丁银巧
- 作品数：7 被引量：23H指数：4
- 供职机构：中国农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项内蒙古自治区自然科学基金国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 口蹄疫病毒非结构蛋白3AB基因在毕赤酵母中的表达被引量：2
- 2006年
- 目的利用毕赤酵母系统表达口蹄疫病毒(FMDV)非结构蛋白3AB,用于FMDV感染与疫苗免疫动物的鉴别诊断和3AB蛋白功能研究。方法采用PCR方法从pGEM-T-Easy-3ABC质粒中扩增3AB基因,将其插入pPICZαA酵母表达载体中,构建的重组表达质粒线性化后电转入毕赤酵母GS115中,在0.5%甲醇诱导下表达3AB蛋白,运用SDS-PAGE和ELISA方法鉴定表达蛋白。结果成功构建了pPICZαA-3AB重组酵母表达质粒,并转化入毕赤酵母GS115中,SDS-PAGE和ELISA鉴定结果表明,重组酵母菌株表达出约19kD的3AB蛋白,与针对FMDV的3AB蛋白单克隆抗体有特异性反应。结论在毕赤酵母中成功表达了FMDV3AB蛋白,与抗FMDV3AB蛋白单克隆抗体具有反应性。
- 丁银巧张剑锐张云霞曹振孙明田克恭
- 关键词：口蹄疫病毒非结构蛋白毕赤酵母真核表达
- 犬细小病毒VP2基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达被引量：5
- 2007年
- 目的表达犬细小病毒VP2蛋白(CPV VP2),用于犬细小病毒病的诊断、疫苗研制和VP2蛋白功能研究。方法采用PCR方法对CPV VP2基因进行扩增,将CPV VP2基因克隆到毕赤酵母(Pichia pastoris)分泌表达载体pPICZαA中,构建真核重组表达载体pPICZαA-VP2,将该重组质粒线性化后,转化毕赤酵母菌GS115中,在甲醇诱导下表达CPV VP2,SDS-PAGE和Western blotting鉴定表达蛋白。结果成功扩增了CPV VP2基因,构建了真核重组表达载体pPICZαA-VP2在毕赤酵母菌中表达出约64.35 kD蛋白。Western blotting鉴定表明,表达VP2蛋白与犬细小病毒阳性血清有反应性。结论在毕赤酵母中成功地表达了CPV VP2蛋白,能被犬细小病毒阳性血清识别。
- 张云霞丁银巧赵铁柱杨璐孙明曹振王传彬陈西钊田克恭
- 关键词：毕赤酵母真核表达
- 内蒙古地区鸡源霉形体的分离和鉴定被引量：6
- 1998年
- 本实验对内蒙古呼和浩特和包头地区某些鸡场病鸡取样进行霉形体的分离及其生物学特性的研究。结果分离到３株霉形体，其中２株为鸡败血霉形体（Ｍｇｏｐｌａｓｍａｇａｌｉｓｅｐｔｉｕｍ，ＭＧ），１株为鸡霉形体（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａｇａｌｉｎａｒｕｍ）。所鉴定的菌株符合相应菌种的形态。
- 丁银巧乌尼郝永清周雨霞
- 关键词：霉形体
- 内蒙古地区鸡源霉形体分离株的免疫电镜观察
- 1997年
- 从内蒙古呼和浩特和包头地区病鸡和病死鸡中分得三株疑似霉形体(BR_1、BR_2、H_3),经电镜和免疫电镜观察,初步鉴定 BR_1株和 H_3株为鸡败血霉形体(Mycoplasma gallisepticum,MG)。
- 丁银巧郝永清张爱荣张福仁乌尼
- 关键词：鸡败血霉形体分离株免疫电镜观察标准菌株分离菌株阳性血清
- AsiaⅠ型口蹄疫病毒VP1基因在昆虫细胞/杆状病毒中的表达被引量：4
- 2009年
- 利用杆状病毒表达系统对AsiaⅠ型口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)VP1基因在Sf9昆虫细胞中进行表达,为研究AsiaⅠ型FMDVVP1蛋白功能及建立AsiaⅠ型FMDV血清学诊断方法奠定基础。采用PCR方法从pGEM-T-Easy-AsiaⅠ型VP1质粒中扩增VP1基因,将其插入杆状病毒转座载体pFastBacHTA,构建的重组质粒pFast-BacHTA-VP1再转入DH10Bac感受态细胞,经三重抗性与蓝白斑筛选,获得杆状病毒重组质粒Bacmid-VP1,然后转染Sf9昆虫细胞。PCR鉴定证实VP1基因正确地插入到Bacmid中,成功构建了杆状病毒重组质粒Bacmid-VP1,SDS-PAGE和Western-blotting检测结果表明,VP1基因在Sf9昆虫细胞中表达出约26.5ku的VP1蛋白。将可溶性表达的融合蛋白用Ni-NTA亲和层析方法进行纯化,通过ELISA分析,能特异性地检测出AsiaⅠ型口蹄疫病毒阳性血清。AsiaⅠ型FMDV VP1基因在杆状病毒表达系统中的成功表达为AsiaⅠ型FMDV VP1蛋白的抗原性及血清学抗体水平检测研究奠定了基础。
- 丁银巧张文杰张云霞赵铁柱孙明遇秀玲赵德明田克恭
- 关键词：VP1基因杆状病毒真核表达
- 禽流感病毒核蛋白基因的原核表达及其生物学活性分析被引量：1
- 2007年
- 周迎春孙明赵铁柱蒲娟丁银巧王帅吴清民刘金华
- 关键词：禽流感病毒核蛋白基因原核表达世界动物卫生组织A型流感病毒
- 禽流感病毒H5N1亚型NS1基因在大肠杆菌中的表达被引量：5
- 2004年
- 目的表达H5N1亚型禽流感病毒(AIV)NS1蛋白,用于AIV感染与注射灭活疫苗鸡的鉴别诊断和NS1蛋白功能研究。方法采用RT_PCR方法对H5N1亚型AIVNS1基因进行扩增,将PCR产物克隆于pGEM_T_easy载体,将该基因插入pGEX_4T_1中构建NS1基因原核表达载体,转化BL21大肠杆菌后,在IPTG诱导下表达NS1蛋白,Westernblot鉴定表达NS1蛋白。结果成功克隆H5N1亚型AIV的NS1基因,其核苷酸序列长度为690bp,编码230个氨基酸残基。构建NS1基因原核表达载体在大肠杆菌内表达出约51×103的NS1融合蛋白。Westernblot鉴定表明表达NS1蛋白与H7N2AIV感染鸡血清有反应性。结论在大肠杆菌中成功表达了H5N1亚型AIVNS1基因蛋白,具有与感染H7N2亚型AIV阳性血清反应原性。
- 孙明赵铁柱王传彬李纯玲丁银巧王宏伟陈西钊田克恭
- 关键词：蛋白功能NS1基因大肠杆菌反应原性H5N1亚型阳性血清
