袁晓梅
- 作品数：6 被引量：12H指数：2
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- SLC修饰肿瘤诱导外周血单个核细胞增殖与抗瘤作用
- 目的:本实验将转染次级淋巴组织趋化因子(SLC)的肿瘤细胞与外周血单个核细胞(PBMC)共培养后, 探讨致敏后PBMC凋亡及抗肿瘤效应。方法:①转染SLC的肿瘤细胞或未转染SLC的肿瘤细胞经丝裂霉素C处理,分别与PBMC...
- 吴砂赵晓平彭吉林王敏李文涵袁晓梅邢薇刘静雷萍朱慧芬沈关心
- 关键词：次级淋巴组织趋化因子PBMC
- 文献传递
- pAd-SIG腺病毒质粒构建及其在MCF-7细胞中的表达被引量：1
- 2007年
- 目的含人生长抑素受体2亚型(human somatostatin receptor subtype2,hSSTr2)和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)的腺病毒重组质粒的构建及表达。方法采用PCR方法将hSSTr2以及IRES-EGFP基因亚克隆至穿梭质粒pShuttle-CMV中,获得pShuttle-CMV/hSSTr2-EGFP,经PmeⅠ酶切,去磷酸化后转化含pAdeasy-1的超感受态BJ5183菌,细菌内同源重组构建腺病毒质粒pAdeasy-1/hSSTr2-EGFP(pAd-SIG),将其转染HEK293细胞进行病毒包装与滴度测定。重组腺病毒感染MCF-7细胞,流式细胞术检测其表达。结果酶切、PCR及基因测序证实重组腺病毒质粒pAd-SIG构建成功,病毒滴度为8.2×109IU/ml,流式细胞术结果显示hSSTr2在MCF-7细胞中表达阳性率为86.59%。结论成功构建了重组腺病毒质粒pAd-SIG,并能在真核细胞表达,为体内外研究hSSTr2效应提供了基础。
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- 关键词：同源重组
- 次级淋巴组织趋化因子浓度梯度抑制肿瘤细胞免疫逃逸被引量：4
- 2007年
- 目的探讨人次级淋巴组织趋化因子(SLC)浓度梯度对肿瘤细胞免疫逃逸的影响。方法根据SLC浓度梯度,实验分6组;流式细胞术检测肿瘤细胞HLA-Ⅰ类分子的表达、肿瘤细胞凋亡,Western blot检测肿瘤细胞胞内BCL-2表达,ELISA检测肿瘤细胞培养上清中生长转化因子β(TGF-β)水平。结果在一定浓度范围内,随SLC浓度增加,肿瘤细胞的HLA-Ⅰ类分子表达增高,肿瘤细胞凋亡增多;BCL-2表达增高,而肿瘤细胞TGF-β分泌水平降低。结论SLC具有抑制肿瘤细胞免疫逃逸的作用。
- 吴砂袁晓梅朱慧芬沈关心
- 关键词：次级淋巴组织趋化因子肿瘤细胞免疫逃逸
- EGFR特异性单链抗体与靶细胞结合的特异性被引量：2
- 2006年
- 目的:检测EGFR特异性单链抗体F4-scFv与EGFR阳性及阴性细胞结合特性。方法:提取细菌周质腔蛋白经N i-NTA柱纯化F4-scFv;采用流式细胞术及W estern b lot检测F4-scFv与EGFR阳性及阴性细胞结合的特异性。结果:N i2+柱纯化的F4-scFv经SDS-PAGE可见分子量为36 kDa单一条带,F4-scFv可与EGFR阳性细胞CHO-EGFR-GFP1、A431及MDA-MB-231特异性结合,而不与EGFR阴性细胞CHO-K1及SKOV3结合。结论:F4-scFv可与天然表达EGFR的细胞特异性结合,为其靶向抗肿瘤研究奠定了基础。
- 赵晓蓉戴维彭吉林黄鹤袁晓梅刘静朱慧芬沈关心
- 关键词：表皮生长因子受体单链抗体
- 不同浓度的次级淋巴组织趋化因子对外周血单个核细胞生物学功能的影响被引量：5
- 2007年
- 目的探讨人次级淋巴组织趋化因子(SLC)浓度梯度对外周血单个核细胞(PBMC)生物学功能的影响。方法根据SLC浓度,实验分为6组,通过趋化实验检测PBMC的趋化,并通过流式细胞术检测PBMC凋亡及增殖能力,ELISA检测PBMC培养上清中IL-10和IFN-γ的表达。结果一定浓度范围内,SLC可增强PBMC的迁移、抗凋亡、增殖及IFN-γ表达能力。降低IL-10的表达水平,证明上述作用具有浓度依赖性。结论SLC可通过促进PBMC迁移,增强其增殖,诱导Th1类细胞分化,提高了机体的免疫应答。
- 吴砂邢薇袁晓梅雷萍朱慧芬沈关心
- 关键词：次级淋巴组织趋化因子浓度梯度PBMC
- 抗TfR-scFv-EGFP融合蛋白的构建与表达
- 2009年
- 目的:抗转铁蛋白受体单链抗体(TfR-scFv)-EGFP融合蛋白真核表达载体的构建与表达。方法:设计两对引物引入连接肽(Gly4Ser)3以及酶切位点HindⅢ和BamHⅠ,采用重叠延伸PCR扩增与构建具有前导肽的L-VH-Linker-VL单链抗体基因,亚克隆至pEGFP-N1,转染COS-7细胞,倒置相差荧光显微镜下观察荧光蛋白表达,流式细胞术(FCM)检测细胞分泌上清与乳腺癌细胞MCF-7及黑色素瘤细胞A375结合活性。结果:测序表明获得了正确的L-VH-Linker-VL单链抗体基因序列;亚克隆至pEGFP-N1后,表达载体转染COS-7细胞,经荧光显微镜观察转染细胞,及通过流式细胞术(FCM)检测细胞分泌上清,证实抗TfR-scFv-EGFP融合蛋白在转染细胞中分泌性表达,并能够与天然高表达TfR的细胞特异性结合。结论:抗TfR-scFv-EGFP融合蛋白真核表达载体构建成功,其表达产物具有与TfR阳性细胞结合的活性。
- 代维刘静黄鹤文雪袁晓梅雷萍朱慧芬沈关心
- 关键词：转铁蛋白受体单链抗体重叠延伸PCR
