为模板,经PCR扩增出人BMP -7成熟肽编码序列 ,先以A -T连接方式克隆入pGEM -Teasy载体,再将其克隆到毕赤酵母分泌型表达载体 pPIC9中,重组质粒线性化后PEG法转化入毕赤酵母菌株GS115,用PCR方法筛选转化子。结果 :DNA序列分析和PCR鉴定表明成功构建了人骨形成蛋白 -7(BMP -7)毕赤酵母表达重组子。结论 :为今后基因工程大量生产BMP -7打下基础。; 梁晖王宝利梁东春郭刚张镜宇; 关键词：骨形成蛋白-7 毕赤酵母分泌型表达

发生点突变的pCDNA3.1(+)质粒的构建被引量：1: 2008年; 体外定点突变技术是研究蛋白质结构和功能之间复杂关系的有力工具，也是我们在实验室中改造／优化基因常用的手段。蛋白质的结构决定其功能，二者之间的关系是蛋白质组研究的重点之一。对某个已知基因的特定碱基进行定点改变、缺失或者插入．可以改变对应的氨基酸序列和蛋白质结构，对突变基因的表达产物进行研究有助于了解蛋白质结构和功能的关系，探讨蛋白质的结构／结构域。常见体外定点突变的方法有化学诱变、寡核苷酸介导的诱变、盒式诱变和基于PCR的诱变．以PCR为基础的定点诱变（site directed mutagenesis．SDM）技术是近年来得到极大发展的分子生物学方法，广泛用于基因和蛋白质的结构与功能的基础研究。基于PCR的诱变方法有：重叠延伸PCR法、大引物PCR法等。; 梁晖李雪孙紫阳; 关键词：PCR 定点诱变

人骨形态发生蛋白-7(BMP-7)成熟肽编码序列的克隆与表达: 骨形态发生蛋白-7(BMP-7)又称为成骨蛋白-1(OP-1)属于转化生长因子-β(TGF-β)超家族.BMP-7是由431个氨基酸组成的糖蛋白,其信号肽和前结构域分别有29个和263个氨基酸,在Arg-292与Ser-...; 梁晖; 关键词：骨形态发生蛋白-7 融合蛋白碱性磷酸酶; 文献传递

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梁晖