张云
- 作品数：17 被引量：42H指数：3
- 供职机构：吉林农业大学更多>>
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- 马铃薯微型种薯繁殖技术被引量：1
- 2017年
- 马铃薯微型种薯繁殖技术可解决种薯退化、产量低、病虫害多等问题,可极大地促进中国马铃薯产业发展,但存在繁种周期较长、生产成本较高等问题。而采用脱毒马铃薯切断技术则可解决这些问题。
- 杨美军李爽李婷婷张云王振钰曾滢韩玉珠
- 关键词：马铃薯产业繁殖技术微型种薯脱毒马铃薯种薯退化产量低
- 牛病毒性腹泻—黏膜病病毒E0基因和E0-E2融合基因重组卡介苗的构建及免疫原性分析
- 牛病毒性腹泻-黏膜病（Bovine viral diarrhea-mucosal disease，BVD/MD）是由牛病毒性腹泻-黏膜病病毒（Bovine viral diarrhea virus，BVDV）引起的一种可...
- 张云
- 关键词：重组卡介苗E0基因免疫原性分析
- 文献传递
- 牛病毒性腹泻-黏膜病的流行现状和诊断技术研究进展被引量：5
- 2014年
- 牛病毒性腹泻-黏膜病是由黏膜病毒所致的一种接触性传染病,呈世界性分布,可引起牛慢性、急性和黏膜性感染,对牛、鹿、羊、马等产生严重的危害,严重阻碍我国乃至世界养殖业的发展。但到目前为止,国内外对该病尚无有效的治疗药物或治疗方法。本文对牛病毒性腹泻病的流行现状及现有诊断技术进行综述,为该病的预防和诊断提供参考。
- 李健明冯海峰时坤杨宇航张云杜锐
- 关键词：牛病毒性腹泻-粘膜病
- 牛病毒性腹泻—黏膜病病毒C_(24)V株E_0截短基因密码子优化及其在卡介苗中的表达被引量：2
- 2014年
- E0基因编码的蛋白是牛病毒性腹泻—黏膜病病毒(BVDV)的主要保护性抗原之一,其是研制BVDV基因工程疫苗的候选者。E0基因在卡介苗中难以表达,已有研究结果表明E0蛋白具有RNase活性。根据卡介苗密码子使用频率分析E0基因,发现其有多个稀有密码子。通过对该基因截短和密码子优化,在卡介苗中表达E0基因,检测到了E0蛋白的抗原活性,为构建可同时预防结核和牛病毒性腹泻—黏膜病的二价基因工程疫苗奠定基础。
- 张云郝俊伟刘红娜王文玉杨宇航时坤李健明杜锐
- 关键词：牛病毒性腹泻E0基因密码子重组卡介苗
- 牛病毒性腹泻-黏膜病病毒E_0-E_2融合基因的构建及其在卡介苗中的表达被引量：4
- 2014年
- 为提高牛病毒性腹泻-黏膜病病毒基因工程疫苗的免疫效力,运用重叠延伸PCR法将E0、E2截短基因进行融合后亚克隆至PMV361载体上,重组质粒经酶切和PCR鉴定后电转化入BCG中。构建的重组卡介苗经45℃热诱导2 h后,进行SDS-PAGE分析和Western blotting检测。结果表明:E0-E2融合基因在卡介苗中获得了表达,目的蛋白大小为66.5 kD,且具有反应原性。该重组卡介苗的构建为牛病毒性腹泻-黏膜病和结核病的防制奠定了基础。
- 张云时坤李健明杜锐
- 关键词：重组卡介苗
- 牛病毒性腹泻病毒E2截短基因重组卡介苗安全性和最佳免疫剂量的研究被引量：1
- 2014年
- 将6组BVDV-E2截短基因重组卡介苗用生理盐水稀释,分别进行革兰染色和伊红美蓝平板检测,6组重组卡介苗均无杂菌污染。再对6周龄～8周龄雄性豚鼠进行免疫接种,每只腹腔注射1mL（5×106 cfu/只）,免疫接种豚鼠无任何症状,精神、食欲、排便及发育等均不受影响,且无死亡,说明重组病毒对试验豚鼠是安全的。使用BVDV抗体检测试剂盒对60头健康牛的母源抗体含量进行检测,不含母源抗体占85.00%。取重组卡介苗中的一组,用生理盐水稀释,使重组卡介苗达到105、106、107、108、109 cfu/mL共5组,每组不含母源抗体的牛3头,免疫接种前对每头牛进行尾颈静脉采血,析出血清,用BVDV抗体检测试剂盒测牛血清中抗体水平。采完血后对牛进行皮下免疫接种,4周后,采取血液,检测牛血清中抗体水平。通过免疫接种后的检测结果可知,重组疫苗对牛最佳免疫剂量为108 cfu/mL,为进一步进行重组疫苗回归本动物的免疫效果研究提供了可靠依据。
- 杨宇航李晶张云郝俊伟刘东旭时坤李健明曾范利杜锐
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒重组卡介苗安全性
- 牛病毒性腹泻病毒E2基因优化表达重组卡介苗的免疫试验被引量：2
- 2014年
- 为评价牛病毒性腹泻病毒(BVDV)E2基因优化表达重组卡介苗(rBCG)对小鼠的免疫效果,分别用已构建的pMV361-E2-1、pMV361-E2-2、pMV361-E2-3、pMV361-E2-4、pMV361-E2-5、pMV361-E2-6重组卡介苗,pMV361空载体,卡介苗,BVDV灭活疫苗和生理盐水对小鼠进行免疫接种,检测各免疫组血清中特异性抗体效价、T淋巴细胞增殖程度和CD4+、CD8+和IL-12的水平,以评价其免疫效果。结果显示,6组重组卡介苗均能够引起小鼠产生BVDV特异性抗体,促进致敏T淋巴细胞增殖,免疫小鼠血清CD4+、CD8+和IL-12的水平均高于对照组,pMV361-E2-1重组卡介苗在诱导小鼠产生BVDV抗体方面要优于其他各组基因重组卡介苗。结果表明,BVDV E2基因不同片段的重组卡介苗均可诱导免疫小鼠产生特异性的体液免疫和细胞免疫,这为BVDV基因工程疫苗的研制奠定了基础。
- 曾范利张云张梦时坤李建明郝俊伟孙凡婷杜锐
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒E2基因重组卡介苗免疫
- 鹿布鲁菌分型实时荧光定量PCR检测方法的建立
- 2014年
- 鹿布鲁菌病主要是由牛型、羊型和猪型布鲁菌引起的,其他感染型少见,本研究依据布鲁菌的特异性基因BruAB20168、BMEII0466、BR0952上的部分高度保守片段设计猪型、牛型、羊型引物和探针,用于检测并区分鹿源布鲁菌的种型,且优化了反应体系,筛选出引物、探针的最优浓度配比。将扩增产物连接到pUC57载体上,制备标准品及标准曲线,建立鹿布氏菌各分型荧光定量PCR检测方法,并对其特异性、稳定性、敏感性进行评价。由标准曲线敏感性可知该方法的最低检测浓度分别可达到12、9、8copies/μL,比常规PCR灵敏度高出很多。
- 郝俊伟时坤曾范利李健明王文玉杨宇航刘红娜张云张秀丽杜锐
- 关键词：布鲁菌实时荧光定量PCR
- 牛病毒性腹泻-黏膜病病毒E2基因在卡介苗中的优化表达被引量：3
- 2014年
- 为构建牛病毒性腹泻-黏膜病病毒(BVDV)基因工程活载体疫苗,根据已知的BVDV Changehun184毒株E2基因序列,利用DN.AStar生物学软件对其进行分析,预测了可能存在的抗原表位,设计6对引物,分别扩增了包含预测抗原位点的6个片段,1—297 aa、1—345 aa、1—374 aa、45—297 aa、45—345 aa和45—374 aa,克隆至穿梭表达载体pMV361中,经酶切、PCR扩增和测序证实已正确插入到表达载体中,构建了6个原核表达质粒。阳性重组质粒通过电转化到卡介苗(BCG)感受态中,热诱导后,进行SDS-PAGE分析和免疫印迹检测。结果表明6个重组质粒在卡介苗中均有不同程度的表达,表达产物与理论推测的相对分子质量一致。Western blot结果显示其融合蛋白能被牛抗BVDV的阳性血清识别,具有相应的反应原性。本研究为进一步研究BVDV基因工程活载体疫苗奠定了基础。
- 曾范利张云张梦时坤李建明刘菲李晶杜锐
- 关键词：卡介苗
- 牛病毒性腹泻病毒E_0-E_2融合基因重组卡介苗的构建被引量：1
- 2015年
- 为了增强重组卡介苗对牛病毒性腹泻黏膜病的免疫效果,本研究将敲除疏水氨基酸及密码子优化的E0基因与去除了C末端的疏水序列E2截短基因采用重叠延伸PCR的方法进行融合后,将其分别与p MV261/p MV361载体连接,电转化至卡介苗中,构建重组卡介苗。45℃热诱导重组卡介苗表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blotting分析。结果证明E0-E2融合基因在卡介苗中成功表达,目的蛋白大小为66.5 ku,且具有反应原性。
- 孙凡婷张云张妍李晶刘菲刘杨杜锐
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒重组卡介苗
