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肥胖MC4R重组腺病毒表达载体的构建及鉴定: 2011年; 目的构建黑素皮质素受体-4(MC4R)重组腺病毒表达载体,为肥胖症的基因治疗研究奠定基础。方法 PCR扩增犬MC4R目的基因后与T载体连接,双酶切鉴定正确的T-A载体获得具有黏性末端的MC4R目的基因;将其亚克隆至腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中,构建穿梭载体pShuttle-CMV/MC4R;PmeⅠ单酶切pshuttle-CMV/犬MC4R后,转化到含pAdeasy-1的BJ5183感受态细胞,采用细菌内同源重组法构建腺病毒载体pAdeasy-1/pshuttle-CMV/MC4R;筛选阳性克隆子;PacⅠ酶切鉴定。结果线性化的pShuttle-CMV/MC4R转化含pAdeasy-1的BJ5183感受态细胞,16 h后获得阳性克隆子,经PacⅠ酶切鉴定出一大于20 kb的大片段和3.0 kb的特征性片段,通过BglⅡ、XhoⅠ双酶切切下约1000 bp的片段,含MC4R目的基因的重组腺病毒载体构建成功。结论细菌内同源重组法可高效、快捷的制备含犬MC4R的重组腺病毒载体;该载体为人类肥胖症的基因治疗研究奠定了基础。; 王玉彬吕金钢苏荣健王光川巴彩凤; 关键词：肥胖同源重组腺病毒载体

比格犬MC4R基因与肥胖的关系研究被引量：1: 2012年; [目的]探讨犬黑素皮质素受体-4(MC4R)基因与肥胖的关系。[方法]通过PCR-RFLP技术分析犬MC4R基因多态性与体重的关系。通过载体构建和细胞培养技术来构建犬MC4R基因的真核表达载体并转染MDCK细胞,研究该基因的体外表达情况。最后通过小鼠尾静脉高压注射重组真核表达载体的方法进行动物试验。[结果]比格犬226 bp C/A多态性与体重呈显著相关。犬MC4R基因在MDCK细胞内成功表达。MC4R重组体裸质粒注射后小鼠的体重有明显变化。[结论]MC4R基因能够促进小鼠的体重增加。该基因与肥胖的发生密切相关,将为肥胖机制的研究提供理论依据。; 王光川张轶博吕金钢巴彩凤; 关键词：MC4R 基因转染肥胖

犬黑素皮质素受体-4裸质粒注射促进小鼠肥胖的研究被引量：1: 2009年; [目的]探讨犬黑素皮质素受体-4(MC4R)cDNA的重组真核表达质粒对小鼠肥胖的影响。[方法]3次尾静脉高压注射pcDNA3.1-myc-His/A-MC4R质粒,RT-PCR成功验证小鼠体内犬MC4R表达后,适时监测每只小鼠的体重,同窝小鼠相互对照,利用两两比较的秩和检验进行统计学分析。另外,用脂肪组织病理切片分析小鼠皮下脂肪细胞变化。[结果]试验得出,小鼠体重变化有统计学意义;饲养时间相同、相互对照组的每一组小鼠脂肪细胞直径对比明显,且具有统计学意义。[结论]犬MC4R基因在小鼠体内表达,能促进小鼠体重增加,为犬MC4R调节肥胖机制的研究提供理论依据。; 吕金钢李久纯巴彩凤王光川苏荣健张轶博; 关键词：肥胖基因转染

犬MC4R基因原核表达质粒的构建与表达被引量：1: 2011年; 目的构建犬MC4R基因的原核表达质粒,并表达重组蛋白。方法以重组质粒pcDNA3.1-myc-his/A-cMC4R为模板,PCR扩增MC4R基因,将其克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,构建重组原核表达质粒pET-30a(+)-MC4R,转化入E.coli Transetta(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。结果重组表达质粒pET-30a(+)-MC4R经双酶切鉴定证明构建正确,DNA测序证实插入序列与GenBank中登录序列的同源性为99%,只有编码区777位碱基T变成了C;表达的重组蛋白相对分子质量约为37 000,诱导4 h表达量最高,占菌体总蛋白的8%;重组蛋白可与抗His单抗特异性结合。结论已成功构建犬MC4R基因原核表达质粒,并表达了重组蛋白,为犬MC4R蛋白多克隆及单克隆抗体的制备提供了抗原。; 贺宝军巴彩凤王光川赵薇宋慧娟吕金钢; 关键词：犬科原核细胞基因表达

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吕金钢