公共文化服务平台

王俊: 作品数：16 被引量：38H指数：5; 供职机构：北京农学院动物科学技术学院更多>>; 发文基金：北京市属高等学校高层次人才引进与培养计划国家自然科学基金更多>>; 相关领域：农业科学更多>>

合作作者

伪狂犬病病毒野毒感染快速检测方法的比较: 引言猪的伪狂犬病是由伪狂犬病病毒(PRV)引起的一种严重危害养猪业的传染病,接种PRV-gE基因缺失疫苗和淘汰PRV野毒感染猪是防控该病的主要手段.可用于PRV野毒感染的快速检测方法主要有抗体检测与PCR技术,活体检测组...; 王俊李雪明周双海

猪细环病毒1型衣壳蛋白的原核表达: 以猪细环病毒1型ORF1全长质粒为模板,克隆衣壳蛋白部分基因,并转化至原核表达载体pET-32a中,构建重组原核表达载体pET-32a-Cap,转入大肠埃希菌Rosetta(DE3)中,IPTG诱导表达,SDS-PAGE...; 王俊周双海

伪狂犬病病毒gE基因荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用: 为建立一种快速检测伪狂犬病病毒(PRV)野毒的荧光定量PCR方法.根据PRV-gE基因序列设计1对特异性引物,构建含有PRV-gE基因片段的重组质粒,以系列稀释后的重组质粒作为模板来建立定量检测PRV-gE的SYBR G...; 于红欣李雪明杨红杰王俊周双海; 关键词：伪狂犬病病毒 GE基因荧光定量聚合酶链反应; 文献传递

猪流行性腹泻病毒Real-timePCR检测方法的建立被引量：6: 2014年; 为定量检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)载量,建立PEDV的Real-time PCR方法。用RT-PCR方法扩增PEDV的M基因片段,构建含有M基因片段的重组质粒,用该重组质粒进行SYBR Green I Real-time PCR,来建立检测PEDV的荧光定量PCR方法。结果显示:在(5.56×102～5.56×107)拷贝/μL范围内,所建立方法具有优良的线性关系,其决定系数为0.9996,扩增效率为99.5%,扩增产物的熔解曲线只有一个特异性峰,无引物二聚体峰,熔解温度为(81.18±0.21)℃。该方法对猪传染性胃肠炎病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、伪狂犬病病毒、猪圆环病毒II型等猪源病毒均检测不到扩增产物,重复性试验的变异系数小于3%,对临床样品的检出率高于常规PCR方法。研究结果表明:建立的Real-time PCR检测方法特异性强、重复性好、灵敏性高,可用于PEDV的定量检测及其早期感染的快速诊断。; 孟凡伟张雪王俊单晶晶王鹏周双海王志军; 关键词：猪流行性腹泻病毒 SYBR I REAL-TIME PCR

猪细环病毒2型实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：5: 2014年; 根据猪细环病毒2型(TTSuV2)基因非编码区保守序列设计了1对特异性引物,构建含有TTSuV2基因片段的重组质粒,以系列稀释后的重组质粒作为模板来建立定量检测TTSuV2的SYBR GreenⅠreal-time PCR方法。结果显示,该方法的标准曲线的决定系数达0.999,显示出优良的线性关系;最低可检测50copies/μL的核酸模板,重复性试验的变异系数小于3%;用该方法对TTSuV1、猪圆环病毒、猪细小病毒、伪狂犬病病毒、猪瘟病毒及猪繁殖与呼吸综合征病毒等的检测结果均为阴性;对临床样品的检出率高于常规PCR方法的检出率。结果表明,建立的real-time PCR检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于TTSuV2的检测与定量分析。; 单晶晶王俊孟凡伟于红欣周双海; 关键词：PCR SYBR

猪圆环病毒Ⅱ型ORF4真核表达载体构建及其抗体制备被引量：1: 2014年; 为构建猪圆环病毒II型(PCV2)ORF4基因的真核表达载体,并制备ORF4抗体。用PCR方法扩增PCV2 ORF4基因,将其克隆入真核表达载体pCDNA3.1(+)或pEGFP-C1,成功构建出重组质粒pCDNA-ORF4、pEGFP-ORF4。重组质粒pEGFP-ORF4转染PK15细胞后,pEGFP-ORF4蛋白在细胞中明显表达,荧光信号主要定位于细胞核内。重组质粒pCDNA-ORF4接种BALB/c小鼠后,接种小鼠血清能与PCV2发生特异性免疫反应,经4次接种后抗体效价均达到1:26以上,表明诱导产生了PCV2 ORF4抗体。研究结果表明,构建了2种PCV2 ORF4真核表达载体,并制备了PCV2 ORF4抗体,为PCV2ORF4基因功能研究奠定了基础。; 孟凡伟王俊单晶晶周双海李雅慧高晓波; 关键词：猪圆环病毒II型真核表达载体

猪圆环病毒1型real-time PCR检测方法的建立被引量：6: 2014年; 为了建立一种定量检测猪圆环病毒1型(PCV1)的实时荧光定量PCR方法,根据PCV1基因序列设计了1对特异性引物,并构建含有PCV1基因片段的重组质粒,以系列稀释后的重组质粒作为模板建立了定量检测PCV1的SYBR GreenⅠreal-time PCR方法,并绘制标准曲线,进行特异性、敏感性和重复性试验。结果显示,该方法的标准曲线的决定系数为0.999,显示出优良的线性关系;最低可准确检测320copies/μL的核酸模板,重复性试验的变异系数小于2%;该方法对PCV2、猪细小病毒、伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒及猪瘟病毒等的检测结果均为阴性;对临床样品的检出率高于常规PCR方法。结果表明,建立的real-time PCR特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于PCV1的检测与定量分析。; 于红欣王立娇孟凡伟王俊周双海; 关键词：猪圆环病毒1型 SYBR REAL-TIME PCR

猪细环病毒1型real-time PCR检测方法的建立被引量：4: 2014年; 参考猪细环病毒1型(TTSuV 1)基因非编码区保守序列设计了1对特异性引物,构建含有TTSuV 1基因片段的重组质粒,以系列稀释后的重组质粒作为模板建立了定量检测TTSuV 1的SYBR GreenⅠreal-time PCR方法,并绘制标准曲线,进行特异性、敏感性和重复性试验。结果显示,该方法标准曲线的决定系数为0.999 5,表明具有优良的线性关系;最低可精确检测63copies/μL的核酸模板;重复性试验的变异系数小于2%;对TTSuV 2、猪圆环病毒1型、猪圆环病毒2型、伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒及猪瘟病毒等均检测不到荧光信号。对临床样品的检出率高于常规PCR方法。结果表明,建立的real-time PCR检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于TTSuV 1的检测与定量分析。; 王俊单晶晶孟凡伟于红欣黎阳周双海; 关键词：实时定量PCR SYBR

猪细环病毒1型实时定量PCR检测方法的建立: 为定量检测猪细环病毒1型(TTSuV1),建立了检测TTSuV1核酸的SYBR GreenⅠ实时定量PCR方法。构建含有TTSuV1基因249 bp片段的重组质粒,用该重组质粒进行SYBR GreenⅠreal-time...; 王俊单晶晶孟凡伟周双海黎阳; 关键词：基因检测聚合酶链式反应; 文献传递

猪传染性胃肠炎病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用被引量：11: 2015年; 为了建立一种定量检测猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的实时荧光定量PCR方法,用RT-PCR扩增TGEV的M基因片段,构建含有TGEV M基因片段的重组质粒。用系列稀释后的重组质粒为模板,基于SYBR GreenⅠ来进行检测TGEV的实时荧光定量PCR扩增。结果显示,扩增效率为103.0%,相邻扩增曲线之间间距均匀,所有产物的熔解曲线具有单一整齐的峰,标准曲线具有优良的线性关系,最低可准确检测63copies/μL的核酸模板,重复性试验的变异系数小于3%。用建立的PCR对3种常见猪源RNA病毒的检测结果均为阴性,对65份临床样品的检出率高于常规PCR。结果表明,建立了一种灵敏度高、特异性强、重复性好的检测TGEV的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,可用于TGEV的定量检测和猪传染性胃肠炎的早期快速诊断。; 张雪杨倩于红欣王俊孟凡伟周双海; 关键词：猪传染性胃肠炎病毒 SYBR 荧光定量PCR 早期快速诊断

王俊

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户反馈

王俊

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户登录

用户反馈