孙立石
- 作品数：10 被引量：34H指数：3
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- RhoC/ROCK-Ⅰ信号通路封闭对卵巢癌细胞生物学行为影响的研究被引量：4
- 2009年
- 目的:探讨RhoC/ROCK-Ⅰ信号转导通路的封闭对卵巢癌细胞体外生物学行为的影响。方法:RT-PCR及蛋白质印迹法检测RhoC及ROCK-Ⅰ在不同卵巢癌细胞系中mR-NA及蛋白的表达水平;将ROCK-Ⅰ反义寡核苷酸(ASODN)转染人卵巢癌细胞系SW626与Caov-3细胞后,检测转染前后ROCK-Ⅰ蛋白的表达,Boyden小室观察各株细胞转染前后侵袭及运动能力的变化,MTT比色法测定转染前后黏附能力的变化。结果:RhoC和ROCK-Ⅰ在4种卵巢癌细胞中呈不同程度表达,其中RhoC的表达水平与癌细胞侵袭力和迁移能力呈正相关,r=0.95,P<0.01,转染ROCK-ⅠASODN后,细胞内ROCK-Ⅰ的表达明显减少;细胞的侵袭能力受到明显的抑制,10μmol/L组和20μmol/L组SW626细胞的侵袭能力分别为对照组的(75.6±3.8)%和(54.7±2.9)%,Caov-3为(68.8±4.7)%和(50.0±4.5)%;转染两种浓度ASODN的SW626与Caov-3细胞的随机运动能力分别为对照组的(80.0±1.3)%、(63.7±1.9)%、(72.0±1.3)%和(55.9±2.5)%;定向运动能力分别为对照组的(83.9±1.4)%、(64.1±1.3)%、(72.5±3.4)%和(54.5±1.9)%。结论:RhoC/ROCK-Ⅰ信号转导通路与人卵巢癌细胞的体外侵袭与迁移密切相关,阻断ROCK-Ⅰ的表达可有效地抑制卵巢癌肿瘤细胞的体外侵袭能力。
- 洪振亚韩志强肖敏孙立石周晓曦卢运萍周剑峰
- 关键词：RHOC反义寡核苷酸
- 肿瘤相关基因fgfr3 mRNA在白血病细胞中的表达及其临床意义被引量：2
- 2008年
- 本研究旨在了解白血病细胞中fgfr3基因的表达水平及其和临床的关系。应用RT-PCR法检测4个白血病细胞系及96例白血病患者和14例对照者骨髓样本中fgfr3mRNA的表达,并分析了其与临床指标及染色体异常的相关性。96例白血病患者包括36例AML,29例ALL和31例CML。结果表明:fgfr3基因在K562和U937细胞中有表达,而在HL-60和SHI-1细胞中无表达。AL组和CML组fgfr3基因的阳性率(分别为46.15%和51.61%)与对照组相比,差异有统计学意义(p<0.05)。AML组和ALL组fgfr3基因的阳性率(分别为44.44%和48.28%)均高于对照水平,差异有统计学意义(p<0.05)。fgfr3基因的阳性表达与外周血高白细胞计数(≥20×109/L)呈显著性正相关(p<0.05)。ALL患者中fgfr3基因的表达与bcr/abl融合基因的异常呈显著正相关(r=0.151,p<0.05)。而AL患者fgfr3基因的阳性表达与染色体预后分组无显著相关性。结论:AL和CML患者均存在fgfr3基因的过表达,提示fgfr3基因可能参与了AL和CML的发病。
- 吴静怡黄亮熊婕曹阳孙立石刘文励周剑峰
- 关键词：肿瘤相关基因FGFR3MRNAHL-60U937SHI-1
- ROCK-I蛋白表达或活性的改变对人卵巢癌细胞运动表型的影响被引量：3
- 2007年
- 目的:探讨ROCK-I蛋白表达或活性改变对人卵巢癌细胞运动表型的影响。方法:将ROCK-I的反义寡核苷酸(ASODN)或其显性激活突变体p160Δ3用脂质体介导,转染人卵巢癌细胞系CAOV-3细胞,用RT-PCR与W estern blot印迹法检测转染前后ROCK-I和p160Δ3 mRNA和蛋白的表达;rhodam ine-phalloid in染色显示ROCK-I ASODN和p160Δ3对细胞骨架的影响;Transwell小室和划痕实验观察ROCK-I表达降低及其活性提高后卵巢癌细胞系CAOV-3运动能力的改变。结果:转染ROCK-I ASODN后,CAOV-3细胞内ROCK-I蛋白的表达明显减少,最大抑制率可达49%;转染的p160Δ3在细胞内获得有效表达。转染ROCK-I ASODN后CAOV-3细胞伪足消失,肌动蛋白纤维减少且变得无序,而转染p160Δ3后细胞伪足增多变长,肌动蛋白纤维亦明显增多,且沿细胞长轴分布。伤口愈合实验显示,ROCK-I ASODN明显抑制了CAOV-3细胞的迁移,p160Δ3则显著增强了其迁移能力;转染10μmol/L或20μmol/L ROCK-I ASODN后细胞的随机运动能力分别为其对照组的(72.0±1.3)%和(55.9±2.5)%,定向运动能力分别为其对照组的(72.5±3.4)%和(54.5±1.9)%;转染p160Δ3后,与对照组相比细胞的随机运动能力提高(38.7±1.2)%,定向运动能力提高(40.2±2.6)%。结论:ROCK-I蛋白表达或活性改变与人卵巢癌细胞CAOV-3的运动能力密切相关,ROCK-I可能成为治疗卵巢癌肿瘤细胞转移的新靶点。
- 韩志强洪振亚陈彩虹孙立石卢运萍周剑峰马丁
- 关键词：寡核苷酸类卵巢癌
- Ubiquitin B在宫颈癌细胞凋亡中的作用及机制的初步探讨被引量：3
- 2008年
- 目的:研究Ubiquitin B的过度表达对宫颈癌细胞凋亡的影响,并初步探讨其机制。方法:脂质体转染Ubiquitin B至宫颈癌细胞系HeLa细胞后,real-time PCR检测细胞内Ubiquitin B mRNA的表达水平;流式细胞术和DNA Ladder法检测其凋亡;PI法检测细胞周期变化;Western blot法检测凋亡相关蛋白Smad4和Mcl-1的表达。结果:转染Ubiquitin B后,HeLa细胞中Ubiquitin B mRNA的表达水平在转染24h后明显高于它在对照组细胞中的表达。与对照组相比,转染了Ubiquitin B的HeLa细胞凋亡显著增加。但Ubiquitin B的过表达对HeLa细胞的周期无明显影响。Western blot分析表明,凋亡相关蛋白Smad4在转染Ubiquitin B48h时表达增强,而Mcl-1表达明显减弱。结论:UbiquitinB可促进宫颈癌细胞系HeLa细胞凋亡,其机制可能是Ubiquitin B通过增强表达凋亡促进蛋白Smad4和降解凋亡抑制蛋白Mcl-1而促进了HeLa细胞的凋亡。
- 陈彩虹韩志强洪振亚孙立石卢运萍周剑锋马丁
- 关键词：UBIQUITIN泛素凋亡HELA
- 急性淋巴细胞白血病中肿瘤相关基因FGFR3 mRNA的表达及意义
- 2008年
- 目的了解急性淋巴细胞白血病(ALL)中FGFR3基因的表达情况及其和临床的关系。方法采用RT-PCR法检测了58例ALL和16例正常对照骨髓样本中FGFR3 mRNA的表达情况,并分析其与临床指标、融合基因及染色体异常的相关性。结果FGFR3基因在ALL各型中均有表达,ALL组(48.28%)的FGFR3基因表达与正常对照(18.75%)相比差异有统计学意义(P<0.05),而各型相比阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。FGFR3基因的阳性表达与患者年龄和外周血高白细胞计数(≥25×109/L)呈显著性正相关(P<0.05)。ALL患者中FGFR3基因的表达与Bcr/Abl融合基因及其对应染色体异常t(9;22)均呈显著相关性(P<0.05)。结论ALL中FGFR3基因的过表达提示其很可能参与了ALL的发病。
- 吴静怡黄亮熊婕曹阳孙立石刘文励周剑峰
- 关键词：急性淋巴细胞白血病FGFR3聚合酶链反应
- RhoC/ROCK-Ⅰ信号通路的过度激活对卵巢癌细胞恶性行为的影响被引量：2
- 2008年
- 目的探讨RhoC/ROCK-Ⅰ的过度激活对卵巢癌细胞生物学特性的影响。方法RT-PCR及Western blot检测RhoC及ROCK-Ⅰ在卵巢癌细胞SW626、Skov-3、A2780和Caov-3中mRNA及蛋白的表达水平;将携带ROCK-Ⅰ组成性激活突变体p160ROCK-ⅠΔ3的质粒(pCAG-myc-p160ROCK-ⅠΔ3)以脂质体介导,转染上述4株人卵巢癌细胞,划痕试验和Boyden小室检测转染前后4种卵巢癌细胞的体外迁移与侵袭能力的变化,MTT比色法测定p160ROCK-ⅠΔ3对细胞增殖能力的影响。结果RhoC和ROCK-Ⅰ在4种卵巢癌细胞中呈不同程度表达,其中RhoC的表达水平与癌细胞侵袭力和迁移能力呈正相关(r=0.95,P<0.01),转染pCAG-myc-p160ROCK-ⅠΔ3后,4株细胞的侵袭能力与对照组比较分别提高31.1%、33.0%、24.5%和39.4%;迁移能力分别提高33.9%、33.0%、25.0%和40.2%。各株细胞的增殖能力未显示出明显的变化。结论RhoC/ROCK-Ⅰ信号通路的活性与卵巢癌细胞的体外侵袭和迁移能力相关,ROCK-Ⅰ活性的提高可显著增强卵巢癌肿瘤细胞的体外侵袭和迁移能力。
- 洪振亚韩志强肖敏孙立石周晓曦卢运萍周剑峰
- 关键词：RHOC卵巢肿瘤肿瘤转移
- 多重巢式RT-PCR和染色体核型分析技术在急性髓系白血病中的联合应用被引量：11
- 2007年
- 背景与目的:细胞遗传学分析在白血病的诊断和预后判断中有重要价值,但常规显带不仅耗时,且难以获得良好的分裂相;而聚合酶链反应具有灵敏、快速的特点。本研究探讨联合应用多重巢式RT-PCR和染色体核型分析,对急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)中融合基因的表达及其在各亚型的分布和克隆性染色体异常的检出情况。方法:采用多重巢式RT-PCR技术对60例AML病例进行检测,其中37例同时进行染色体R或G显带。结果:60例AML患者中检出融合基因28例(46.7%),包括AML1/ETO、PML/RARα、CBFβ/MYH11、MLL基因异常(包括MLL/AF6、MLL/AF9、MLL/AF10、MLL/MLL)、DEK/CAN、TEL/PDGFR、AML1/MDS1(EVI-1)。同时进行染色体R或G显带的37例病例中有30例可供分析,其中14例(46.7%)检出染色体结构和数目异常;联合多重RT-PCR可使AML克隆性染色体异常检出率增至59.5%(22/37)。结论:联合多重巢式RT-PCR和染色体核型分析技术可以提高克隆性染色体异常的检出率。
- 黄亮李春蕊张恒孙立石刘文励周剑峰
- 关键词：急性髓系白血病染色体异常逆转录-聚合酶链反应核型分析
- 硼替佐米联用组蛋白去乙酰化酶抑制剂诱导血液肿瘤细胞凋亡的效率
- 2008年
- 目的探讨组蛋白去乙酰化酶（histone deacetylase，HDAC）抑制剂曲古菌素A（trichostatin A，TSA）、Apicidin与Bortezomib单药及联合应用对恶性血液病肿瘤细胞凋亡的影响。方法应用200～2000nmol／L TSA、Apicidin，5～80μmol／L Bortezomib分别处理恶性血液病肿瘤细胞株K562、SHI-1、Jurkat 24h，用流式细胞仪检测细胞凋亡。根据流式细胞术结果选取TSA 800nmol／L，Apicidin 400nmol／L分别与5～80μmol／L Bortezomib联合作用于K562细胞，TSA 1000nmol／L，Apicidin 400nmol／L分别与Bortezomib联合作用于SHI-1细胞，TSA 600nmol／L，Apicidin 600nmol／l，分别与Bortezomib联合作用于Jurkat细胞。以上药物作用24h后应用流式细胞仪检测细胞凋亡并绘制浓度-凋亡曲线。分别以Apicidin 200nmol／L，Bortezomib 20μmol／L及Apicidin 200nmol／L与Bortezomib 5μmol／L联用作用于K562细胞24h，用Western blot检测Bcl-XL蛋白的表达差异。结果TSA、Apicidin、Bortezomib均可促进K562、Jurkat、SHI-1细胞凋亡。TSA、Apicidin分别与Bortezomib联用，可导致K562、SHI-1细胞系凋亡率的明显提高，而对Jurkat细胞系没有明显影响。Bcl-XL蛋白在Apicidin与Bortezomib联用24h组较对照组及单一药物处理组表达水平明显下调。结论小剂量Bortezomib联合TSA或Apicidin应用于K562、SHI-1细胞系，可以明显提高细胞凋亡率，此时，TSA、Apicidin用量较用单药时显著减少。
- 孙立石洪振亚韩志强肖敏曹阳黄亮周剑峰
- 关键词：组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素AAPICIDIN硼替佐米细胞凋亡
- 非霍奇金淋巴瘤组织中FGFR3和VEGF的表达及其与血管生成的相关性被引量：7
- 2009年
- 目的探讨非霍奇金淋巴瘤(NHL)中FGFR3和VEGF的表达与临床预后及血管生成的关系。方法用免疫组化Envision法检测62例NHL和40例反应性增生淋巴结(RLH)组织中FGFR3、VEGF和CD105的表达情况。结果FGFR3在36例NHL组织中有表达,阳性率为58.06%(36/62)。而40例RLH组织仅有5%(2/40)表达FGFR3。CD105的表达在NHL和RLH组织中差异有统计学意义(P<0.05)。VEGF在NHL组织中高表达(75.81%),并与NHL的惰性或侵袭性分组和国际预后指数(International Prognostic Factors,IPI)呈显著相关(P<0.05)。同时FGFR3和CD105表达均与NHL的临床分期、结外侵犯和IPI呈显著性相关(P<0.05和P<0.001)。等级相关分析发现在NHL组织中FGFR3与VEGF和MVD均呈显著正相关(r=0.326,P<0.05和r=0.567,P<0.001)。结论NHL组织中FGFR3过表达及其与VEGF和MVD的正相关性提示FGFR3很可能通过上调VEGF促血管生成从而参与肿瘤形成。
- 吴静怡曹阳孙立石刘文励周剑峰
- 关键词：非霍奇金淋巴瘤FGFR3微血管密度CD105
- LCM联合快速免疫组化技术——一种获取肿瘤原位血管内皮细胞的可行途径被引量：3
- 2009年
- 目的肿瘤血管内皮细胞对肿瘤发生发展极为重要,是目前肿瘤研究的热点。本研究为从肿瘤组织原位获取高纯度血管内皮细胞进行基因表达研究摸索可行方法。方法获取淋巴瘤组织标本后,置于锌固定液中固定,并通过进行激光捕获显微切割(lasercapture microdissection,LCM)前操作模拟LCM环境,确定锌固定法对RNA完整性的保护作用。将组织标本制作冰冻切片,采用快速免疫组化染色方法标记血管内皮细胞,利用LCM技术获取肿瘤组织原位血管内皮细胞,并用RT-PCR方法对所获细胞进行纯度检测。结果无论是固定后直接提取组织RNA,还是经模拟LCM环境再提取RNA,均显示锌固定法对RNA完整性提供了良好保护。快速免疫组化可以明确标记血管内皮细胞,后者能够被LCM准确捕获,并经RT-PCR验证为高纯度的血管内皮细胞。结论快速免疫组化联合LCM技术可以从肿瘤组织原位获取高纯度血管内皮细胞,并保证RNA的完整性,可能为肿瘤血管内皮细胞基因表达研究奠定基础。
- 陶思汤多壮白向阳孙立石马丁孙汉英周剑峰
- 关键词：肿瘤血管内皮细胞激光捕获显微切割基因芯片
