王绚
- 作品数：6 被引量：29H指数：3
- 供职机构：兰州大学基础医学院病原生物学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 细粒棘球绦虫果糖二磷酸醛缩酶的生物信息学分析及其表达与活性检测被引量：4
- 2014年
- 目的利用生物信息学方法分析细粒棘球绦虫果糖二磷酸醛缩酶(EgFBPA)的结构和功能特征,并利用基因工程技术进行克隆、表达、纯化,获得活性蛋白。方法利用多种生物信息学软件分析EgFBPA的拓扑结构、生物学以及免疫功能特征;用限制性内切酶EcoRⅠ和HandⅢ对重组质粒FBPA/P-blue酶切FBPA目的基因片段,亚克隆入表达载体pET30a,筛选重组克隆并测序,将测序正确的重组质粒转化入BL21(DE3)感受态细菌,用异丙基-β-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组蛋白;用Ni-NTA柱纯化重组蛋白,并建立酶反应体系,通过NADH(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸)的变化测定重组蛋白EgFBPA的酶催化活性。结果 EgFBPA基因全长1 092bp,编码363个氨基酸,软件分析其等电点(pI)为8.34,分子质量单位为39.8035ku。亚细胞定位分析该蛋白为无信号肽的细胞质蛋白,属于稳定蛋白;结构域和保守功能域的预测,FBPAI的激活位点为VYLEGTLLKPN(222aa-232aa),并含有TIMβ/α筒状结构(6aa-346aa),二级结构以α-螺旋和环状结构居多,无跨膜区,有10种类型的活性位点。经PCR、双酶切和测序证实pET30a(+)-EgFBPA构建成功。SDS-PAGE检测重组质粒表达产物分子质量与预期相符,且具有可溶性;Bradford法测定蛋白浓度为(0.50±0.02)mg/ml。酶活性检测Ni-NTA柱纯化后的FBPA具有良好的酶促活性,且存在量效关系。结论生物信息学预测EgFBPA可能是潜在的药物靶点。重组质粒Pet30a(+)-FBPA在大肠埃希菌BL21中成功表达,表达产物具有酶促活性,为进一步研究其生物学功能及药物靶点奠定了基础。
- 王绚吴巨龙吕刚苏娟辛奇鲁俊张思王猛孙萃平逯召莲何黎黎景涛
- 关键词：细粒棘球绦虫蛋白纯化分子克隆生物信息学
- 丙型肝炎病毒感染致2型糖尿病机制的研究进展被引量：3
- 2014年
- 丙型肝炎病毒(HCV)感染是影响全人类的高发的感染性疾病。HCV感染除了会造成极大的感染率和病死率外,更为严重的是HCV可导致终末期器官损害。糖尿病是由遗传和环境因素共同作用而引起的一组以糖代谢紊乱为主要表现的临床综合征。近年来越来越多的研究发现,糖尿病患者的HCV感染率显著高于普通人群,而慢性丙型肝炎患者2型糖尿病的患病率也显著高于正常人。
- 张佩王绚何继瑞
- 关键词：丙型肝炎病毒2型糖尿病
- 细粒棘球绦虫果糖二磷酸醛缩酶的生物信息学分析及其表达、纯化和酶活性的检测
- 目的：利用生物信息学方法分析细粒棘球绦虫果糖二磷酸醛缩酶(FBPA)的结构和功能特征,并利用基因工程技术进行克隆、表达、纯化,获得活性蛋白。 方法：利用多种生物信息学软件分析细粒棘球绦虫的FBPA的拓扑结构、生物学以及免...
- 王绚
- 关键词：细粒棘球绦虫分子克隆蛋白纯化生物信息学预测
- 文献传递
- 细粒棘球绦虫GAPDH蛋白的生物信息学分析及其重组表达纯化和酶活性检测被引量：1
- 2014年
- 目的以生物信息学预测细粒棘球绦虫甘油醛3-磷酸脱氢酶(EgGAPDH)编码基因及其编码蛋白的结构和功能,利用大肠杆菌原核表达系统高效表达EgGAPDH重组蛋白,体外检测其酶活性。方法运用各软件对EgGAPDH的理化性质、保守功能域、系统发生树和二级结构、三级结构等方面进行分析后,将EgGAPDH基因亚克隆于表达载体pET30a(+),转化入E.coli BL21(DE3)感受态细菌,表达、纯化重组蛋白,并利用底物3-磷酸甘油醛测定重组蛋白EgGAPDH的酶催化活性。结果 EgGAPDH cDNA序列长度为1 011bp,编码一个336个氨基酸的蛋白。该GAPDH蛋白理论相对分子质量为36 128.3Da,等电点为8.44,具有GAPDH蛋白家族的两个功能结构域,富含6种类型的特定功能位点。成功构建的原核表达载体pET30a(+)-EgGAPDH在E.coli BL21(DE3)中高效表达,且发现表达产物主要以可溶形式分布于裂解上清,制备甘油醛3-磷酸脱氢酶纯品并通过酶活检测显示其具有高效酶活性。结论 EgGAPDH基因可在原核系统中获得有酶催化活性的高效表达,为进一步研究其在糖代谢中的功能奠定了基础。
- 吴巨龙王绚吕刚苏娟逯召莲孙萃萍景涛
- 关键词：细粒棘球绦虫生物信息学原核表达酶活性检测
- 心搏骤停后脑损伤机制及脑复苏的研究进展被引量：7
- 2014年
- 心搏骤停后为全脑缺血状态,脑损伤机制复杂不仅要渡过急性期的各种并发症,还要面对未来长期病残所带来的巨大物质和经济负担,因而对脑缺血进行积极有效的脑保护和脑复苏有着非常重要的理论和实践意义。脑复苏是后成败的关键,国际复苏委员会将心肺复苏的概念扩展到心肺脑复苏,将脑复苏提到与心肺复苏同等重要的地位。脑功能恢复的关键是及时进行心肺复苏,改善脑灌注,终极目标为最大程度恢复中枢神经系统功能。近年脑复苏已经成为研究热点,该文着重于对心搏骤停后脑损伤机制及脑复苏进行阐述。
- 张英杰王绚李培杰
- 关键词：心搏骤停脑损伤机制脑复苏
- 股骨近端防旋髓内钉、动力髋螺钉、伽马钉治疗股骨转子间骨折的系统评价被引量：14
- 2013年
- 目的评价股骨近端防旋髓内钉(PFNA)、动力髋螺钉(DHS)、伽马钉治疗股骨转子间骨折的有效性和安全性。方法计算机检索Cochrane图书馆(2011年第12期),PubMed(1966年-2011年12月),EMBASE(1974年-2011年12月),web of science(1958年-2011年12月),万方数据库(1992年-2011年12月),维普资讯网(1989年-2011年12月),中国期刊全文数据库(1994年-2011年12月),中国生物医学文献数据库(1978年-2011年12月),纳入PFNA、DHS、伽马钉治疗股骨转子间骨折的随机前瞻性研究,采取修订后的Jadad评分量表对纳入研究进行质量评价。用RevMan 5.1软件进行Meta分析。结果共纳入12个研究(1 477例患者)。Meta分析结果显示PFNA治疗股骨转子间骨折的手术时间[MD=32.19,95%CI(49.69,14.69),P=0.000 3;MD=4.52,95%CI(5.24,3.80),P<0.000 01],出血量[MD=183.06,95%CI(277.37,88.74),P=0.000 1;MD=49.49,95%CI(84.15,14.83),P=0.005]少于DHS组和伽马钉组,但是三者在总有效率、住院时间和术后并发症等方面差异无统计学意义。DHS组与伽马钉组在所有指标差异均无统计学意义。结论与DHS、伽马钉相比,PFNA可明显缩短手术时间、降低术中出血量,但并不能提高总有效率、缩短住院时间以及减少术后并发症;而DHS与伽马钉治疗股骨转子间骨折的疗效无明显差异。
- 马坤龙王绚栾富均梁羽张英杰方跃屠重棋杨天府
- 关键词：股骨转子间骨折股骨近端抗旋髓内钉动力髋螺钉伽马钉
