刘瀛
- 作品数：7 被引量：12H指数：2
- 供职机构：徐州医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省研究生培养创新工程项目江苏省高校自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 抗华支睾吸虫成虫抗原McAb制备及功能鉴定的研究
- 2012年
- 目的利用杂交瘤技术建立分泌抗华支睾吸虫成虫抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞株并对其分泌抗体的免疫学活性进行初步鉴定。方法以华支睾吸虫成虫抗原免疫BALB／c小鼠，取其脾细胞与Sp2／0骨髓瘤细胞进行融合，筛选分泌高滴度单克隆抗体的杂交瘤细胞株，采用动物体内诱生的方法制备单克隆抗体并对其纯化，测定所制备单抗效价和其免疫球蛋白亚类，检测单抗与猪囊尾蚴、弓形虫、疟原虫和日本血吸虫抗原的交叉反应，观测单抗对虫体的识别部位和其与感染小鼠肝脏组织中抗原的结合情况。结果获得1株分泌高滴度抗华支睾吸虫成虫抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞株，分泌的单抗命名为D10。其效价达1：200000以上，纯度达90％以上，亚类鉴定为IgGl类；单抗株D10与猪囊尾蚴、弓形虫、疟原虫和日本血吸虫抗原无交叉反应；免疫荧光法见其与华支睾吸虫成虫表皮及虫卵结合；免疫组化显示单抗株D10与病变肝脏组织中汇管区及周围间质中的抗原结合明显。结论制备的单抗株D10具有高效价和高特异性，为华支睾吸虫病的研究及华支睾吸虫病诊断抗体的研制奠定了基础。
- 孔德龙孙伟王东辉刘瀛汤仁仙付琳琳徐田云刘宜升郑葵阳
- 关键词：华支睾吸虫单克隆抗体ELISA
- 华支睾吸虫感染小鼠肝脏中TLR2 mRNA动态表达的初步研究
- 2011年
- 目的观察华支睾吸虫感染小鼠肝脏中TLR2 mRNA的动态表达。方法建立华支睾吸虫感染小鼠模型,在感染不同时间点(1、2、4、7、14、28、568、4 d)取肝脏,采用逆转录聚合酶链反应检测肝脏TLR2 mRNA的表达,同时行HE染色观察感染小鼠各时间点肝脏病理学变化。结果与未感染对照组相比,感染组自感染后第7 d起TLR2 mRNA表达升高(P<0.05),至第28 d达到高峰,之后开始下降,至第56 d仍高于未感染对照组(P<0.05),第84 d下降至未感染对照组相近水平。病理学观察发现,感染小鼠肝脏于第4 d始,汇管区轻度炎症反应;第7 d,炎症反应加重,或见嗜酸性脓肿;第14 d,嗜酸性脓肿增多,纤维组织增生,周围小胆管增生;第28 d,胆管壁增厚,周围炎性渗出明显;第56 d,胆管上皮不同程度增生,增生的上皮呈腺样结构;第84 d,胆管周围炎性细胞减少,纤维增多,管壁增厚。结论 TLR2 mRNA在华支睾吸虫感染过程中表达升高,推测TLR2可能参与调控华支睾吸虫感染引发的Th1/Th2免疫应答和病理改变。
- 徐田云汤仁仙刘转转付琳琳万青刘宜升孔德龙尤红娟杜文平刘瀛郑葵阳
- 关键词：TOLL样受体华支睾吸虫小鼠肝脏
- 甘西鼠尾草总酚酸提取物抗嘌呤霉素氨基核苷诱导的足细胞氧化应激损伤被引量：2
- 2016年
- 目的研究甘西鼠尾草总酚酸提取物(SPE)在体内和体外对嘌呤霉素氨基核苷(PAN)肾病大鼠足细胞以及PAN诱导小鼠足细胞氧化应激损伤的作用。方法 (1)建立PAN肾病大鼠动物模型,给予SPE和他克莫司干预,分别在第5、10、15、21天留取肾组织标本,WT1染色计数足细胞数目,免疫荧光观察8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)荧光强度。(2)体外采用PAN致足细胞损伤模型,PAN作用小鼠足细胞24h,分别加入含SPE、丹酚酸B(SalB)、迷迭香酸(RA)及他克莫司的培养基培养6、12、24、48h,观察足细胞骨架相关蛋白F-actin的表达,流式细胞仪分析细胞内活性氧(ROS)荧光强度。结果 (1)肾小球WT1细胞计数结果显示,PAN组第5天时足细胞数已开始下降,第15天达(14.4±0.7)个/肾小球切面,较正常组(37.2±1.5)个/肾小球切面减少(P<0.05),SPE组与阳性对照组(他克莫司组)各时间点足细胞数量高于PAN组;第15天时,阳性对照组肾小球WT1细胞计数与SPE高剂量组较为接近(P>0.05)。第5天时PAN组大鼠肾组织8-OHdG荧光强度较正常组增强,第10天上升至高峰,而后开始减弱,第15天时仍高于正常组;给予药物干预后,大鼠肾组织的8-OHdG荧光强度降低,其中阳性对照组与SPE高剂量组8-OHdG荧光强度较为接近。(2)体外研究发现,PAN作用24h后,F-actin几乎完全解聚,少数细胞尚有残存的被切断的丝状结构,给予SPE、SalB、RA及他克莫司治疗后,PAN诱导的足细胞损伤明显减弱,细胞内重新出现极性分布的微丝。与正常组相比,PAN作用小鼠足细胞24h后ROS荧光强度增加(P<0.05)。给予药物干预后足细胞内ROS荧光强度降低,24hSPE低剂量组、SalB高剂量组和RA高剂量组与阳性对照组足细胞内ROS的荧光强度降低程度相近(P>0.05),24hSalB降低足细胞内ROS荧光强度效果优于RA,且与药物剂量呈正相关。结论本研究从体内及体外证实,SPE对PAN所致足细胞氧化应激损伤具有保护作用。
- 刘翔任红旗杨阳戴德淑柳云李向阳颜超华慧刘瀛戴春尹忠诚汤仁仙
- 关键词：嘌呤霉素氨基核苷足细胞甘西鼠尾草8-羟基脱氧鸟苷
- McAb制备及其表达系统的研究进展被引量：2
- 2013年
- 现介绍5种常用的单克隆抗体(McAb)制备技术,即杂交瘤技术、嵌合抗体制备技术、噬菌体抗体库技术、转基因小鼠制备抗体技术和核糖体展示技术,并对这5种技术的优缺点进行分析。阐述并比较了McAb制备所依赖的表达系统,其中包括细菌表达系统、酵母和丝状真菌表达系统、昆虫杆状病毒表达系统、植物表达系统和哺乳动物表达系统。最后,展望了McAb未来的发展前景及其在生物技术和疾病诊断方面上的应用。
- 刘瀛汤仁仙付琳琳孔德龙
- 关键词：单克隆抗体
- 华支睾吸虫感染新西兰兔转化生长因子β1和白细胞介素17的动态变化及其意义被引量：3
- 2014年
- 目的分析华支睾吸虫感染新西兰兔转化生长因子β1(TGF-β1)、白细胞介素17(IL-17)的变化及意义。方法选择健康新西兰兔8只,经口灌胃华支睾吸虫囊蚴800个;于感染0、1、3、7、14、21、28和42d耳缘静脉采血,分离血清,用ELISA法检测血清中TGF-β1、IL-17水平;于42d剖杀感染兔,取肝脏制作组织切片,HE染色观察病理变化。结果实验兔感染0d时TGF-β1为(706.08±60.72)pg/ml,感染42d时为(1106.26±60.35)pg/ml,差异有统计学意义(P<0.01)。IL-17水平自感染开始持续增高,在感染3d时[(68.69±6.04)pg/ml]达到最高峰,与感染0d[(50.04±4.16)pg/ml]时相比,差异有统计学意义(P<0.05);此后逐渐降低,至21d时降至感染前水平。结论新西兰兔感染华支睾吸虫早期IL-17高表达,感染42d时TGF-β1高表达。提示TGF-β1/IL-17在华支睾吸虫致病过程中发挥重要作用。
- 华慧徐江涛张波颜超李向阳刘瀛刘转转付琳琳汤仁仙郑葵阳
- 关键词：华支睾吸虫新西兰兔IL-17
- TLR3和IRF3在华支睾吸虫感染C3H／HeN小鼠中表达的初步分析被引量：4
- 2013年
- 目的 建立华支睾吸虫感染小鼠模型,初步分析TLR3、IRF3基因在小鼠肝脏中的表达情况.方法 随机选用健康雌性C3H/HeN小鼠感染华支睾吸虫建立感染模型,分别在感染第0、1、7、14、28、56、84天颈椎脱臼处死小鼠,取肝脏组织进行病理学观察,收集粪便检查华支睾吸虫虫卵.同时,采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测肝脏中Toll样受体（TLRs）中的TLR3和IRF3的mRNA的表达情况.结果 自感染后第20~30天检查出华支睾吸虫虫卵;肝脏病理学结果显示,与正常组小鼠相比,随着时间的增加,感染组小鼠肝脏汇管区由少量炎症细胞浸润、胆管上皮反应性增生发展到在该区域出现大量纤维组织增生伴有炎症细胞浸润,表明华支睾吸虫感染C3H/HeN小鼠模型成功建立.与正常组相比,感染组自感染后第1天起TLR3和IRF3的mRNA表达均升高（P〈0.01）,均在第84天开始下降.结论 华支睾吸虫感染C3H/HeN小鼠后可激活TLR3-TRIF途径,提示TLR3-TRIF途径可能在华支睾吸虫致病过程中起了一定的作用.
- 刘瀛颜超华慧李向阳汤仁仙郑葵阳
- 关键词：华支睾吸虫
- 两种方法建立小鼠抗GBM肾炎模型的比较被引量：1
- 2013年
- 目的探讨建立小鼠抗肾小球基底膜（GBM）肾炎模型的方法。方法72只昆明小鼠随机分为3组，肾炎模型A组、B组和正常对照组。肾炎模型A、B组小鼠一次性尾静脉注射兔抗小鼠GBM血清（16ml／kg），正常对照组小鼠注射等量正常兔血清。肾炎模型A组小鼠尾静脉注射兔抗小鼠GBM血清前1周，背部皮内注射正常兔血清进行预免疫；肾炎模型B组小鼠尾静脉注射兔抗小鼠GBM血清后24h，尾静脉注射脂多糖（1mg／kg）。于实验第7、14、21、28天取尿液和血清标本，分别检测尿蛋白、血肌酐、血尿素氮含量。并于上述时间点分别取。肾组织观察病理变化。结果。肾炎模型组小鼠注射兔抗小鼠GBM血清后，第7天尿蛋白、血肌酐和血尿素氮含量均明显升高，均高于正常对照组，且A组升高更明显（P〈0．05）。肾组织病理表现为：。肾炎模型A组肾小球基底膜明显增厚，系膜区大量电子致密物沉积，足突融合；壁层上皮细胞增生，大量新月体形成，肾小球囊腔变窄，并可见肾小球纤维化形成，其病变程度均高于肾炎模型B组。正常对照组小鼠肾组织无明显病理变化。结论免疫球蛋白预免疫法可以更好地建立小鼠抗GBM肾炎模型。
- 李向阳秦苏萍颜超华慧刘瀛汤仁仙郑葵阳
- 关键词：脂多糖小鼠
