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孟凡伟: 作品数：16 被引量：46H指数：5; 供职机构：北京农学院动物科学技术学院更多>>; 发文基金：北京市属高等学校高层次人才引进与培养计划北京市自然科学基金国家自然科学基金更多>>; 相关领域：农业科学更多>>

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猪圆环病毒Ⅱ型ORF4真核表达载体构建及其抗体制备被引量：1: 2014年; 为构建猪圆环病毒II型(PCV2)ORF4基因的真核表达载体,并制备ORF4抗体。用PCR方法扩增PCV2 ORF4基因,将其克隆入真核表达载体pCDNA3.1(+)或pEGFP-C1,成功构建出重组质粒pCDNA-ORF4、pEGFP-ORF4。重组质粒pEGFP-ORF4转染PK15细胞后,pEGFP-ORF4蛋白在细胞中明显表达,荧光信号主要定位于细胞核内。重组质粒pCDNA-ORF4接种BALB/c小鼠后,接种小鼠血清能与PCV2发生特异性免疫反应,经4次接种后抗体效价均达到1:26以上,表明诱导产生了PCV2 ORF4抗体。研究结果表明,构建了2种PCV2 ORF4真核表达载体,并制备了PCV2 ORF4抗体,为PCV2ORF4基因功能研究奠定了基础。; 孟凡伟王俊单晶晶周双海李雅慧高晓波; 关键词：猪圆环病毒II型真核表达载体

嵌合猪圆环病毒的构建被引量：3: 2016年; 【目的】为了构建猪圆环病毒1型(PCV1)和猪圆环病毒2型(PCV2)的嵌合病毒,并为PCV2疫苗研究奠定基础。【方法】以PCV1基因组为骨架,将其衣壳基因替换为PCV2衣壳基因,来构建嵌合猪圆环病毒(PCV1-2)DNA克隆,将PCV1-2DNA克隆转染PK-15细胞以获得拯救病毒PCV1-2,并测定PCV1-2在PK-15细胞中的增殖特性。【结果】酶切和序列测定显示成功构建出PCV1-2DNA克隆;免疫荧光试验和PCR检测显示成功获得拯救病毒PCV1-2,其效价达到106.0 TCID50/mL以上;一步生长曲线显示PCV1-2在PK-15细胞中的增殖特性与其亲本病毒近似。【结论】成功构建了1种具有较高体外增殖能力的嵌合猪圆环病毒。; 邵小雪杨倩孟凡伟于红欣周双海

猪圆环病毒II型感染抑制伪狂犬病病毒疫苗的体液免疫反应被引量：8: 2013年; 为了探讨猪圆环病毒II型(PCV2)感染对伪狂犬病病毒(PRV)疫苗体液免疫反应的影响,检测了PCV2实验感染仔猪血清中PRV疫苗抗体含量的动态变化。将仔猪随机分成二组,一组仔猪进行PCV2接种和PRV疫苗免疫而作为PCV2组;另一组仔猪不予PCV2接种但进行PRV疫苗免疫而作为对照组。所有仔猪在PCV2接种后14天均进行PRV弱毒疫苗免疫,用间接ELISA检测仔猪血清中病毒特异性抗体;到PCV2接种后14天,PCV2组仔猪全部出现PCV2病毒血症。在PRV疫苗免疫后7天,多数仔猪血清中可检测到疫苗抗体之后疫苗抗体含量逐渐上升,在免疫后14天时对照组疫苗抗体水平显著(P<0.05)高于PCV2组,但在免疫后21天时两组之间抗体水平没有差异。研究结果显示:PCV2实验感染仔猪的PRV疫苗抗体产生出现延迟,表明PCV2感染可抑制PRV疫苗诱导的体液免疫反应。; 高峰孟凡伟单晶晶周双海王志军段佳强张军; 关键词：猪圆环病毒II型仔猪抗体体液免疫反应

猪圆环病毒2型感染抑制仔猪伪狂犬病疫苗抗体的产生: 为探讨猪圆环病毒2型(PCV2)感染对仔猪伪狂犬病疫苗抗体产生的影响,将12头35日龄健康普通仔猪随机平均分成2组,一组滴鼻口服106,05TCID50 PCV2作为感染组,另一组不予接种作为对照。到接种后14天,感染仔...; 孟凡伟高峰单晶晶周双海; 关键词：猪圆环病毒2型伪狂犬病疫苗仔猪抗体; 文献传递

猪圆环病毒1型real-time PCR检测方法的建立被引量：6: 2014年; 为了建立一种定量检测猪圆环病毒1型(PCV1)的实时荧光定量PCR方法,根据PCV1基因序列设计了1对特异性引物,并构建含有PCV1基因片段的重组质粒,以系列稀释后的重组质粒作为模板建立了定量检测PCV1的SYBR GreenⅠreal-time PCR方法,并绘制标准曲线,进行特异性、敏感性和重复性试验。结果显示,该方法的标准曲线的决定系数为0.999,显示出优良的线性关系;最低可准确检测320copies/μL的核酸模板,重复性试验的变异系数小于2%;该方法对PCV2、猪细小病毒、伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒及猪瘟病毒等的检测结果均为阴性;对临床样品的检出率高于常规PCR方法。结果表明,建立的real-time PCR特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于PCV1的检测与定量分析。; 于红欣王立娇孟凡伟王俊周双海; 关键词：猪圆环病毒1型 SYBR REAL-TIME PCR

猪细环病毒1型real-time PCR检测方法的建立被引量：4: 2014年; 参考猪细环病毒1型(TTSuV 1)基因非编码区保守序列设计了1对特异性引物,构建含有TTSuV 1基因片段的重组质粒,以系列稀释后的重组质粒作为模板建立了定量检测TTSuV 1的SYBR GreenⅠreal-time PCR方法,并绘制标准曲线,进行特异性、敏感性和重复性试验。结果显示,该方法标准曲线的决定系数为0.999 5,表明具有优良的线性关系;最低可精确检测63copies/μL的核酸模板;重复性试验的变异系数小于2%;对TTSuV 2、猪圆环病毒1型、猪圆环病毒2型、伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒及猪瘟病毒等均检测不到荧光信号。对临床样品的检出率高于常规PCR方法。结果表明,建立的real-time PCR检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于TTSuV 1的检测与定量分析。; 王俊单晶晶孟凡伟于红欣黎阳周双海; 关键词：实时定量PCR SYBR

一株新基因型猪圆环病毒Ⅱ型的鉴定被引量：2: 2013年; 为了解新近出现的猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)的基因变异及其基因型信息。用PCR技术从新近发生断奶后多系统消耗综合征的病猪组织中扩增和克隆出一株PCV2全基因组序列,并进行了遗传变异分析。结果显示:该PCV2毒株基因组全长为1767bp,与部分其他PCV2毒株的核苷酸同源性达94.0%以上,并显示出一定的地域、时间相关性。病毒ORF2基因系统发育进化分析显示:该PCV2毒株与已有PCV2基因型的遗传距离均大于0.035,因而被划入到一个新的PCV2基因型,暂命名为PCV2d,属于在中国新近出现的一种PCV2基因型。研究结果表明,克隆鉴定了一株新基因型PCV2。; 谢俊岭陈晓平孟凡伟王保有周双海王志军; 关键词：猪圆环病毒II型基因变异进化分析基因型

猪细环病毒1型实时定量PCR检测方法的建立: 为定量检测猪细环病毒1型(TTSuV1),建立了检测TTSuV1核酸的SYBR GreenⅠ实时定量PCR方法。构建含有TTSuV1基因249bp片段的重组质粒,用该重组质粒进行SYBR GreenⅠreal-time ...; 王俊单晶晶孟凡伟周双海黎阳; 关键词：实时定量PCR; 文献传递

猪圆环病毒Ⅱ型感染性DNA克隆的构建被引量：2: 2012年; 为了构建猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)感染性DNA克隆,并为PCV2的突变体构建及其致病机理研究建立基础。用PCR方法从PCV2 DNA质粒中扩增出PCV2全基因组片段,将其插入到pBluescript-SK载体中,构建出单拷贝PCV2 DNA克隆,并进一步构建了双拷贝PCV2 DNA克隆,将PCV2 DNA克隆转染PK-15细胞,以获得PCV2拯救病毒,并初步测定了拯救病毒的体外增殖能力。结果显示:成功获得了PCV2拯救病毒,并能够在PK-15细胞中进行稳定传代,其TCID50在连传5代后达到10-6.05/mL,与其亲本病毒相近,显示出较高的感染滴度。研究结果表明,成功构建了具有较高感染性的PCV2感染性克隆,为PCV2的生物学特性及致病机理研究奠定了基础。; 谢俊岭邵小雪孟凡伟周双海; 关键词：增殖能力

猪流行性腹泻病毒Real-timePCR检测方法的建立被引量：6: 2014年; 为定量检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)载量,建立PEDV的Real-time PCR方法。用RT-PCR方法扩增PEDV的M基因片段,构建含有M基因片段的重组质粒,用该重组质粒进行SYBR Green I Real-time PCR,来建立检测PEDV的荧光定量PCR方法。结果显示:在(5.56×102～5.56×107)拷贝/μL范围内,所建立方法具有优良的线性关系,其决定系数为0.9996,扩增效率为99.5%,扩增产物的熔解曲线只有一个特异性峰,无引物二聚体峰,熔解温度为(81.18±0.21)℃。该方法对猪传染性胃肠炎病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、伪狂犬病病毒、猪圆环病毒II型等猪源病毒均检测不到扩增产物,重复性试验的变异系数小于3%,对临床样品的检出率高于常规PCR方法。研究结果表明:建立的Real-time PCR检测方法特异性强、重复性好、灵敏性高,可用于PEDV的定量检测及其早期感染的快速诊断。; 孟凡伟张雪王俊单晶晶王鹏周双海王志军; 关键词：猪流行性腹泻病毒 SYBR I REAL-TIME PCR

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