唐玲玲
- 作品数：6 被引量：10H指数：2
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- 荧光定量PCR法检测小鼠肠道中产气荚膜梭菌的实验研究被引量：2
- 2011年
- 目的建立一系列浓度梯度的A型产气荚膜梭菌(clostridium perfringens,C.perfringens)感染小鼠肠道的动物模型,探讨实时荧光定量PCR法对肠道中C.perfringens的检测。方法小鼠随机分成6组,每组10只,依次腹腔注射浓度为5.7×1095、.7×1085、.7×1075、.7×106和5.7×105 cfu/mL的A型C.perfringens菌液1 mL,空白对照组腹腔注射生理盐水1 mL。连续观察72 h,统计小鼠死亡数量、存活时间及腹腔取样做细菌革兰染色涂片镜检、细菌厌氧血平板厌氧培养、测序鉴定和荧光定量PCR定量检测。结果细菌镜检结果为5.7×109、5.7×108和5.7×107 cfu/mL浓度组在显微镜下能观察到两头钝圆棒状的革兰阳性杆菌,细菌厌氧培养能培养出大量边缘粗糙的菌落;在5.7×1065、.7×105 cfu/mL浓度组和空白对照组不能发现革兰阳性杆菌,利用细菌培养法,5.7×106 cfu/mL组平均能培养出7个菌落,在5.7×105 cfu/mL组和空白对照组不能培养出任何菌落,克隆目的片段测序结果与GeneBank中C.perfringens16S rRNA[AB566417]完全一致。荧光定量PCR法在各浓度组为阳性,空白对照组为阴性。结论荧光定量PCR法在检测C.perfringens具有灵敏度高、特异性好、检验时间短的优点。
- 徐少珊孙朝晖陈荣誉杨永泉唐玲玲石玉玲
- 关键词：A型产气荚膜梭菌荧光定量PCR法
- 产气荚膜梭菌qPCR法在动物模型和临床病例中的应用
- 2011年
- 目的 利用产气荚膜梭菌qPCR法检测A型产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens type A）感染小鼠的后肢的气性坏疽动物模型和一例阳性病例,以验证此法在早期诊断优势.方法 小鼠随机分成4组,10只/组分别肌肉注射3.5×109、3.5×108和3.5×107cfu/ml浓度的A型产气荚膜梭菌（ATCC13124）菌液0.1 ml,空白对照组肌肉注射生理盐水0.1 ml,建立小鼠感染的动物模型,利用产气荚膜梭菌qPCR方法 对动物模型及一例病例进行检测分析.结果 不同浓度菌液组（3.5×109、3.5×108、3.5×107cfu/ml实验组）和对照组在肌肉注射72 h内的死亡率为：90%、70%、10%和0;各组平均存活时间（hh：mm）依次为：20∶43±11∶12、37∶24±25∶39、68∶36±10∶45和72∶00±0∶00,各组荧光定量Ct值均值为：21.21±2.69、28.45±2.74、32.49±2.87和0.00±0.00,组间比较差异均有统计学意义（P＜0.05）.利用该法检测病者两处分泌物,Ct值为30.67、30.44.结论 利用产气荚膜梭菌qPCR法成功检测出未发病的小鼠中的产气荚膜梭菌,并成功的应用于一例病例中.
- 石玉玲徐少珊孙朝晖陈丽丹唐玲玲
- 坏疽病原体快速检测方法的临床应用
- 2010年
- 目的:利用荧光定量PCR技术,建立一种快速、敏感、特异的检测产气荚膜梭菌的方法,及时用于指导临床治疗。方法:以产气荚膜梭菌16srRNA基因作为靶序列,设计一对特异引物和探针,以伤口分泌物和脓液提取的核酸作为模板,利用已经优化的引物和探针进行PCR反应;同时与细菌培养作比较,验证此方法的快速性、敏感性及特异性。结果:建立的反应体系在上游引物浓度为0.45μmol/L,下游引物浓度为0.15μmol/L,探针浓度为0.3μmol/L时,具有很好的敏感性,与21种其他细菌均无交叉反应,其敏感性为9cfu/反应体系。荧光定量PCR检测结果与细菌培养结果完全一致。结论:所建立的荧光定量PCR方法特异、灵敏、快速,能对产气荚膜梭菌感染做出准确的检测报告,具有对战时高发疾病气性坏疽进行快速和定量检测潜质。
- 唐玲玲石玉玲王露霞李林海孙朝晖陈丽丹徐少珊
- 关键词：坏疽产气荚膜梭菌荧光定量PCR伤口分泌物
- 伤口分泌物涂片与实时荧光定量PCR对产气荚膜梭菌快速诊断的意义被引量：1
- 2012年
- 目的比较涂片镜检查找革兰阳性粗大杆菌与实时荧光定量PCR这两种方法对快速诊断产气荚膜梭菌的意义。方法选取疑似气性坏疽且伤口分泌物涂片镜检发现革兰阳性粗大杆菌的患者16例,取其伤口分泌物进行实时荧光定量PCR及细菌培养。结果 16例涂片镜检查到革兰阳性粗大杆菌的患者中,有6例实时荧光定量PCR为阳性并培养出产气荚膜梭菌。结论与传统的涂片方法相比,实时荧光定量PCR方法能更准确,更灵敏地诊断产气荚膜梭菌。
- 陈丽丹石玉玲李林海孙朝晖唐玲玲王露霞
- 关键词：气性坏疽伤口分泌物涂片实时荧光定量PCR梭菌
- A型产气荚膜梭菌经小鼠传代的毒力变化被引量：2
- 2011年
- 目的:探讨A型产气荚膜梭菌经小鼠腹腔传代后的毒力变化。方法:选择10只小鼠,腹腔注射浓度为5.0×108 cfu/mL的A型产气荚膜梭菌菌液1 mL,记录第一代小鼠存活时间;收集第一代死亡最早的小鼠腹腔内的细菌,经血平板厌氧培养24 h后配制5.0×108 cfu/mL浓度的菌液,并腹腔注射10只小鼠,每只1 mL,记录第二代小鼠存活时间;重复实验并记录第三代、第四代小鼠的存活时间;死亡小鼠腹腔收集的细菌以革兰染色涂片镜检,血平板培养,用API 20A试剂条进行生化鉴定;用SPSS 13.0软件分析每代小鼠的存活时间组间差异。结果:小鼠腹腔收集的标本经革兰染色后均可见两端钝圆棒状的革兰阳性杆菌,血平板厌氧培养均为边缘呈锯齿状有双溶血环的较大菌落,API 20A的结果为产气荚膜梭菌;小鼠存活时间随小鼠腹腔传代数不断延长,第一代与第二代、第三代、第四代之间的存活时间差异有统计学意义,第二代、第三代与第四代两两之间的存活时间差异无统计学差异。结论:A型产气荚膜梭菌经小鼠腹腔第一次传代后毒力显著减弱,随后传代中毒力基本不变,与传统的细菌经动物腹腔培养后毒力增强的观点不一致。
- 孙朝晖徐少珊石玉玲唐玲玲
- 关键词：A型产气荚膜梭菌毒力传代存活时间
- 产气荚膜梭菌实验室诊断方法综述被引量：5
- 2012年
- 气性坏疽不仅是战伤的严重并发症,也是其他创伤的严重并发症,其主要致病菌为产气荚膜梭菌。由于产气荚膜梭菌繁殖迅速,引起的临床症状严重,因此日益受到临床及实验室的广泛关注。近年来,国内外学者在对此菌的快速诊断方面作了大量的工作,本文就近年的研究成果进行综述。
- 唐玲玲石玉玲
- 关键词：气性坏疽产气荚膜梭菌
