刘方军
- 作品数：10 被引量：75H指数：4
- 供职机构：上海第二医科大学附属第九人民医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划上海市科学技术委员会资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 骨形成蛋白-7基因逆转录病毒载体的构建及其表达被引量：3
- 2003年
- 目的 :实现骨形成蛋白 7(BMP 7)基因在骨髓基质干细胞中的稳定、长久表达。方法 :构建重组BMP 7逆转录病毒表达载体。通过PT6 7包装细胞克隆 ,嘌呤霉素筛选、扩增 ,获得含BMP 7基因的逆转录病毒液 ,直接感染骨髓基质干细胞 ,用免疫组化方法检测BMP 7的表达。结果 :成功地构建了重组BMP 7逆转录病毒表达载体 ,并可在骨髓基质干细胞中表达BMP 7。结论 :重组逆转录病毒表达载体转染的靶细胞可表达BMP 7,为组织工程中骨和软骨种子细胞的研究奠定了基础。
- 祝联刘伟陈兵刘德莉刘方军吴娟娟陆俊弘曹谊林
- 关键词：重组逆转录病毒载体骨髓基质干细胞
- 基因转染3T3细胞的hTGFβ_1表达
- 2002年
- 目的鉴定重组pcDNA3.1-TGFβ1 载体在真核细胞中的表达 ,为其在软骨组织工程中的基因转染创造条件。 方法利用脂质体Fugene 6将TGFβ1 真核表达载体转染至NIH3T3细胞 ,RT -PCR、ELISA检测hTGFβ1 基因的表达 ,并利用CCL 6 4细胞株鉴定重组hTGFβ1 的生物学活性。 结果质粒转染 3T3细胞后 ,hTGFβ1 mRNA及其蛋白的表达均显著增强 ,且分泌表达的hTGFβ1 能明显抑制CCL 6 4细胞的生长。 结论重组载体在 3T3细胞中能表达具有一定生物学活性的hTGFβ1 。
- 刘方军曹谊林崔磊刘伟商庆新刘德莉
- 关键词：基因重组
- 皮肤成纤维细胞构建组织工程化肌腱的初步研究被引量：35
- 2002年
- 目的 探讨以皮肤成纤维细胞为种子细胞的组织工程化肌腱体内形成。方法 取猪自体皮肤成纤维细胞经体外培养、扩增 ,与可吸收生物材料聚羟基乙酸形成细胞—生物材料复合物 ,将该复合物植入手术缺损的右侧趾浅屈肌腱处 ,6周取材 ,对标本进行大体、组织学、电镜检查及生物力学评价。结果 新生组织在大体形态、细胞与胶原排列方式上与正常肌腱相似。新生组织的最大张力和最大应力分别为 1 73 0± 1 8 2与 1 8 9± 1 9N/mm2 ,分别达到左侧同一部位正常肌腱的 57 4%与51 9%。
- 陈兵丁小邦刘方军崔磊刘伟商庆新曹谊林
- 关键词：皮肤肌腱成纤维细胞种子细胞体外培养
- 真核表达载体pcDNA3.1-h转化生长因子-β1的构建被引量：9
- 2002年
- 目的 为研究软骨细胞基因转染的可行性创造条件 ,从而为基因修饰的软骨组织工程研究奠定基础。方法 应用基因重组技术和限制性内切酶酶切构建并鉴定 pcDNA3 .1 TGF β1真核表达载体 ,经Fugene6介导质粒转染 3T3细胞后应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测hTGF β1mRNA在真核细胞中的表达。结果 重组真核表达载体 pcDNA3 .1 TGF β1经限制性内切酶XhoⅠ和HindⅢ酶切 ,电泳后显示 1 .35kb的hTGF β1目的片段和 5 .40kb的 pcDNA3 .1载体片段 ,证明重组质粒连接正确 ;经RT PCR检测了hTGF β1在转录水平mRNA的表达情况 ,表明质粒转染 3T3细胞后hTGF β1mRNA的表达明显增强。 结论 重组真核表达载体构建正确 ,并能在真核细胞 3T3中表达hTGF β1mRNA 。
- 刘方军曹谊林商庆新崔磊刘伟
- 关键词：真核表达载体转化生长因子-Β1
- 软骨组织工程与基因治疗的研究进展
- 2001年
- 本文概述了目前细胞因子在软骨组织工程中的作用,以及基因工程在软骨组织工程中的应用现状和前景。软骨组织工程与基因工程的有机结合,必将推动软骨组织工程的进一步发展。
- 刘方军曹谊林商庆新
- 关键词：软骨细胞因子基因转移基因治疗
- 病毒介导的基因转染在组织工程中的应用
- 本文应用基因工程技术,构建二种重组病毒载体；一类是缺陷型逆转录病毒重组载体,另一类是缺陷性腺病毒重组载体；分别通过293细胞及PT67包装细胞筛选克隆,获得假病毒上清液,经浓缩纯化后转染靶细胞。研究结论:通过有效的含目的...
- 刘德莉刘方军吴娟娟胡晓洁祝联刘伟崔磊曹谊林
- 关键词：基因转染种子细胞
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- 病毒介导的基因转染在组织工程中的应用
- 2004年
- 目的 构建重组病毒载体,将较多细胞因子通过病毒载体转入种子细胞,提高细胞增殖及分泌基质能力,维持表型,延缓老化。方法 应用基因工程技术,构建缺陷型逆转录病毒重组载体和缺陷性腺病毒重组载体。分别通过PT67包装细胞筛选克隆及293细胞扩增,获得假病毒上清液,经浓缩纯化后转染靶细胞。结果 成功构建胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、Fas配体(Fas-Ligand)、绿色荧光蛋白(GFP)等逆转录病毒载体以及TGFβ1、人骨形成蛋白因子-7(hBMP7)、端粒酶、Smad3、Smad7等腺病毒载体,其中GFP-逆转录病毒重组载体在软骨细胞表达至2月。结论 通过有效的含目的基因重组载体转染种子细胞,延缓体外培养细胞的老化及促进细胞的增殖与基质分泌,获得组织工程所需要的大量种子细胞,为组织工程构建奠定了基础。
- 刘德莉刘方军吴娟娟胡晓洁祝联刘伟崔磊曹谊林
- 关键词：基因转染逆转录病毒载体腺病毒载体种子细胞基因工程技术
- 反义Smad3抑制3T3细胞增殖和TGF-β_1基因表达被引量：4
- 2003年
- 目的 研究反义Smad3对转化生长因子-β1(TGF-β1)基因表达的调控和对3T3细胞增殖的影响。方法 构建反义Smad3质粒,以脂质体介导转染NIH3T3细胞,进行细胞计数,并用RT-PCR方法观察TGF-β1 mRNA的表达。 结果 反义Smad3能下调TGF-β1 mRNA的表达,并抑制3T3细胞增殖。 结论 可以通过阻断TGF-β1细胞内信号传导调控TGF-β1基因的表达并抑制细胞增殖。
- 王丹茹刘伟刘德莉刘方军曹谊林张涤生
- 关键词：转化生长因子-Β1细胞增殖脂质体RT-PCR瘢痕
- 基因转染技术提高体内构建组织工程化软骨质量的实验研究被引量：19
- 2003年
- 目的:研究转化生长因子β1(TGF-β1)cDNA基因转染对软骨细胞Ⅱ型胶原表达的调控作用,为基因转染技术在软骨组织工程中的应用提供理论依据。方法:利用脂质体Fugene6将含TGF-β1基因的真核表达载体及空白载体分别转染至软骨细胞(基因转染组和对照组),RT-PCR、Northern-Blots、原位杂交及免疫组化检测TGF-β1调节体外培养软骨细胞Ⅱ型胶原表达的变化。结果:TGF-β1基因转染软骨细胞后,其Ⅱ型前胶原mRNA及其蛋白的表达均显著增强,且随着TGF-β1蛋白表达的丧失,其对软骨细胞Ⅱ型前胶原mRNA表达的促进作用亦逐渐减弱。结论:TGF-β1可以上调体外培养软骨细胞Ⅱ型胶原的表达。
- 刘方军曹谊林刘伟崔磊夏万尧钟斌刘德莉吴娟娟
- 关键词：基因转染技术组织工程化软骨软骨细胞转化生长因子Β
- Smad7过度表达抑制3T3细胞增殖和TGF-β1基因表达被引量：7
- 2003年
- 研究Smad7过度表达对TGF β1基因表达的调控和对 3T3细胞增殖的影响。实验将Smad7质粒 ,通过脂质体介导转染NIH3T3细胞 ,应用RT PCR方法鉴定转染结果和检测TGF β1mRNA的表达 ,以及用免疫细胞化学检测TGF β1蛋白的表达情况 ,并观察基因转染对细胞增殖的影响。结果显示转染Smad7后 ,NIH3T3细胞中TGF β1mRNA的表达显著减少 (P <0 0 5 ) ,TGF β1蛋白的表达下降 ,细胞增殖明显减缓 (P <0 0 5 )。提示Smad7过度表达能够抑制 3T3细胞的增殖和TGF β1基因的表达 ,可以通过阻断TGF β细胞内信号传导来调控TGF β1的生物学行为。
- 王丹茹刘伟刘方军曹谊林张涤生
- 关键词：SMAD7转化生长因子-Β1NIH3T3细胞增殖
