孟锐锋
- 作品数：5 被引量：13H指数：2
- 供职机构：温州医学院基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省自然科学基金温州市科技局科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- HPV18 E7基因的原核表达及其在宫颈癌患者血清抗体中的检测被引量：1
- 2010年
- 目的研究人类乳头瘤病毒18型E7全长基因(HPV18 E7)在原核表达系统中的表达,及其作为特异性抗原在宫颈癌血清抗体检测中的意义,为HPV感染与肿瘤相关的血清学诊断研究奠定基础。方法PCR法扩增HPV18 E7全长基因,构建重组质粒pET32a(+)/HPV18 E7,转化表达HPV18 E7融合蛋白后经纯化、SDS-PAGE和Western blot分析鉴定。再以该融合蛋白作为诊断抗原,间接ELISA法检测宫颈癌、尖锐湿疣及健康对照三组血清特异性IgG抗体水平。结果HPV18 E7融合蛋白表达量约占菌体总蛋白的35.00%;宫颈癌、尖锐湿疣及健康对照组的血清特异性抗体均值分别为0.604±0.328,0.287±0.202和0.342±0.225,三组间差异有显著性意义(F=32.771,P<0.01);宫颈癌组与尖锐湿疣组及健康对照组的HPV18E7均值比较,差异均有显著性意义(P均<0.01),而尖锐湿疣组与健康对照组抗体均值比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论HPV18 E7融合蛋白具较强的抗原性,对宫颈癌诊断试剂的研究具有应用价值。
- 吴永琴陈军朱珊丽孟锐锋陆丽君张丽芳
- 关键词：HPV18宫颈癌ELISA血清特异性抗体
- 透明质酸酶在弓形虫重组融合抗原ROP2-P30基因免疫中的免疫增强作用被引量：1
- 2009年
- 目的:研究透明质酸酶在弓形虫重组融合抗原ROP2-P30基因免疫中的免疫增强作用,初步探讨透明质酸酶在提高质粒DNA分子免疫效应中的应用潜能。方法:弓形虫重组质粒pcROP2-P30联合透明质酸酶以及单独的重组质粒pcROP2-P30肌肉注射免疫BALB/c雌性小鼠,生理盐水和空质粒载体pcDNA3.1作阴性对照免疫,免疫3次,间隔3周。免疫结束后,以纯化的弓形虫重组蛋白ROP2-P30(rROP2-P30)为检测抗原,检测各免疫组小鼠血清中特异性抗体的形成;cell counting kit-8(CCK-8)检测免疫鼠脾细胞的增殖活性;硝酸还原酶法检测免疫鼠脾细胞培养上清中NO的含量。结果:pcROP2-P30+透明质酸酶免疫组特异性抗体生成水平显著高于其它免疫组(均P<0.01);pcROP2-P30+透明质酸酶免疫组小鼠脾细胞受特异性抗原rROP2-P30刺激后,其淋巴细胞的增殖明显高于单独的质粒pcROP2-P30免疫组(P<0.01);pcROP2-P30+透明质酸酶免疫组脾细胞培养上清中免疫活性分子NO的含量也显著升高(均P<0.01)。结论:透明质酸酶在提高弓形虫DNA免疫效应方面显示了免疫增强作用,具有发展成为基因免疫的免疫佐剂的潜能。
- 李文姝孟锐锋张丽芳朱珊丽闵太善
- 关键词：透明质酸酶弓形虫免疫增强
- 沙眼衣原体感染小鼠生殖道模型的初步研究被引量：6
- 2011年
- 目的建立沙眼衣原体（C￡）小鼠生殖道感染模型。方法分别用10。、10‘、10。数量IFU的CtE型株阴道内接种雌性BALB／c小鼠，观察外阴炎症反应，检测排菌情况，PCR检测分泌物及对组织进行病理观察。结果接种后第5d，实验组小鼠即出现感染迹象；在接种后的5～20d均可在小鼠生殖道分离得到具感染性的c≠，但其持续排菌时期与接种的IFU数量成正比；且小鼠生殖道排菌量（IFU）与接种的IFU数量亦成正比，以10。剂量组为高；小鼠生殖道分泌物PCR扩增后电泳，可见与CtMOMP分子量相当的产物；小鼠生殖道组织切片观察证实，c￡E型株感染小鼠生殖道可产生生殖道炎症。结论成功建立了小鼠生殖道E型c￡感染模型；10。IFU是建立模型的适宜感染量。
- 王乐丹颜林志孟锐锋张丽芳
- 关键词：沙眼衣原体动物模型生殖道感染
- 密码子优化的HPV6b L1 DNA诱导BALB／c小鼠产生增强的免疫应答
- 2009年
- 目的探讨真核细胞偏好密码子优化对人乳头瘤病毒（human papillomavirus，HPV）6b型L1 DNA诱导BALB／c小鼠特异性体液和细胞免疫应答的增强效应。方法利用PCR从尖锐湿疣组织中扩增HPV6b L1基因，将其克隆至真核表达质粒pcDNA3．1（＋），构建野生型pcDNA3．1（＋）／HPV6bLl（wt）并进行鉴定；同时，对HPV6b L1基因进行真核细胞偏好密码子优化，进一步通过重叠PCR的方法获得全长基因，构建密码子优化的重组质粒pcDNA3．1（＋）／HPV6bLl（rood．）并进行鉴定。将6～8周龄雌性BALB／c小鼠分成4组，分别肌肉注射3次pcDNA3．1（＋）／HPV6bLI（mod．）、pcDNA3．1（＋）／HPV6bL1（wt）、pcDNA3．1（＋）载体和PBS，间隔2周，每次剂量为150μg／鼠。分别于免疫前和免疫后每隔2周，收集血清，用间接ELISA检测血清IgG抗体；并于第8周取小鼠脾细胞，采用乳酸脱氢酶释放法，按效应细胞与靶细胞之比（E：T）为5：1、10：1、20：1进行免疫小鼠特异性CTL杀伤活性检测。结果成功构建了密码子优化的HPV6b L1重组质粒。小鼠免疫后血清特异性IgG抗体水平随着免疫时间和次数的增加而升高。pcDNA3．1（＋）／HPV6bLl（mod．）组血清IgG抗体在第8周达到高峰，与pcDNA3．1（＋）／HPV6bLl（wt）、载体和PBS对照组相比差异均有统计学意义（t=18．138、t=29．140、t=30．840，P值均〈0．01）；而pcDNA3．1（＋）／HPV6bLl（wt）组与载体和PBS组比较差异也有统计学意义（t=20．072、t=22，457，P值均〈0．01）。在特异性CTL杀伤实验中，当E：T分别为5：1、10：1、20：1时，pcDNA3．1（＋）／HPV6bLI（mod．）组的脾细胞特异性CTL杀伤率明显高于pcDNA3．1（＋）／HPV6bLl（wt）组（t=11．892、t=15．329、t=2．911，P值均〈0．05）、载体组（t=12．936、t=16．613、t=13．901，P值均〈0．01）和PBS对照组（t=14．768、t=18．935、t：10．925，P
- 陆丽君石朝辉孟锐锋朱珊丽肖敏张丽芳
- 关键词：密码子抗体生成
- EB病毒膜蛋白家兔免疫血清的制备及其特性研究被引量：5
- 2009年
- 目的:制备高效价EB病毒膜蛋白抗体,并对其效价及其与EBV结合的特异性进行鉴定。方法:将B95-8细胞培养至3×105/mL时,超声破碎,纯化获得EB病毒膜蛋白抗原;EB病毒膜蛋白抗原经弗氏佐剂乳化,在家兔背部皮下多点免疫注射,间隔2周免疫,共3次,并分别于免疫前和每次免疫后1周取兔血清,检测兔免疫血清抗体IgG;进一步采用Western blot检测制备的血清抗体与EBV结合的特异性,同时采用ELISA法检测兔血清抗体水平及各周抗体滴度的变化趋势。结果:所有家兔在全程免疫后都产生了高效价膜蛋白的特异性抗体,最高滴度达1:6400。结论:用B95-8细胞制备的EB病毒膜蛋白抗原免疫家兔,可成功制备高效价的特异性血清抗体,为EB病毒膜蛋白抗原的免疫学检测奠定了基础。
- 陆丽君孟锐锋国强朱珊丽张丽芳
- 关键词：EBV免疫性
