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萤火虫荧光素酶报告基因重组逆转录病毒载体的构建及鉴定被引量：1: 2009年; 目的构建含萤火虫荧光素酶报告基因的逆转录病毒载体,为进一步研究生物发光活体动物体内光学成像奠定基础。方法利用重组DNA技术,将荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic双酶切得到的目的基因fluc+亚克隆至逆转录病毒载体pLXSN中,重组质粒pL(fluc)SN在脂质体介导下"乒乓"转染GP+E86和PA317包装细胞,G418筛选,直至出现抗性克隆。扩大培养,测定病毒滴度,并检测荧光素酶活性。结果经限制性酶切分析鉴定,载体插入基因大小、位置均正确,并用GP+E86和PA317细胞进行包装、病毒滴度测定、筛选,建立具有较高滴度的重组逆转录病毒fluc细胞系,该细胞可高效表达荧光素酶。结论成功构建了重组质粒pL(fluc)SN,为标识干细胞进行基础研究提供了一种检测方法和平台。; 边素艳盖鲁粤叶平杨月峰王荣亮王华郭子宽王立生; 关键词：重组逆转录病毒载体 PLXSN

^(60)Coγ射线心脏局部照射对大鼠离体心脏功能的影响被引量：3: 2007年; 目的研究γ射线心脏局部照射对大鼠心脏血流灌注及功能的影响,为放射性心脏损伤的防治提供实验依据。方法12只Wistar雌性大鼠随机分为未照射组、照射组,每组6只,照射组行60Coγ射线20Gy单剂量照射,每日观察大鼠饮食、行为活动等变化,定期记录大鼠体重变化。照射后120天用超声心肌造影检测大鼠心肌血流灌注变化。照射后180天分离大鼠心脏,采用Langendorff离体心脏灌流法测定左室收缩压(LVSP)和左室内压力变化速率(dp/dtmax、dp/dtmin),并取大鼠心脏进行病理检查,用HE染色观察心肌组织病理变化。结果照射后180天大鼠的饮食、行为、精神状态无可评价的异常变化,组间动物体重增加无明显差异。照射组大鼠心肌微循环灌注较未照射组明显减低。大鼠离体心脏功能检测示照射组大鼠LVSP、dp/dtmax、dp/dtmin均较未照射组明显减低。心肌组织HE染色显示照射组心肌细胞变性坏死、心肌纤维化。结论γ射线心脏局部照射可致心肌血流灌注降低,导致心脏功能下降。; 胡舜英苏畅马兰李力兵陈金龙王荣亮王华吴祖泽陈国伟王立生; 关键词：Γ射线心肌血流灌注心室功能

肝细胞生长因子在大鼠心肌细胞放射损伤中的抗凋亡作用被引量：4: 2007年; 目的研究肝细胞生长因子(HGF)对^(60)Coγ射线照射诱导的体外培养心肌细胞凋亡的保护作用。方法体外培养新生Wistar大鼠心肌细胞,分为未照射组(A组)、单纯照射组(B组)、HGF(20ng/ml)处理照射组(C组)、HGF(40ng/ml)处理照射组(D组)。B、C、D组分别用^(60)Coγ射线20Gy单剂量照射心肌细胞,C、D组细胞在照射前3h分别用终浓度为20、40ng/ml的HGF孵育。照射后48h检测培养上清中的LDH浓度,用流式细胞仪检测心肌细胞生长周期及细胞凋亡率变化。结果照射后48h,B、C、D组细胞培养上清中的LDH浓度较A组升高,C、D组的LDH浓度较B组下降;B、C、D组细胞生长周期较A组无明显变化,但凋亡细胞比例较A组升高,经HGF孵育的心肌细胞凋亡率则呈下降趋势。结论^(60)Coγ射线单剂量照射可造成体外培养的心肌细胞损伤,促进心肌细胞凋亡,HGF可抑制^(60)Coγ射线对体外培养的大鼠心肌细胞的促凋亡作用,其机制仍需进一步研究。; 胡舜英邱乐段海峰王华王荣亮郭子宽王立生陈国伟; 关键词：肝细胞生长因子 Γ射线心肌细胞凋亡

携带肝细胞生长因子基因重组质粒在大鼠体内的组织分布研究被引量：2: 2008年; 目的研究携带肝细胞生长因子基因的重组质粒(pUDKH)经肌肉注射给药后在大鼠体内的组织分布及其与大鼠基因组DNA的整合情况。方法二级Wistar大鼠雌雄各20只,按体重和取样时间的不同随机分为12h、24h、3d、7d、14d、21d的各实验组(给予pUDKH,2.0mg/kg)和注射后3d取样的对照组(给予PBS,200μl/只),依次将各组大鼠摘眼球取血后脱臼处死,按脑、心、肺、胸腺、肝、肠系膜淋巴结(MLN)、脾、肾、生殖腺、左腿肌肉、右腿肌肉的顺序取样。经典酚/氯仿抽提法提取各组织总DNA,应用紫外分光光度计测定其浓度和纯度,PCR方法检测其中的β肌动蛋白基因;巢式PCR检测各组织总DNA中pUDKH的分布情况;ApaLI酶切分离pUDKH分布阳性各组织中的pUDKH DNA和基因组DNA,巢式PCR检测pUDKH DNA与基因组DNA的整合情况。结果各组织总DNA浓度与纯度均符合实验需要,并适于采用PCR或巢式PCR方法进行体内组织分布及基因组DNA整合情况检测。巢式PCR检测显示,在各时间点的右腿肌肉与外周血、注射后3和7d的肝脏、3和14d的生殖腺、7d的胸腺、7和14d的MLN与左腿肌肉等组织中pUDKH分布均呈阳性,而在各时间点的脑、心、肺、脾、肾等组织中pUDKH分布均呈阴性。pUDKH分布阳性的各组织中均未检测到pUDKH DNA与基因组DNA的整合。结论pUDKH经肌肉注射给药后,在各时间点大鼠体内各组织中呈现不同的分布谱。在pUDKH分布阳性的各组织中,pUDKH DNA与基因组DNA发生随机整合的概率较低。; 杨月峰王荣亮刘银霞王华毕建进张庆林吴祖泽王立生; 关键词：肝细胞生长因子聚合酶链反应

^(60)Co γ射线照射对体外培养的心肌细胞活性及凋亡的影响被引量：6: 2007年; 目的研究60Co γ射线照射对体外培养的心肌细胞活性及凋亡的影响。方法体外培养新生大鼠心肌细胞,分为对照组和照射组,照射组细胞分别用60Co γ射线5Gy、10Gy、20Gy单剂量照射心肌细胞,照射后48h检测细胞培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)浓度,流式细胞仪检测60Coγ射线照射对体外培养的心肌细胞凋亡的影响,照射后48h及120h用结晶紫试验及MTT试验检测照射后心肌细胞活性变化,结果照射组LDH浓度明显高于未照射组,且随照射剂量增加而升高。照射后48h凋亡细胞较对照组升高,凋亡细胞比例与照射剂量呈正相关。结晶紫试验及MTT试验均提示照射后48h照射组心肌细胞活细胞活性与对照组无明显差异,照射后120h照射组活细胞活性明显低于对照组,且与照射剂量相关。结论60Co γ射线单剂量照射可直接损伤心肌细胞,降低体外培养的心肌细胞活性,促进心肌细胞凋亡。; 胡舜英蒋长盛陈国伟段海峰王荣亮吴斌郭子宽王立生; 关键词：Γ射线心肌细胞细胞活性凋亡

肝细胞生长因子对辐射后心肌细胞蛋白合成的保护作用被引量：1: 2007年; 目的研究肝细胞生长因子(HGF)对60Coγ射线照射体外培养的大鼠心肌细胞蛋白表达的影响。方法体外培养新生大鼠心肌细胞,分为未照射组、单纯照射组、HGF处理照射组,照射组细胞分别用60Coγ射线20Gy单剂量照射心肌细胞,HGF处理的照射组在照射前3h用终浓度为40ng/ml的HGF孵育。在照射后48h:(1)用蛋白检测试剂盒检测各组心肌细胞中的总蛋白含量;(2)流式细胞仪检测各组的细胞周期变化;(3)带绿色荧光蛋白基因的腺病毒(AdGFP)感染各组心肌细胞,感染后48h用流式细胞仪检测各组心肌细胞中所含的绿色荧光蛋白的荧光强度,间接比较各组心肌细胞中绿色荧光蛋白的生成量。结果照射后48h,照射组心肌细胞中总蛋白含量较未照射组减低(P<0.01),HGF处理的照射组心肌细胞中总蛋白含量较单纯照射组增高(P<0.05)。照射后96h、感染AdGFP后48h,照射组心肌细胞的绿色荧光强度明显弱于未照射组(P<0.01),HGF处理的照射组心肌细胞的绿色荧光强度较单纯照射组增强(P<0.01)。结论60Coγ射线单剂量照射抑制体外培养的心肌细胞蛋白合成,HGF可部分逆转60Coγ射线对心肌细胞蛋白生成的抑制作用。; 胡舜英付朝平段海峰陈金龙王荣亮吴斌郭子宽陈国伟王立生; 关键词：Γ射线心肌细胞蛋白合成

前列腺癌特异性启动子P(A)PTp的构建及评价被引量：1: 2011年; 目的构建前列腺癌特异性启动子PSAe(AREc)-PSMAe-TARPp[P(A)PTp],并在腺病毒水平评价其启动目的基因表达的效率和特异性。方法巢式PCR扩增基因组DNA获得PSAe的AREc区基因、PSMAe基因和TARPp基因,并依次连接获得嵌合启动子P(A)PTp。采用Adeasy系统构建并制备P(A)PTp启动增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)表达的重组腺病毒Ad-pSh-P(A)PTp-EGFP。不同感染复数(multi-plicity of infection,MOI)的Ad-pSh-CMV-EGFP感染各细胞系后48 h,流式细胞术确定最佳MOI;并以最佳MOI的Ad-pSh-P(A)PTp-EGFP感染各细胞系,检测EGFP的表达效率。结果 PCR成功扩增并连接获得嵌合启动子基因P(A)PTp。采用Adeasy系统,构建并制备了重组腺病毒Ad-pSh-P(A)PTp-EGFP。Ad-pSh-CMV-EGFP感染后,流式检测结果显示,前列腺癌细胞PC3和PC3M细胞的最佳MOI为100 MOI;而前列腺癌细胞DU145以及肝癌细胞SMMC-7721和HepG2为250 MOI。最佳MOI的Ad-pSh-P(A)PTp-EGFP感染后,EGFP在各细胞系中的表达效率[P(A)PTvsCMV]为:PC3(25.56%vs77.76%)、DU145(50.50%vs65.26%)、PC3M(30.81%vs89.70%)、HepG2(6.26%vs63.76%)、7721(2.27%vs67.84%)。结论成功构建前列腺癌特异性嵌合启动子P(A)PTp,并证实能在前列腺癌细胞中特异并有效地启动EGFP的表达。; 杨月峰王华肖凤君王荣亮李庆芳严俊吴祖泽王立生; 关键词：前列腺肿瘤基因表达腺病毒科绿色荧光蛋白质类流式细胞术

^(60)Coγ射线照射对心肌细胞蛋白表达的影响: 2009年; 目的研究60Coγ射线照射对体外培养的大鼠心肌细胞蛋白表达的影响。方法体外培养新生大鼠心肌细胞,分为未照射组(0 Gy组)5、Gy1、0 Gy2、0 Gy照射组,分别用60Coγ射线0 Gy5、Gy1、0 Gy2、0 Gy单剂量照射心肌,在照射后48 h:(1)用蛋白检测试剂盒检测各组心肌细胞中的总蛋白含量;(2)用流式细胞仪检测检测各组细胞的细胞周期变化;(3)用带绿色荧光蛋白基因的腺病毒(AdGFP)感染各组心肌细胞,感染后48 h用流式细胞仪检测各组心肌细胞中所含的绿色荧光蛋白的平均荧光强度(MFI),间接比较各组心肌细胞中绿色荧光蛋白的生成量。结果照射后48 h,各照射组心肌细胞中的总蛋白含量较未照射组减低,照射组心肌细胞的绿色荧光强度明显弱于未照射组(P<0.01),抑制程度与照射剂量呈正相关。结论60Coγ射线单剂量照射抑制体外培养的心肌细胞的蛋白合成。; 李冰胡舜英王荣亮吴斌郭子宽王立生; 关键词：Γ射线心肌细胞蛋白合成

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王荣亮

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