邢薇
- 作品数：10 被引量：14H指数：2
- 供职机构：武汉大学人民医院更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- SLC修饰肿瘤诱导外周血单个核细胞增殖与抗瘤作用
- 目的:本实验将转染次级淋巴组织趋化因子(SLC)的肿瘤细胞与外周血单个核细胞(PBMC)共培养后, 探讨致敏后PBMC凋亡及抗肿瘤效应。方法:①转染SLC的肿瘤细胞或未转染SLC的肿瘤细胞经丝裂霉素C处理,分别与PBMC...
- 吴砂赵晓平彭吉林王敏李文涵袁晓梅邢薇刘静雷萍朱慧芬沈关心
- 关键词：次级淋巴组织趋化因子PBMC
- 文献传递
- pAd-SIG腺病毒质粒构建及其在MCF-7细胞中的表达被引量：1
- 2007年
- 目的含人生长抑素受体2亚型(human somatostatin receptor subtype2,hSSTr2)和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)的腺病毒重组质粒的构建及表达。方法采用PCR方法将hSSTr2以及IRES-EGFP基因亚克隆至穿梭质粒pShuttle-CMV中,获得pShuttle-CMV/hSSTr2-EGFP,经PmeⅠ酶切,去磷酸化后转化含pAdeasy-1的超感受态BJ5183菌,细菌内同源重组构建腺病毒质粒pAdeasy-1/hSSTr2-EGFP(pAd-SIG),将其转染HEK293细胞进行病毒包装与滴度测定。重组腺病毒感染MCF-7细胞,流式细胞术检测其表达。结果酶切、PCR及基因测序证实重组腺病毒质粒pAd-SIG构建成功,病毒滴度为8.2×109IU/ml,流式细胞术结果显示hSSTr2在MCF-7细胞中表达阳性率为86.59%。结论成功构建了重组腺病毒质粒pAd-SIG,并能在真核细胞表达,为体内外研究hSSTr2效应提供了基础。
- 袁晓梅何勇雷萍邢薇吴砂代维朱慧芬沈关心
- 关键词：同源重组
- 不同浓度的次级淋巴组织趋化因子对外周血单个核细胞生物学功能的影响被引量：5
- 2007年
- 目的探讨人次级淋巴组织趋化因子(SLC)浓度梯度对外周血单个核细胞(PBMC)生物学功能的影响。方法根据SLC浓度,实验分为6组,通过趋化实验检测PBMC的趋化,并通过流式细胞术检测PBMC凋亡及增殖能力,ELISA检测PBMC培养上清中IL-10和IFN-γ的表达。结果一定浓度范围内,SLC可增强PBMC的迁移、抗凋亡、增殖及IFN-γ表达能力。降低IL-10的表达水平,证明上述作用具有浓度依赖性。结论SLC可通过促进PBMC迁移,增强其增殖,诱导Th1类细胞分化,提高了机体的免疫应答。
- 吴砂邢薇袁晓梅雷萍朱慧芬沈关心
- 关键词：次级淋巴组织趋化因子浓度梯度PBMC
- 抗人胎盘酸性铁蛋白单链抗体的构建、表达与鉴定被引量：1
- 2006年
- 目的:制备人胎盘酸性铁蛋白(PAF),构建、表达并鉴定抗人PAF单链可变区抗体片段(scFv)。方法:设计以SfiⅠ、NotⅠ为酶切位点、以(Gly4Ser)3为linker的2对引物,从抗人PAF单克隆抗体可变区基因的克隆载体中扩增VH和VL基因,用重叠延伸PCR在VH和VL基因间引入连接短肽,构建VH-linker-VL的scFv基因。经SfiⅠ、NotⅠ酶切后克隆到原核分泌型表达载体pUC19/119上,转化大肠杆菌TG1和筛选后测序验证,IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定其相对分子质量(Mr)。以人PAF为抗原,scFv为一抗,抗His单克隆抗体为二抗,间接ELISA鉴定其抗体活性。结果:重叠延伸PCR扩增产物经凝胶电泳可见约700bp的条带,DNA序列分析证明2株抗体具有完整的scFv序列,并含有c-myc和His。IPTG诱导阳性菌表达产物经SDS-PAGE鉴定有Mr约27000的显示条带,符合scFv与表达标签融合蛋白的理论值;间接ELISA证明表达产物可与PAF结合。结论:成功构建并表达了抗人PAF单链抗体,为进一步建立检测PAF的间接ELISA奠定了基础。
- 邢薇刁智娟肖代雯黄宇沈欣雷萍周春朱慧芬沈关心
- 关键词：重叠延伸PCR间接ELISA
- 肝癌细胞特异性结合双价抗体的构建表达与鉴定被引量：1
- 2006年
- 目的构建和表达与肝癌细胞特异结合的双价单链抗体(bivalentsingle-chainFv,BsFv),并鉴定该双价抗体的生物活性。方法以与肝癌细胞特异结合的单链抗体(scFv)为模板,设计引物引入中间连接肽(G4S)及酶切位点AscI,通过聚合酶链反应(PCR)方法扩增出两个scFv片段,将其连入原核表达载体pAB1;构建的表达载体转化大肠埃希菌TG1,挑取单克隆细菌进行扩增,提取质粒酶切、测序鉴定。阳性菌经IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE,Westernblot鉴定,间接免疫荧光流式细胞术(FACS)测定与肝癌细胞特异结合的特性。结果经酶切鉴定以及DNA测序结果表明该BsFv构建成功,SDS-PAGE、Westernblot鉴定表明表达蛋白相对分子量与BsFv理论值一致,且表达产物同亲本scFv比较,与肝癌细胞特异结合活性增强。结论BsFv构建成功,BsFv较scFv具有明显优势,为其用于临床肿瘤的诊断和治疗奠定了基础。
- 黄宇余冰邢薇沈昕肖代雯刁智娟刘静代维赵晓蓉雷萍沈关心
- 关键词：单链抗体肝癌细胞双价抗体
- 人CCR7真核表达载体构建及对HeLa细胞HLA-I表达的影响
- 2009年
- 目的:构建人CCR7真核表达载体,建立稳定转染CCR7的HeLa细胞株,初步探讨肿瘤细胞表达HLA-I类分子表达改变及相关机制。方法:从人脾脏cDNA扩增出CCR7,装入pDsRed2-N1,脂质体转染HeLa细胞。CCR7配体CCL21作用后,流式细胞术(FCM)检测肿瘤细胞表达HLA-I的表达,萤虫素酶报告基因系统检测NF-κB活化。结果:经PCR、酶切和测序证实,含CCR7真核表达载体成功构建。G418筛选后获得稳定表达CCR7蛋白的HeLa细胞。FCM证实HeLa细胞表达HLA-I类分子水平增高,萤虫素酶报告基因系统证实NF-κB活化明显。结论:成功构建人CCR7真核表达载体,CCR7促进肿瘤细胞表达HLA-I类分子,诱导肿瘤细胞NF-κB活化。
- 吴砂张志丽左大明陈政良邢薇雷萍沈关心
- 关键词：CCR7HELAHLA-INF-ΚB
- 抗TfR单链抗体—AP融合蛋白的构建、表达与鉴定被引量：1
- 2006年
- 目的构建、表达和鉴定抗转铁蛋白受体(TfR)单链抗体———碱性磷酸酶(AP)融合蛋白。方法用SfiⅠ和NotⅠ分别酶切抗转铁蛋白受体scFv表达质粒pUC19/119,获得scFv基因,直接亚克隆到表达载体pDAP2中,在TG1菌中表达scFvAP融合蛋白,SDSPAGE分析scFvAP的分子量,酶免疫测定鉴定其抗体和酶活性。结果scFvAP融合蛋白表达载体经scFv特异性引物PCR扩增,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳可见约700bp条带,符合scFv基因理论值大小,IPTG诱导产物经SDSPAGE分析可见约为75ku的蛋白条带,符合scFvAP融合蛋白分子量的理论值大小,直接细胞ELISA测定证明表达产物scFvAP融合蛋白具有结合人TfR和AP活性的双重功效。结论抗人scFvAP融合蛋白表达载体构建成功,表达产物具有结合人TfR和AP活性的双重功效,为其临床检测应用奠定了基础。
- 肖代雯黄宇沈昕邢薇刁智娟刘静雷萍陶娟沈关心
- 关键词：转铁蛋白受体单链抗体碱性磷酸酶融合蛋白
- 抗TfR双价抗体的构建、表达及其鉴定
- 目的:抗转铁蛋白受体双价抗体(BsFv)的构建,表达及其与细胞结合活性与特异性鉴定。方法:①以抗转铁蛋白受体scFv为模板,设计引物引入中间连接肽(G4S)及酶切位点AscI,扩增出两个 scFv片段,将其连接,并克隆至...
- 肖代雯沈昕邢薇黄宇雷萍朱慧芬刁智娟刘红云沈关心
- 关键词：转铁蛋白受体双价抗体单链抗体
- 文献传递
- 抗人转铁蛋白受体单克隆抗体体外抗瘤效应研究被引量：3
- 2008年
- 目的:探讨抗人转铁蛋白受体(TfR)单克隆抗体(mAb)体外抗瘤效应。方法:采用CFSE染色、PI-AnnexinⅤ染色和PI染色,通过流式细胞术分析抗人TfR mAb对高表达的人肝癌细胞系HepG2和人乳腺癌细胞系MCF-7增殖、凋亡和周期的影响;通过MTT法检测抗人TfR mAb联合化疗药物对HepG2和MCF-7细胞增殖的抑制作用。结果:抗人TfRmAb能抑制HepG2和MCF-7细胞的增殖,并诱导其凋亡和S期阻滞;与化疗药物联用可增强其对肿瘤细胞增殖的抑制作用。结论:抗人TfR mAb具有良好的体外抗瘤效应。
- 沈昕邢薇何峰容李黎刘静朱慧芬雷萍沈关心
- 关键词：转铁蛋白受体单克隆抗体
- 抗转铁蛋白受体双价抗体的构建、表达及鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的:抗转铁蛋白受体(TfR)双价抗体(bsFv)构建、表达及其与细胞结合的活性鉴定。方法:以抗TfR的单链抗体(scFv)为模板,设计引物引入中间连接肽(G4S)及酶切位点AscI,通过PCR方法扩增两条scFv片段,将其连接并克隆至原核表达载体pAB1,转化大肠杆菌TG1,阳性菌经IPTG诱导表达,FCM检测bsFv与K562,HepG2肿瘤细胞结合的活性及特异性。结果:酶切鉴定及DNA测序证明该bsFv构建成功;SDS-PAGE、Western blot鉴定表明表达蛋白分子量与bsFv理论值一致;FCM结果证明bsFv可与K562,HepG2肿瘤细胞特异性结合,且结合的阳性率较scFv有所提高。结论:成功构建了抗转TfR的bsFv,且能与K562,HepG2肿瘤细胞特异性结合。
- 肖代雯朱慧芬沈昕邢薇黄宇雷萍黄韬王国斌沈关心
- 关键词：转铁蛋白受体单链抗体双价抗体
