周圆
- 作品数：9 被引量：43H指数：4
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子cDNA 5'端的修饰提高其在大肠杆菌的表达被引量：19
- 1993年
- 应用聚合酶链反应(PCR)法和人工合成的寡聚DNA引物,对人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的cDNA作了修饰。在不改变氨基酸的前提下,将一些G或C改成A或T,以避免形成不利的二级结构,并将一些密码子换成大肠杆菌喜用的密码子。修饰后的GMCSF cDNA在大肠杆菌的表达水平高于其母株。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳表明其表达量约占菌体总蛋白的20％,免疫学和生物学活性检测表明该表达产物具有天然GM-CSF的构型和生物学活性。部分纯化的重组人GM-CSF已用于维持依赖人GM-CSF的TF-1细胞系的生长。
- 张智清张颖路秀华王世骢邵魁马丽娟李玉英周圆姚立红贺秉坤侯云德
- 关键词：粒细胞巨噬细胞集落刺激因子
- 一种重组人α1型干扰素突变体IFN-α1/86D的纯化与鉴定被引量：5
- 1993年
- 本文研究了重组人α1型干扰素突变体IFN-α1/86D在摇瓶培养和分批发酵培养的重组大肠杆菌DH5α株中的表达动态,并采用阳离子交换层析和抗α1型干扰素单克隆抗体亲和层析的两步流程对其进行了纯化,得到SDS-PAGE纯及高效液相层析(HPLC)纯的IFN-α1/86D产品,共比活性为2.3×10~7单位/毫克蛋白。N端氨基酸序列测定的结果表明,纯化产品的纯度在95％以上,但其N端不均一,产品中含有两种N端序列正确的IFN-α1/86D活性分子,即约75％为去Met分子和约25％为带Met分子。
- 周圆金冬雁张智清王伟黎志良迟捷李玉英侯云德
- 关键词：干扰素蛋白提纯抗病毒活性
- 重组人白细胞介素4的纯化及N端氨基酸序列分析被引量：1
- 1993年
- 本文对重组人白细胞介素4高效表达克隆pBV220/hIL-4a的表达产物进行了纯化,升对纯化的人IL-4进行了N端氨基酸序列分析。人IL-4基因表达产物在大肠杆菌中以不溶性包涵体形式存在,经过超声破菌、包涵体抽提、复性浓缩、离子交換和凝胶过滤层析一系列纯化步骤,终产物纯度达98％以上,按蛋白总量计算回收率为14％,比活性达2×10~6单位/mg蛋白。通过测定纯化人IL-4的N端16个氮基酸序列,与由其DNA序列推导的氨基酸序列完全一致。本文为重组人IL-4的批量生产奠定了基础。
- 李晨张智清周圆姚智陈慰峰侯云德
- 关键词：提纯氨基酸白细胞介素
- 一种兼具抗病毒活性及pHSA结合活性的蛋白——乙型肝炎病毒前S2肽段与人α2a型干扰素的融合蛋白
- 1993年
- α型干扰素(IFN-α)是一类具有广谱抗病毒活性的蛋白质,是当前研究资料较为充分而应用前景较为广阔的生物治疗药物之一。本实验室研制的重组人α2a型干扰素(IFN-α2a)已获国家批准进入临床验证。已有资料表明,α型干扰素对于慢性肝炎具有显著的疗效,但需要较大的剂量和较长的疗程。如果能够使IFN的作用具备一定的细胞特异性,将有可能提高疗效、降低用药量并减轻副作用。
- 金冬雁曾庆周圆徐荣辉李玉英侯云德
- 关键词：抗病毒活性抗病毒活性PHSA
- 直组人嗜中性白细胞活化蛋白-1/白细胞介素-8的纯化与鉴定被引量：1
- 1992年
- 本文利用SDS-PAGE及蛋白质电泳印迹技术,从带有相应表达质粒的重组大肠杆菌裂解液中,将所表达的重组人嗜中性白细胞活化蛋白-1/白细胞介素-8(NAP-1/IL-8)转移至聚偏二氟乙烯膜上,直接进行N-末端15个氨基酸的序列分析,从而确证该目标蛋白得到高效表达和正确加工。随后采用Bio-Gel P30凝胶过滤层析和Mono-S阳离子交换层析对重组人NAP-1/IL-8进行了分离纯化,纯化产品达到SDS-PAGE纯。利用琼脂糖平板法测定了纯化产品的嗜中性白细胞趋化活性,推算其比活为2.8×10~5U/mg蛋白。又利用SDS-PAGE测出重组NAP-1/IL-8的分子量约为8.5kD,但根据凝胶过滤层析的洗脱时间推定,在溶液中确实存在分子量稍大于14.4kD的NAP-1/IL-8二聚体。
- 周圆金冬雁徐荣辉侯云德
- 关键词：提纯
- 人嗜中性白细胞活化蛋白-1/白细胞介素-8基因的半化学半酶促合成及在大肠杆菌的表达被引量：2
- 1992年
- 本文采用半化学半酶促法合成了人嗜中性白细胞活化蛋白-1/白细胞介素-8(NAP-1/IL-8)的全基因,并在大肠杆菌系统中利用P_RP_1串联启动子进行了温控型的高效表达,通过SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测表明,在摇瓶培养的大肠杆菌中,NAP-1/IL-8的表达量可占菌体可溶性蛋白的18.5％,而在实验室规模的发酵试验中,其表达量则占可溶性蛋白的10.9％.经凝胶过滤层析和阳离子交换层析两个简单的纯化步骤,得到SDS-PAGE纯的重组NAP-1/IL-8,采用琼脂糖平板法进行测定,表明所得NAP-1/IL-8纯品在<10ng/ml的水平上显示出强烈的嗜中性白细胞趋化活性,家兔皮肤试验的结果显示,重组人NAP-1/IL-8可在家兔体内引起早发型超敏反应,采用Edman降解法测定重组人NAP-1/IL-8纯品N末端36个氨基酸的序列,与天然人NAP-1/IL-8的成熟分子完全符合。
- 金冬雁徐荣辉周圆王平侯云德
- 关键词：IL-8基因化学合成
- 重组人α2b型干扰素的纯化与鉴定被引量：7
- 1994年
- 采用单克隆抗体亲和层析一步纯化法对大肠杆菌表达的重组人ａ２ｂ型干扰素进行了纯化，然后利用凝胶过滤高压液相层析、ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳和Ｎ端２５个氨基酸的序列测定等方法对纯化产品进行了鉴定。表明一步纯化的ＩＦＮ－ａ２ｂ达到９５％以上的统一计划，其比活性为２．５４×１０×８ｕ／ｍｇ．但重组ＩＦＮ－ａ２ｂ产品Ｎ端不均一，含有约３０％的去Ｍｅｔ分子和约７０％的带Ｍｅｔ分子。从蛋白质序列的水平上证实。
- 周圆金冬雁曾庆李玉英迟捷侯云德
- 关键词：干扰素提纯
- 基因工程产品的N末端均一性及其中残留的痕量杂质蛋白的分析被引量：2
- 1991年
- 利用Edman降解法,辅之以邻苯二甲醛阻断等技术,在蛋白/多肽测序仪-PTH氨基酸分析仪上微量自动测定了在大肠杆菌系统获得高效表达的重组人γ干扰素、α 2干扰素和白细胞介素-2等多种基因工程产品的N末端氨基酸序列。根据氨基酸色谱分析的原始资料,对上述蛋白质样品的N末端均一性进行了细致分析。在此基础上,借助序列库检索比较等计算机方法检定了这些样品中可能残留的痕量杂质蛋白,并对分析痕量残留蛋白的一般方法进行了讨论。分析结果表明重组人γ干扰素N末端均一;而α 2干扰素和白细胞介素-2的N末端不均一,其中主要含大致等量的N末端带有蛋氨酸与不带蛋氨酸的两种分子,仅在个别送检样品中发现痕量N末端丢失一个氨基酸的分子。通过在序列库中检索所测出的一段八肽疑似序列,推断在一批送检样品中含有痕量的卵清溶菌酶,经进一步纯化样品并测序后得以证实。本文结果为进一步优化和确定有关产品的生产流程并建立产品质量控制的标准提供了重要依据。
- 金冬雁张智清周圆侯云德
- 人α2b型干扰素基因的修饰合成及其在大肠杆菌中的表达被引量：8
- 1992年
- 采用寡核苷酸介导的定位诱变技术,将现有的人α2a型干扰素基因中编码K23的密码子AAA定向诱变为R的密码子CGT,以构建可表达人α2b型干扰素的修饰基因。经DNA全序列分析表明,定位诱变的结果符合设计要求。在此基础上,利用原核高效表达载体pBV220在P_RP_L串联启动子的控制下在大肠杆菌中对该基因进行了表达,并对几种高效表达的人α型干扰素的抗病毒活性进行了比较。
- 曾庆金冬雁金奇胡钢周圆李玉英王珣章侯云德
- 关键词：干扰素大肠杆菌
