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何华坤: 作品数：16 被引量：30H指数：3; 供职机构：暨南大学生命科学技术学院生物工程学系更多>>; 发文基金：广东省自然科学基金国家自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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异基因造血干细胞移植后人巨细胞病毒感染临床毒株UL54基因的克隆及序列分析被引量：2: 2005年; 目的　研究异基因造血干细胞移植(AlloHSCT)后感染人巨细胞病毒(HCMV)临床病毒株UL54基因的克隆与鉴定。方法　从异基因造血干细胞移植后感染HCMV的患者体内分离出HCMV临床毒株,根据GenBank提供的实验室标准病毒株HCMVAD169UL54基因DNA全序列及有关文献,从该临床毒株DNA中扩增分离出UL54基因片段,并克隆入pEGM3Z载体。对重组体pEGM3Z UL54进行测序鉴定,并进行初步的序列分析。结果　从临床病毒株中扩增出约3728bp的片段,克隆产物经琼脂糖凝胶电泳及直接测序鉴定,证实为HCMVUL54基因,其序列保守区域与GenBank报道AD169基本一致,但在第519、618、723、910、1188、1641、2070、2278、2279、2442、3140等11个位点发生碱基突变,涉及到编码氨基酸C304R、T760N、Y1047C、R1054K等位点发生改变,其中T760N为UL54保守区域改变。结论　成功克隆出AlloHSCT后感染野生型人巨细胞病毒的UL54基因,初步的序列分析证实其存在11个碱基发生突变,并导致编码产物4个氨基酸位点发生改变。; 田传军李月琴王波叶铁真张纯青苏运贞何华坤周天鸿; 关键词：异基因造血干细胞移植人巨细胞病毒

M1RNA核酶抑制HCMV IE1和IE2基因表达的体内研究: ＜正＞人类巨细胞病毒（HCMV）是重要的母胎感染病毒之一。本文研究可抑制 HCMV IE1和 IE2 基因表达的 M1RNA 核酶。为在细胞内可表达出 M1RNA 核酶,我们将作用于 HCMV 的 IE1和 IE3重叠区...; 李月琴周天鸿王波李弘剑何华坤; 文献传递

核酶对人巨细胞病毒mRNA片段的体外切割被引量：8: 2003年; 引导序列GSs(GuideSequences)是能与mRNA互补 ,引导核酶RNaseP催化核心M1RNA对互补区域特异切割的小片段游离RNA。针对人巨细胞病毒HCMV(humancytomegalovirus)DNA聚合酶mRNA序列设计GS ,共价结合到大肠杆菌来源M1RNA中 ,构建成M1GS T7核酶。通过对巨细胞病毒DNA聚合酶亚克隆片段转录产物体外切割实验。; 陈浩军李弘剑周天鸿周乐平何华坤魏威程华胜; 关键词：核酶人巨细胞病毒体外切割 DNA聚合酶

RNase P核酶对人巨细胞病毒UL54基因mRNA体外切割作用被引量：2: 2004年; 外部引导序列(EGSs)是mRNA靶序列互补并引导RNase P切割的小RNA片段。我们设计与人巨细胞病毒HCMV(Human Cytomegalovirus) UL54基因mRNA序列互补的EGSs,将其与大肠杆菌来源RNase P催化核心M1 RNA构建成M1GS核酶。通过对UL54基因亚克隆片转录产物体外切割研究,证实该核酶具备对UL54 mRNA片段的特异切割能力,可以发展成为一种抗病毒试剂。; 周乐平李弘剑陈浩军李月琴何华坤王波周天鸿; 关键词：MRNA

核酶M1GS-T6对HCMV UL97基因RNA片段体外切割作用被引量：3: 2007年; 目的:研究M1GS核酶对HCMV UL97 mRNA的体外切割作用。方法:针对HCMV UL97 mRNA T6位点设计与之互补的引导序列(Guide Sequence,GS),将其共价结合至大肠杆菌核酶P催化亚基(M1 RNA)的3′末端,构建M1GS-T6核酶,并用其对UL97基因亚克隆片段转录产物进行体外靶向切割实验。结果:核酶M1GS-T6具备特异性切割靶分子UL97mRNA的能力。结论:核酶M1GS-T6具备特异性切割活性,为进一步研究HCMV病毒基因功能和治疗提供了新的途径。; 张欣李弘剑李月琴何华坤邹奕周天鸿

PHEMA—MMA材料的细胞毒性试验被引量：6: 2003年; 用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)及直接接触细胞培养法对不同配比的甲基丙烯酸羟乙酯(HENA)和甲基丙烯酸甲酯(MMA)共聚物PHEMA-MMA进行了细胞毒性试验,结果一致,都为0级。表明该聚合物同样具有良好的生物相容性。两种方法比较,我们认为,直接接触细胞培养法对于生物材料毒性评估而言,方法简单、结果直观、效率更高。; 覃百花黄海狄静芳何华坤; 关键词：生物材料细胞毒性细胞培养

大肠杆菌来源核酶P M1亚单位对人巨细胞病毒磷酸转移酶基因mRNA片段的体外切割研究: 背景：大肠杆菌来源RNase P为一催化tRNA前体5′端成熟的核糖蛋白复合体,催化核心M1 RNA由377个核苷酸组成,可在一定盐离子环境下体外单独对RNA底物进行特异切割。RNase P为结构识别酶,其底物至少包括两...; 何华坤; 关键词：核酶人巨细胞病毒; 文献传递

BMPR-Ⅱ基因及其研究进展: 2002年; 骨形成蛋白受体-Ⅱ(bone morphogenetic protein re-ceptor Ⅱ,BMPR-Ⅱ)基因编码一个跨膜丝氨酸/苏氨酸激酶受体,在骨形成蛋白(BMP)信号传递中起重要作用.近年来,在BMPR-Ⅱ作用机制,及其与遗传病、骨的形成与再生、哺乳动物的发育、肿瘤的转移恶化、早期神经系统的分化等关系的研究中,取得了一些重要的进展,本文就BMPR-Ⅱ基因与肺动脉高压及在肿瘤细胞中的表达方面进行了综述.; 何华坤周天鸿; 关键词：基因结构肿瘤细胞

利用PCR-ASO技术分析MR基因多态性及与妊高征相关性研究: 2003年; 目的　探讨中国人群中盐皮质激素受体基因 (MR)外显子 3上C944T多态性与妊高征的相关性。方法　通过聚合酶链式反应 -等位特异性寡核苷酸杂交 (PCR -ASO)方法测定MR外显子 3上C944T多态性频率并通过统计学方法探讨这些多态性与妊高征的相关性。结果　MR外显子 3上C944T多态性位点中C等位基因和T等位基因在正常孕妇组中分别为 5 8 0 0 %与 42 0 0 %,在妊高征组中分别为 5 3 45 %与 46 5 5 %,在随机人群组中分别为 5 5 15 %与44 85 %。结论　中国人群中MR基因外显子 3上存在C944T多态性。; 郭芬莫雪华李月琴何华坤王莹周天鸿; 关键词：多态性妊高征

工程菌BL21-PET21a(+)-phy A表达植酸酶的研究被引量：5: 2004年; 对来源于Aspergillusniger的植酸酶基因phyA进行了改造 ,去除了内含子和信号肽编码序列后重组到表达载体PET2 1a( + )上 ,导入大肠杆菌BL2 1 (DE3)中 ,构建工程菌株BL2 1 PET2 1a( + ) phyA。植酸酶基因在工程菌株中得到了高效表达。表达产物主要以包涵体形式存在 ,表达量达到菌体蛋白的 30 %以上。改进了包涵体复性技术 ,包涵体蛋白经复性、纯化后 ,生物活性达到 1 5 0 0U mg ,并且复性蛋白具有较好的热稳定性 ,经过 75～ 95℃、30min的热处理后 ,仍然保持了生物活性 ,同时有明显的热激活现象。热激活后最高生物活性达到 5 0 0 0U mg。; 魏威李弘剑李月琴方玲陈浩军周乐平何华坤周天鸿; 关键词：植酸酶包涵体复性热稳定性工程菌