喻琴
- 作品数：3 被引量：6H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学附属儿童医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市卫生局科研项目重庆市科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 大鼠Toll样受体2基因siRNA重组腺病毒载体的构建及鉴定被引量：3
- 2012年
- 目的:构建特异性抑制大鼠TLR2基因的重组腺病毒载体,并在大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞中进行功能鉴定。方法:体外合成3对大鼠siTLR2的双链DNA序列,经退火定向克隆到穿梭质粒pSES-HUS中获得pSES-HUS-siTLR2质粒,Pme I线性化后在BJ5183细菌中与pAdEasy-1骨架质粒进行同源重组获得pAd-siTLR2质粒,脂质体转染HEK293细胞,包装获得Ad-siTLR2腺病毒颗粒,继而感染PC12细胞,通过Real-time PCR和Western blot方法检测3对siRNA对TLR2基因的抑制效率。结果:PCR凝胶电泳和测序结果均证实目的基因正确克隆到腺病毒载体中;Real-time PCR和Western blot结果显示:携带siTLR2的病毒颗粒能够在mRNA和蛋白水平有效抑制PC12细胞中TLR2的表达。结论:成功构建了Ad-siTLR2重组腺病毒载体,并在HEK293细胞中包装成重组腺病毒,转染PC12细胞后能有效抑制TLR2基因的表达,为进一步研究TLR2在不同疾病中的免疫调节机制奠定重要基础。
- 张赟龚敏毕杨江伟喻琴李廷玉陈洁
- 关键词：TOLL样受体2SIRNA重组腺病毒载体免疫调节
- 构建稳定表达RFP及嘌呤霉素抗性的K562细胞株被引量：2
- 2011年
- 目的构建稳定表达红色荧光蛋白（red fluorescent protein，RFP）和嘌呤霉素（puromycin）抗性的K562．PM．RFP细胞株，便于慢性粒细胞性白血病研究中K562细胞的观察和筛选。方法采用PCR法获得RFP片段，将其插入到慢病毒pGC-FU-3FLAG-IRES—Puromycin载体中获得pGC—PM—RFP重组质粒，经脂质体转染到293T细胞中获得慢病毒LV—PM—RFP，有限稀释法检测慢病毒在293T细胞中的转染效率，用包装获得的慢病毒感染K562细胞，经嘌呤霉素筛选获得RFP阳性的K562-PM—RFP细胞株。结果PCR及测序结果证实目的基因RFP正确克隆至慢病毒质粒中，经慢病毒LV—PM-RFP感染的K562细胞能在嘌呤霉素抗性培养基中存活，并稳定表达RFP。结论成功构建了慢病毒重组质粒pGC—PM-RFP，并获得了携带RFP及嘌呤霉素抗性基因的K562-PM—RFP细胞株。
- 喻琴张赟毕杨陈洁杨军李廷玉
- 关键词：红色荧光蛋白嘌呤霉素人白血病K562细胞
- 沉默视黄酸核受体α损伤大鼠原代海马神经元的钙兴奋性被引量：1
- 2011年
- 目的:了解视黄酸核受体α(RARα)对大鼠神经元功能的必要性。方法:采用组织消化原代贴壁法分离培养大鼠原代海马神经元,利用腺病毒载体特异沉默RARα;利用Real-Time PCR分析沉默RARα对神经元视黄酸(RA)信号各受体以及神经细胞标志物的影响;利用活细胞钙影像分析沉默RARα对神经元钙兴奋性的影响。结果:免疫荧光显示,分离培养的细胞90%表达神经元标志神经元特异性烯醇化酶(NSE),腺病毒转染效率可达80%。PCR结果显示,RARα沉默后RARα表达降低75%(P<0.01),其他受体均显著降低(P<0.01),但RARβ显著上调(P<0.05)。活细胞钙影像显示,沉默组钙兴奋性显著降低(P<0.05),全反式视黄酸(ATRA)预处理24h能显著增强钙兴奋性(P<0.01)。结论:RARα的缺失能显著降低原代海马神经元的神经元标志物NSE的表达,并显著损伤神经元的钙兴奋性。
- 江伟喻琴喻琴龚敏张赟张赟陈立陈立瞿平魏小平刘友学
- 关键词：视黄酸基因沉默
