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王仕钦: 作品数：13 被引量：36H指数：4; 供职机构：南京军区南京总医院更多>>; 发文基金：江苏省科技支撑计划项目江苏省博士后科研资助计划项目更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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抗烯醇化酶抗体检测对侵袭性念珠菌病的诊断价值: 目的利用重组白念珠菌烯醇化酶抗原,建立测定人血清中抗白念珠菌烯醇化酶抗体的ELISA法,评估该法在侵袭性念珠菌病(IC)诊断中的应用价值。方法收集经培养确诊的各类IC患者(66例)和定植患者(32例)血清,用重组白念珠菌...; 孔小祥李芳秋王仕钦史利宁邵海枫王卫萍; 文献传递

用免疫蛋白质组学技术筛选烟曲霉分泌蛋白中的免疫优势抗原: 2011年; 目的用免疫蛋白质组学技术筛选烟曲霉分泌蛋白中的免疫优势抗原,用于侵袭性曲霉病(IA)的诊断标志物及疗效监测。方法 YEPG培养基培养14 d的真菌分泌蛋白质进行二维电泳(2-DE)分离,用抗曲霉抗体阳性的IA确诊患者混合血清进行免疫印迹,再用质谱分析及生物信息学方法鉴定阳性反应点。结果 2-DE、免疫印迹结果显示,确诊IA患者血清与分泌蛋白质中多种抗原反应强烈。40个蛋白质点被抗体阳性IA患者血清识别。对40个蛋白质点质谱分析,成功鉴定了39个免疫反应阳性的蛋白质点,代表17种蛋白质,包括分泌型二肽基肽酶V(DppV)、NAD-依赖型苹果酸脱氢酶、硫氧还蛋白还原酶、醛脱氢酶、果糖二磷酸醛缩酶、3-羟丁酰辅酶A脱氢酶等。在鉴定出的17种蛋白质中,有2个为已知抗原,15个首次报道为免疫原性蛋白质。有7种免疫原性蛋白质显示有多个蛋白质点。且在新发现的免疫原性蛋白质中,2号蛋白质(共13个蛋白质点)免疫反应最强,鉴定结果为硫氧还蛋白还原酶。结论免疫蛋白质组学技术是筛选病原体免疫优势抗原的一种有效方法,此次鉴定的抗原可能是潜在的疾病标志物,但还需进一步地实验加以评估。; 史利宁李芳秋孔小祥王仕钦黄梅邵海枫; 关键词：烟曲霉侵袭性曲霉病分泌蛋白 2-DE

白念珠菌烯醇化酶重组蛋白质的制备及鉴定被引量：18: 2010年; 目的制备具有高免疫原性的白念珠菌重组烯醇化酶蛋白质。方法以白念珠菌C1标准株基因组DNA作为模板,用PCR法扩增烯醇化酶的全长DNA序列,以pET28a(+)为载体,构建重组表达质粒,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导重组融合蛋白质表达。用抗his标签的单克隆抗体和白念珠菌抗体阳性的病人血清进行western blot鉴定,亲和层析柱纯化重组蛋白质。结果获得了含白念珠菌烯醇化酶全长基因的重组表达载体和相应工程菌株,经IPTG诱导后能高效表达重组融合蛋白质。经已含抗体的病人血清进行western blot鉴定,表明诱导的重组蛋白质有良好的免疫原性。结论成功克隆了白念珠菌烯醇化酶全长基因并在大肠埃希菌中获得高效表达;重组蛋白质具有良好的免疫原性。; 王仕钦曹王丽李芳秋孔小祥史利宁; 关键词：白念珠菌烯醇化酶基因克隆原核表达

用动物模型评估抗烯醇化酶抗体测定对系统性白念珠菌病的诊断价值被引量：11: 2011年; 目的建立系统性白念珠菌病(SC)家兔模型,考察免疫功能正常组和免疫功能低下组家兔产生特异性抗体的动力学,评估抗烯醇化酶抗体的诊断价值。方法新西兰大白兔随机分为A组(免疫功能正常组)和B组(免疫功能低下组,注射氢化可的松建模),每组4只,静脉注射白念珠菌分生孢子,建立SC动物模型。每2d采血,用western blot检测血清抗白念珠菌非糖基化蛋白抗体谱、用ELISA法检测抗烯醇化酶抗体滴度。结果 western blot结果显示,感染后第16d,两组家兔血清均出现与非糖基化蛋白组分反应的抗体,以相对分子量(Mr)29000和48000蛋白的抗体反应最强,其中Mr 48000蛋白为烯醇化酶。ELISA结果显示,感染后第12d,所有家兔即可检出抗烯醇化酶抗体,且抗体滴度持续升高。结论免疫功能正常和免疫功能低下家兔罹患SC时,产生特异性抗体的动力学无显著差异;抗白念珠菌烯醇化酶抗体有望成为早期快速诊断SC的指标。; 孔小祥李芳秋王仕钦史利宁; 关键词：动物模型血清学诊断

白念珠菌烯醇化酶免疫优势肽段的重组表达与鉴定: 目的构建白念珠菌重组烯醇化酶蛋白免疫优势肽段Eno-380P的基因表达工程菌,诱导表达并检测其抗原性。方法以白念珠菌C1标准株基因组DNA作为模板,设计一对特异引物,用PCR法扩增出Eno-380P的编码基因,以pET2...; 王仕钦李芳秋史利宁孔小祥陆静芬曹王丽; 文献传递

烟曲霉不同蛋白组分免疫反应性的比较研究: 目的通过制备烟曲霉不同蛋白组分,并用特异性抗曲霉抗体阳性的侵袭性曲霉病(IA)确诊病人血清与这些蛋白组分进行免疫印迹,对这些蛋白组分的免疫反应性进行比较分析,从而筛选出含免疫原性蛋白最多、免疫反应最强的蛋白组分,为进一...; 史利宁李芳秋周万青孔小祥王仕钦黄梅邵海枫; 关键词：烟曲霉菌体蛋白免疫反应性

白念珠菌烯醇化酶免疫优势肽段的重组表达与鉴定: 王仕钦李芳秋史利宁孔小祥陆静芬曹王丽

烟曲霉硫氧还蛋白还原酶重组蛋白的原核表达及抗原性分析被引量：6: 2011年; 目的克隆烟曲霉硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase,TR)基因并构建原核表达载体,获得烟曲霉TR重组蛋白,并鉴定其抗原性。方法用RT-PCR方法从烟曲霉总RNA中扩增出TR cDNA片段,克隆至pMD18-T载体,并转化E.coliJM109。经序列分析证实后,提取重组克隆质粒双酶切获得目的基因,与表达载体pET28a(+)连接,转化E.coli BL21(DE3),筛选重组表达质粒。用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导重组融合蛋白表达,用SDS-PAGE及免疫印迹法分析重组蛋白质,并用亲和层析柱进行纯化。结果构建了含TR全长基因的重组表达质粒,IPTG诱导后可高效表达。免疫印迹结果表明该重组蛋白质可被侵袭性曲霉病患者血清识别。结论成功构建了重组表达质粒pET28a(+)/TR,并在大肠埃希菌中获得了高效表达,重组蛋白质具有良好的抗原性,为进一步研究奠定了基础。; 史利宁邵世和李芳秋孔小祥王仕钦陆静芬黄梅邵海枫; 关键词：烟曲霉硫氧还蛋白还原酶基因克隆原核表达

抗烯醇化酶抗体检测对侵袭性念珠菌病的诊断价值被引量：11: 2011年; 目的利用白念珠菌烯醇化酶重组蛋白质为抗原,建立测定人血清中抗白念珠菌烯醇化酶IgG类抗体的ELISA法,评估其在侵袭性念珠菌病(IC)诊断中的应用价值。方法收集各类确诊IC患者(66例)和白念珠菌定植者(32例)血清,用重组白念珠菌烯醇化酶包被ELISA微孔板,测定血清中的抗烯醇化酶抗体,确定cut off值并对方法的精密度和特异性进行考察。结果以重组烯醇化酶抗原建立的ELISA法批内变异系数(CV)为5.7%,批间CV为14.6%;重组抗原对血清中相应抗体的阻断率为93.0%。经ROC曲线分析,选择吸光度值0.37作为cut off值,对IC的诊断敏感性为77.3%,特异性为98.0%。念珠菌定植者阳性率为31.3%(10/32),IC患者阳性率为77.3%(51/66),两组差异有统计学意义(P<0.05)。动态观察发现,IC患者中47.0%(31/66)可以在血培养阳性前检测到抗烯醇化酶抗体。结论建立了检测抗白念珠菌烯醇化酶抗体的ELISA法,在IC早期诊断中具有潜在应用价值。; 孔小祥李芳秋王仕钦史利宁邵海枫王卫萍; 关键词：侵袭性念珠菌病烯醇化酶抗体酶联免疫吸附法

白念珠菌烯醇化酶N端肽段ENO1-319P的原核表达和鉴定被引量：1: 2011年; 目的制备白念珠菌烯醇化酶N端基因重组肽段ENO1-319P并检测其抗原性。方法选择与人烯醇化酶蛋白α-ENO同源性低的白念珠菌烯醇化酶肽段ENO1-319P,将其编码DNA序列克隆到表达载体pET28a(+),并在大肠埃希菌BL21(DE3)中用IPTG诱导带有His标签的重组肽段的表达。用SDS-PAGE电泳分析,TALON金属亲和层析柱纯化重组蛋白,其抗原性用侵袭性白念珠菌感染(ICAI)患者血清进行western blot评估。结果成功表达并纯化了目的肽段,该蛋白可与ICAI患者血清发生特异性反应。结论获得了白念珠菌烯醇化酶N端肽段ENO1-319P的基因表达工程菌株,为将此重组肽段用于制备特异性更高的抗体打下基础。; 王仕钦李芳秋史利宁孔小祥陆静芬; 关键词：白念珠菌烯醇化酶原核表达

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