周芳
- 作品数：5 被引量：10H指数：2
- 供职机构：天津医科大学总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金天津市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 应用亚硫酸氢盐修饰后PCR联合TA克隆测序对E-cadherin启动子区甲基化水平的检测被引量：1
- 2014年
- E-cadherin是一种细胞粘附因子,通过增强细胞之间的粘附而起到抑制肿瘤转移的作用.Ecadherin基因启动子区的高甲基化是导致其在众多肿瘤细胞中表达下调甚至缺失的主要原因之一.本实验首先抽提SGC-7901细胞(胃腺癌细胞)、A549细胞(肺腺癌细胞)、MCF-7细胞(乳腺癌细胞)等3个肿瘤细胞株的全基因组DNA,然后对抽提的DNA进行亚硫酸氢盐修饰和纯化回收,根据修饰后的DNA序列设计引物并对其进行PCR扩增.然后将PCR扩增产物与pUC-T TA载体连接并转化入感受态大肠杆菌DH5α中进行培养,对筛选出的含有阳性重组子的菌落进行测序.测序结果显示,3个肿瘤细胞株的E-cadherin基因启动子区的CpG岛都呈现了高度的甲基化,亚硫酸氢盐的修饰效率达到了99.2%.综上研究表明,亚硫酸氢盐修饰后PCR(BSP)联合TA克隆测序可以对肿瘤细胞某基因启动子区CpG岛的甲基化水平进行精确量化,研究所使用的3个肿瘤细胞株均可作为研究肿瘤细胞E-cadherin基因甲基化的细胞模型.
- 贾文亮张庆瑜李素丽周芳张安玲
- 关键词：甲基化E-CADHERIN
- miRNA海绵在胃癌细胞EMT过程中调控作用的体外研究被引量：2
- 2014年
- 目的:探讨"miRNA海绵"在胃癌细胞系SGC7901上皮-间质转化(EMT)过程中的作用及机制。方法:将人工合成的ZEB2 3'UTR质粒及siZEB2采用脂质体Lipofectamine 2000转染SGC7901细胞。qRT-PCR检测转染后miR-200a/b/c的表达;Tran-swell侵袭实验、划痕实验和克隆形成实验检测细胞侵袭迁移增殖能力;Western Blot检测目的蛋白的表达。结果:与对照组相比,ZEB2 3'UTR转染组miR-200a/b/c的表达均下调,迁移、侵袭、增殖活性均增强;而转染siZEB2后miR-200a/b/c表达均升高,迁移、侵袭、增殖能力则下降。Western Blot显示ZEB2 3'UTR转染导致ZEB2表达升高,E-cadherin表达下降,而Vimentin表达上调;而转染siZEB2后,各项指标则表现出相反的表达趋势。结论:ZEB2 3'UTR可以通过调控miR-200a/b/c的表达调控胃癌细胞EMT过程,调节肿瘤的侵袭与转移。
- 李素丽周芳张庆瑜贾文亮张安玲韩磊康春生
- 关键词：胃癌微RNAS上皮-间质转化
- 关于E-cadher in在胃癌和肺癌中表达情况的研究
- 贾文亮李素丽周芳韩磊张安玲张庆瑜
- ZEB2基因3′UTR区转染对人胃黏膜上皮细胞GES-1增殖、侵袭、迁移的影响被引量：6
- 2014年
- 目的探讨E盒结合锌指蛋白(ZEB)2基因3′非翻译区(3′UTR)转染人胃黏膜上皮细胞GES-1后对其增殖、侵袭、迁移的影响。方法将人工合成的ZEB2 3′UTR质粒及miR-200b micmics采用脂质体Lipofectamine2000转染GES-1细胞。分别设对照组、突变组和ZEB2 3′UTR组,qRT-PCR检测转染后miR-200a/b/c及ZEB1/ZEB2mRNA的表达。再设对照组、ZEB2 3′UTR组、ZEB2 3′UTR+无义序列组和ZEB2 3′UTR+miR-200b micmics组。West-ern blot检测转染后ZEB1/ZEB2、基质金属蛋白酶(MMP)-2/9、增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白的表达;Transwell侵袭实验和划痕实验检测细胞侵袭迁移能力;MTT法检测细胞增殖活性。结果与对照组及突变组相比,转染ZEB2 3′UTR组miR-200a/b/c的表达均下调,以miR-200b最为明显,ZEB1/ZEB2 mRNA及蛋白水平表达上调,其细胞迁移、侵袭、增殖活性均增强(P<0.05)。ZEB2 3′UTR+miR-200b micmics组较ZEB2 3′UTR组迁移、侵袭、增殖活性降低。结论ZEB2 3′UTR可能通过调控miR-200a/b/c的表达进而影响其对靶基因的转录后调控,增加细胞的侵袭、迁移能力,导致GES-1细胞的恶性转化倾向。
- 李素丽周芳张庆瑜贾文亮张安玲韩磊康春生
- 关键词：转染胃黏膜上皮细胞
- 柴油机废气颗粒潜在致癌作用机制及其细胞毒性观察被引量：1
- 2014年
- 目的通过柴油机废气颗粒(DEP)作用于正常支气管上皮细胞(HBE),从表皮生长耐受体(EGFR)、磷酸肌醇-3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)的变化探讨柴油机颗粒潜在致癌机制及对细胞毒性影响。方法将DEP以0、50、100、200、400μg/mL加入待测HBE细胞中,用Western blot检测EGFR表达量的变化,从中选择对HBE细胞影响最大的浓度作为研究对象实验组。Western blot检测DEP处理后实验组及空白对照组HBE细胞内EGFR、PI3K、AKT及p-AKT的变化。DEP对细胞毒性的检测,通过Transwell实验检测细胞侵袭能力,流式细胞术检测细胞周期和凋亡变化。结果加入浓度为100μg/mL的DEP处理后,HBE细胞中EGFR表达量明显高于其他浓度组(P均<0.05);Western blot表明,实验组HBE细胞PI3K、AKT及p-AKT的表达量较空白对照组显著上升(P均<0.05),细胞毒性结果显示,与空白对照组比较,实验组HBE细胞周期阻滞于G0/G1期(P<0.01),凋亡率增加(P<0.01),侵袭能力下降。结论 DEP存在确切的细胞毒性,EGFR表达增加可能在DEP导致肺癌变的过程中起到重要作用,其作用机制可能与激活下游PI3K/AKT通路有关。
- 周芳李素丽贾文亮康春生张庆瑜
- 关键词：细胞毒性
