申庆祥
- 作品数：57 被引量：79H指数：5
- 供职机构：上海市计划生育科学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划上海市科委科技攻关项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生化学工程更多>>
- 猴Fertilinβ氨基端93肽基因的克隆及其在大肠杆菌中表达被引量：1
- 2001年
- Fertilin是一种异二聚体精子表面蛋白。业已证明,它在精卵反应中起着重要作用。成熟的Fertilinβ亚基的氨基端93肽含有与整联蛋白结合的整联蛋白配体区。该整联蛋白配体区与蛇毒整联蛋白配体区高度同源,它们能与细胞表面的整联蛋白相结合。 在此我们报道猴成熟Fertilinβ氨基端93肽基因的克隆和在大肠杆菌中的表达。用RT-PCR方法获得mFβNTP93基因,克隆人表达载体pT7-7/hCGβ的EcoRI和BamHI位点,该基因与hCGβ基因一起表达融合蛋白mFβNTP93-hCGβ,Western blotting结果显示,融合蛋白的表观分子量为33kDa,能与抗hCG抗体专一性结合。由于mFβNTP93基因与hCGβ基因相连,因此我们推测,mFβNTP93基因已获得表达。
- 王健沈卫英刘俊高尔生申庆祥
- 关键词：精卵融合基因克隆融合蛋白
- 人绒毛膜促性腺激素β亚基和补体C3d片段组成的单链多肽的生物合成被引量：1
- 1999年
- 利用PCR方法在hCGβcDNA 3’端产生一个Bam HI酶切位点,将此cDNA克隆入pBS HindⅢ和Bam HI位点之间。用T3、T7引物从正反两个方向同时测序,确证其序列正确性。将C3d3 cDNA从pSG5·PSG5·C3d3·YL·C3d3·YL切出与hCGβ串联构建成质粒pBS-hCGβ-C3d3。然后构建表达载体pVL1393-hCGβ-C3d3,并与线性化核型多角体杆状病毒(AcNPV)基因组DNA共转染昆虫细胞Sf9,以噬斑法筛选出重组病毒AcNPV-hCGβ-C3d3。以重组病毒AcNPV-hCGp-C3d3转染Sf9细胞,收集的条件培液经检测,确定其具有远远高于hCGβ-oLHα的结合活性。经hCGβ单抗亲和层析柱分离纯化后,以SDSPAGE和Western blot均证实了表达产物的存在,分子量与预期的hCGβ-C3d3一致,并具有hCGβ的免疫学活性。
- 余为宽申庆祥李大金周清平沈卫英王健
- 关键词：HCGΒ亚基补体生物合成
- hCGβ-CTP37多聚体的表达、纯化及其多克隆抗体的制备被引量：4
- 2005年
- 目的:研究重组hCGβCTP37(CTP)多聚体编码基因在大肠杆菌BL21中的表达及表达产物多克隆抗体的制备。方法:分别将3、4个CTP编码基因通过串联的方式连接起来组成多聚体编码基因,进而将多聚体基因亚克隆入载体pGEX4T2中获得含目的基因的表达质粒pGEX4T2(CTP)n(n=3,4)。表达质粒转入大肠杆菌BL21,目的蛋白在IPTG诱导下进行表达。表达产物经谷胱甘肽转硫酶(GST)亲和层析柱纯化、凝血酶酶解去除GST后,获得多肽CTP3和CTP4。将其用于免疫家兔以制备多克隆抗体,并用ELISA法检测抗体滴度。结果:菌株经IPTG诱导后产生了大量可溶性的融合蛋白GSTCTPn(n=3,4),SDSPAGE分析表明融合蛋白GSTCTP3和GSTCTP4的表观分子量分别为38.0kDa和42.2kDa,纯化后的融合蛋白的纯度达到了90%以上;纯化的融合蛋白经牛凝血酶酶解,利用制备型SDSPAGE纯化,回收获得的多肽CTP3和CTP4的纯度均大于80%;将多肽CTP3和CTP4多次免疫家兔后,ELISA检测结果证实产生了滴度较高的多克隆抗体。结论:CTP多聚体能刺激家兔产生特异性抗体,这提示CTP多聚体有可能作为避孕疫苗或肿瘤疫苗的免疫原。
- 喻光荣蒋俶冯文华沈卫英蒋文珏申庆祥
- hCGb-CTP多聚体-3C3d融合蛋白在巴氏毕赤酵母中的表达被引量：2
- 2006年
- 目的:在巴氏毕赤酵母细胞中表达hCGβ-(CTP)n(n=3,4)-3C3d融合蛋白。方法:将(CTP)n(n=3,4)基因与分子佐剂C3d基因的三聚体连接后,克隆入载体pPIC9K得到表达质粒pPIC9Khis6(CTP)n(n=3,4)3C3d,经限制性内切酶酶切鉴定及DNA测序确认后电转入酵母细胞中进行表达。结果:在酵母细胞内检测到目的基因的表达产物,Westernblot结果显示它们的分子量分别为125kD和138kD左右。结论:运用巴氏毕赤酵母表达系统成功表达了hCGβ-(CTP)n(n=3,4)-3C3d融合蛋白,为进一步研究其免疫原性和用作抗肿瘤疫苗奠定了基础。
- 冯文华石燕喻光荣沈卫英蒋俶申庆祥
- 关键词：C3D毕赤酵母
- 重组人血小板第4因子生物学活性的分析
- 1997年
- 目的：分析重组人血小板第４因子（ｒｈＰＦ４）的生物学活性。方法：采用小鼠骨髓巨核细胞以及人巨核细胞白血病细胞株，从体内和体外多方面比较天然ＰＦ４和ｒｈＰＦ４的生物学活性。结果：此ｒｈＰＦ４具有与天然ＰＦ４相同的抑制小鼠骨髓巨核细胞祖细胞生长、减少集落形成的能力，这种抑制作用能被肝素中和；ｒｈＰＦ４对人巨核细胞白血病细胞株Ｍｅｇ－０１生长也有抑制作用。结论：ｒｈＰＦ４可取代天然ＰＦ４应用于临床及科研。
- 韩芝燕申庆祥申庆祥
- 关键词：血小板第4因子生物学活性
- 腺病毒E4启动子结合蛋白-4(E4BP4)基因在小鼠胚胎着床期间子宫组织中的表达被引量：2
- 2006年
- 腺病毒E4启动子结合蛋白-4(E4BP4)是哺乳动物细胞核内的一种碱性亮氨酸拉链(bZIP)型转录因子,参与调控细胞的存活和增殖。前期研究表明,它在孕第5天的小鼠着床位点有明显的高表达。本文分别应用Northem blot、in situ杂交、Western blot和免疫组织化学技术,对E4BP4基因在小鼠妊娠初始期子宫、着床期胚胎着床位点和非着床位点的表达情况进行了研究。观察发现：在小鼠妊娠初始期,E4BP4基因在子宫组织中的表达逐步上调；至胚胎着床期间,其在胚胎着床位点的表达水平进一步提高,并明显高于非着床位点；该基因的表达不依赖于胚胎,人工蜕膜化可诱导其表达：E4BP4 mRNA和E4BP4蛋白分子都主要分布于子宫腔周围的基质细胞和蜕膜细胞。上述结果提示E4BP4基因可能通过促进着床位点基质细胞的增殖和抑制蜕膜细胞的凋亡而参与胚胎着床过程的调控。
- 王健黄哲平杨增明沈维雄左嘉客申庆祥
- 关键词：小鼠子宫胚胎着床
- 受精蛋白β在人精子表面的免疫组织化学定位被引量：6
- 2001年
- 以人受精蛋白β整联蛋白配体区为抗原免疫小鼠并制备单抗,应用免疫组化方法研究了受精蛋白β在不同状态人精子表面的分布规律。结果表明受精蛋白β散在分布于新鲜人精子的头部,获能后则向顶体区集中,顶体反应过程中同时出现表达量及分布位置的急剧变化,最后定位于精子头后部。其分布规律与动物受精蛋白有所不同。受精蛋白β在人精子表面分布的位置及其变化揭示其在受精过程中的重要作用。
- 丁蓓蓓蒋俶蒋文珏王健高尔生左嘉客申庆祥
- 关键词：人精子获能免疫组织化学定位
- E4BP4基因在胚胎着床过程中的功能及其应用
- 本发明公开了E4BP4基因的新用途，其可被用作调节胚胎着床(即胚胎植入)的调节剂。在胚胎着床前期阻断E4BP4基因的表达或封闭其表达产物E4BP4蛋白的生物功能，可抑制胚胎着床，反之则促进着床；在胚胎着床后期阻断E4BP...
- 王健申庆祥黄哲平
- 文献传递
- 重组人绒毛膜促性腺激素β-亚基对C57BL小鼠免疫应答反应及抗血清特征的研究
- 1997年
- 采用福氏性剂，对C57BL小鼠进行重组hCGβ和天然hCGβ免疫应签反应的比较研究，结果表明：两者引发的抗血清性质相似，与hCG有较高的亲和力（K（γβ）≈5．86×108／mol／L，Kaβ≈8．18×108／mol／L）；抗血清能有效地抑制（125）I－hCG与睾丸受体的结合，结果提示重组hCGβ抗血清与天然hCGβ抗血清相似，具有中和hCG的生物活性能力，重组hCGβ可作为免疫避孕疫苗的抗原。
- 周清平申庆祥丁训诚
- 关键词：HCGΒ免疫反应避孕疫苗
- 猪卵透明带-3α蛋白在大肠杆菌中表达的研究被引量：4
- 2000年
- 目的 :通过原核表达系统获得研制ZP疫苗的靶抗原。方法 :用PCR方法删除猪卵透明带 3α(pZP3α)cDNA 5’端非编码区碱基顺序。在扩增的该基因 5’端小片段与双酶切 3’端大片段在ApaI位点相连后 ,通过双酶切位点将读框完整的目的基因定向插入pBV2 2 1表达质粒PRPL 启动子下游的多克隆区。结果 :此重组表达质粒转化宿主菌后经热诱导培养 ,可在SDS PAGE胶上观察到 6 1kD的特异蛋白表达条带 ,而且它在Westernblot鉴定实验中能被抗pZPIgGs识别。结论
- 徐万祥邱德义贾小明申庆祥顾少华倪晓华刘建平牟忠明谢毅
- 关键词：大肠杆菌基因表达避孕疫苗
