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应晓阳
应晓阳
作品数:
1
被引量:1
H指数:1
供职机构:
大连医科大学附属第一医院
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发文基金:
辽宁省自然科学基金
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相关领域:
医药卫生
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合作作者
王业伟
大连医科大学附属第一医院
王一
大连医科大学附属第一医院
李梅凤
大连医科大学附属第一医院
方美云
大连医科大学附属第一医院
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2010
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反义寡核苷酸及RNA干扰靶向人类端粒酶反转录酶的效果比较
被引量:1
2010年
目的观察反义寡核苷酸(ASODN)、RNAf扰(RNAi)两种方法对端粒酶的抑制效应。方法设计合成寡核苷酸及siRNA链,两者均在脂质体介导下转染K562细胞,RNA干扰采用直接转染后筛选高效链,质粒载体构建,再转染后分析效果。结果合成3条siRNA链,直接转染后,检测hTERTmRNA表达,发现第一、第二条链有效,第三条链无效,人端粒酶反转录酶(hTERT)mRNA表达抑制仅维持48h,72h即恢复。筛选两条链构建质粒载体,转染后P.1组作用48h后hTERTmRNA为0.39±0.13,72h为0.57±0.32,P-2组48h为0.554-0.20,72h为0.884-0.23,端粒酶相对活性P-1组48h为0.424-0.07,72h为0.314-0.08,P-2组48h为0.49±0.27,72h为0.394-0.03。siRNA的最佳作用浓度为:100μmol/L。反义寡核苷酸以0.6μmol/L浓度组抑制作用最佳,24h后hTERTmRNA为0.42±0.16。48h为0.71±0.18。端粒酶相对活性24h为0.52±0.002,48h为0.482±0.018。结论靶向hTERT的反义寡核苷酸和RNA干扰均可以抑制hTERTmRNA表达,从而抑制端粒酶活性,抑制效果与靶位点选择密切相关。RNA干扰效果优于反义寡核苷酸,前者不仅表现为抑制效率高,且持续时间长。质粒载体构建后的RNA干扰优于化学合成后直接转染的RNA干扰。
方美云
李梅凤
应晓阳
王一
王业伟
关键词:
RNAI
反义寡核苷酸
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